细胞冻存盒使用方法

Ⅰ 存储细胞样本用什么液氮罐比较好

你好，好高兴回答你的问题。一般来讲，1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用完全培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；
再总结一句，一般细胞在-80℃存放半年左右，在液氮里可以放置更长时间细胞可以放在冻存管里，吊在液氮罐里，如果存放的数量多，可以选择使用液氮罐提篮（大口径液氮罐另配）。天驰液氮罐 工作人员建议，细胞株的冻存方法可按以下步骤操作：
（1）取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。
（2）在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。
班德液氮罐介绍：液氮罐储存样品使用注意事项有以下几点：
1. 本液氮罐采用冻存盒储存样品。
2.桶壁为高强度铝合金制作，但要防止猛烈碰撞。
3. 后部上方有一黑色塑料盖，内为罐体真空夹层密封口，请勿挤压。
4. 测量液氮液面请用随机配备的测量尺。
5. 液氮罐上配有报警器，请定期检查电池是否有电，电池为常用九伏电池。如更换电池请注意勿扯拉探头连线，以防止线头扯断造成报警失灵。
6. 建议定期用测量尺检查液氮面,以防止报警器失灵造成样品损坏。
7. 建议每次取样品和加液氮应作详细记录以防止漏加(液氮罐为满罐状态，液氮挥发量最小)
你好，好高兴回答你的问题。一般来讲，1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用完全培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；
再总结一句，一般细胞在-80℃存放半年左右，在液氮里可以放置更长时间细胞可以放在冻存管里，吊在液氮罐里，如果存放的数量多，可以选择使用液氮罐提篮（大口径液氮罐另配）。天驰液氮罐 工作人员建议，细胞株的冻存方法可按以下步骤操作：
（1）取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。
（2）在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。

Ⅱ 细胞冻存盒中的异丙醇的作用是什么为什么可以直接放在负80的冰箱中，自己就可以缓慢降温呢 缓慢

会有些影响,在活率方面.70%的细胞应该没问题. 1）传统方法:冻存管置于4℃ 40min--->-20℃ 30min--->-80℃ 16～18h (或隔夜)--->液氮中长期储存. 注意：-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些. （2）程序降温：利用已设定程序的程序降温仪以-1～-3℃/min的速度由室温降至（-80℃以下）-120℃,再放在液氮中长期储存.

Ⅲ 怎样才是正确的液氮罐使用方法呢

将液氮罐内装好液氮，确定液面到所需的位置。然后将需要冻存的样品放在冻存盒内，做好标记，放置于冻存架(多层提篮)上，插好固定插销放入液氮罐中。

低液位报警器可用于液氮低液位报警，液氮液位监控器采用了智能化设计，具有液氮液位声光预警、报警，温度显示，自动补液，数字温度调节、校准等功能。将报警装置的探头固定在其中一个冻存架上，探头的位置一般在有冻存盒的最上面位置，这样，当液面低于探头的位置，报警装置发出报警声，提示添加液氮，这样可以保证足够的液氮，确保细胞或样品的冻存效果

Ⅳ 细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

一、细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

二、细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

三、细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

注意事项

（1）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（2）细胞污染的预防

①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。

②操作过程防止污染。

③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。

④实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。

⑤进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。

⑥细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。

⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的污染。

⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。

⑨不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。

⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（3）防止细胞交叉污染

①在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。

②在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。

③所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。

(4)细胞冻存盒使用方法扩展阅读：

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

Ⅳ 细胞冻存盒掉大液氮罐里面去了怎么办

冷冻管因为里面有东西，所以很难浮上来，我们都会用长把的钳子夹上来，前提是您的开口足够还要有光，不然看不到，就只能用完了，但是因为是储存式的液氮罐，所以不可能用完的，，推荐你劲量夹子夹上来，或者把里面的东西转移到另一个液氮罐，然后再去夹，之后再转移回来，，注意：不要将冷冻的东西空气暴露太久，毕竟温差太大，

Ⅵ 我把需要冻存的细胞放 在-20度忘记拿到-80，放了10多天，还有活的希望吗BxPC-3

如果没有冻存盒，应该是先放4度12h，-20度12h，然后-80度，一个月内液氮保存。你可以先复苏试试。

Ⅶ 动物细胞培养中细胞如何冻存

细胞冻存的原则是：冻存缓慢降温，复苏快速升温。不同的动物细胞稍微有点不同，下面是一般的方法：
（一）细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、；
3. 离心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/
min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
（二） 细胞复苏
1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；
3. 离心， 1000rpm，5min；
4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；
5. 次日更换一次培养液，继续培养。

Ⅷ 放入冻存盒中的细胞还需放入4度预冷么

细胞的冻存和复苏一般是遵守“慢冻快融”.常规的慢冻方法是：1.先将冻存管放入4℃冰箱,约40min.2.接着置于-20℃冰箱,约30～60min.3.置于-80℃超低温冰箱中放置过夜.4.置于液氮罐中长期保存.

Ⅸ 细胞在液氮罐里怎么储存

细胞可以放在冻存管里，吊在液氮罐里，如果存放的数量多，可以选择使用液氮罐提篮（大口径液氮罐另配）

Ⅹ 正常肝细胞株hl7702多少钱

人肝脏细胞HL7702，只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。
细胞描述：
HL7702细胞，又叫L02细胞，正常人肝细胞，叶秀珍于1982年建系。
HL7702细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。

质量控制：
本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。

培养条件：
37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，无菌恒温培养。

细胞相关操作（注意：细胞操作都需严格按照无菌操作）
收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：
1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；
2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉；
3. 将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养4-6小时；
4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；
5. 重新将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养过夜；
6. 第二天传代。

收到冻存细胞的处理方法：
1.37°C水浴预热培养基；
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；
5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧)；
6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

细胞传代
1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；
2.37°C水浴预热培养基；
3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；
4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；
5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；
6.将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；
7.弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；
8.将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养。

细胞冻存
1.37°C水浴预热培养基；
2.消化细胞后给细胞计数:
1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区；
2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；
3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；
4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2；
这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3计数池内，1cm3=1ml，将四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。
5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。
注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。
3.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。
4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min。
5.弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×106/ml。
6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。
7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20°C放1-2h后，-80°C过夜，然后快速转移到液氮中。