① 在家兔实验性dic实验中,影响实验成败的最重要因素是什么实验报告实验讨论
家兔急性弥漫性血管内凝血
家兔弥漫性血管内凝血
摘要:
目的:复制急性实验性DIC动物模型,通过血浆鱼精蛋白副凝试验、纤维蛋白原定量、血小板计数所测的几项血液学实验结果,讨论急性DIC的发病机制,并初步了解检查急性DIC的几项血液学的常规方法。
方法:通过给家兔耳缘静脉缓慢注射兔脑粉制作急性实验性DIC动物模型,测定家兔注入兔脑粉前5分钟、注入兔脑粉开始后10分钟及40分钟后3P实验、纤维蛋白原定量和BPC的血液学实验结果并比较。
结果:DIC前后血压、呼吸频率、血小板计数、3P试验、纤维蛋白原定量。
结论:DIC为促凝物质大量入血引发凝血系统被激活,凝血因子和血小板大量消耗,继发纤溶系统激活,进而发生出血综合征。
关键词:弥漫性血管内凝血;家兔DIC模型;血浆鱼精蛋白副凝试验;纤维蛋白原定量;血小板计数
前言:弥漫性血管内凝血是指在某些致病因子作用下凝血因子或血小板被激活,大量可溶性促凝物质入血,弥漫性微血管内血栓形成,继之因凝血因子及血小板被大量消耗及纤维蛋白溶解亢进而发生的出血综合征。临床上,DIC患者主要表现为出血、休克、脏器功能障碍和贫血。
实验室检查是DIC诊断的一项重要依据,有确诊意义的化验能直接反映凝血酶或纤溶酶活性。 基于此,为了了解DIC的血液学变化和发病机制,初步了解检查急性DIC的几项血液学的常规方法,我组进行了本次实验。
1. 实验材料:
1.1 动物:健康、清洁家兔一只(母,1.95kg,南方医科大学实验动物中心提供)
1.2 器材:电热恒温水浴箱,秒表,小试管架,5ml试管×8,血细胞计数版,离心机,分光光度计,显微镜,注射器(1ml一支,5ml一支,10ml一支,50ml一支),加样枪,2ml离心管×6,家兔手术台,哺乳动物手术器械,手术线,纱布,粗剪,止血钳,组织剪,眼科剪,眼科镊,动脉夹。
1.3 药品和试剂:4%兔脑粉生理盐水浸液,1%硫酸鱼精蛋白液,血小板稀释液,20%乌拉坦,0.1%肝素生理盐水,生理盐水,饱和氯化钠溶液。
1.4 仪器设备:PcLab计算机生物信号采集处理系统,压力换能器,动静脉插管,三通管
2. 测量指标:
2.1 凝血系统指标:血小板计数、纤维蛋白原定量
2.2 纤溶系统指标:鱼精蛋白副凝试验(3P试验)
3. 实验动物的制备方法及步骤:
3.1 动物麻醉固定备皮:挑选家兔,捉拿,称量体重(Kg),按家兔体重计算麻醉量(20%乌拉坦5ml/kg),耳缘静脉缓慢注射,待家兔四肢肌肉松弛,疼痛反射、角膜反射消失,呼吸平稳后,将其固定于手术台上。用粗剪去除家兔颈部兔毛。
3.2 静脉插管:沿家兔颈正中线切开皮肤,钝性分离右侧颈静脉,穿双线,闭夹近心端,结扎远心端,剪开静脉插入预先充满生理盐水的压力换能器的导管。
3.3 动脉插管:钝性分离出左颈总动脉,穿双线,结扎远心端,夹闭近心端,剪开动脉插入预先充满生理盐水并与PcLab数据采集系统通过压力换能器相连的导管。 待各项指标稳定后,观察并记录正常血压、呼吸。
3.4 取血样本:用充有0.4ml 0.1%肝素生理盐水的5ml注射器经颈总动脉取血3ml,分两管,测定正常指标:3P试验,纤维蛋白原定量,血小板计数。
3.5 复制DIC模型:经颈静脉缓慢注射4%兔脑粉溶液(3ml/kg),注射速度为1~2ml/min。
3.6 15min后测定并记录血压、呼吸,采血测定3P试验、纤维蛋白原、血小板计数并记
录。
3.7 45min后重复上述测量一次并记录。
4. 试验项目:
4.1 血小板计数(BPC):吸血小板稀释液0.38ml于一小试管内,用血红蛋白吸管取血20
μl,立即加入血小板稀释液内,充分摇匀后,用滴管将上述混悬液一小滴滴入计数板内,静置5min后,用高倍镜计数5个中方格内血小板数,乘以1000,得每立方毫米血小板数。
4.2 血浆鱼精蛋白副实验(3P试验):取血浆0.4ml置于小试管内,加入1%硫酸鱼精蛋白
液0。1ml,混匀,室温下静置30min,于观察终点前,将试管轻轻摇动,有白色纤维或凝块为阳性,均匀浑浊、无白色纤维为阴性。
4.3 纤维蛋白原定量(饱和盐水法):
4.3.1取血浆3ml置于试管中,加入饱和氯化钠溶液2.7ml,充分混匀,置37℃水浴中
孵育3min
4.3.2以生理盐水代替饱和氯化钠溶液,进行同样操作,作为对照管。
4.3.3以对照管调零,测出光密度(波长520mm)后,计算纤维蛋白原含量。
5. 实验结果:
表1 DIC前后家兔各项指标的观察与记录
血压
(mmHg)
150/130 正常状态
DIC后15min 95/82
DIC后45min 65/46 呼吸频率 (次/分) 57 66 80 血小板数量 (109/L) 160 86 60 纤维蛋白原定量 (g/L) 0.2 1.62
② 夹一侧颈总动脉,减压神经对血压的影响
动脉血压的神经体液调节及药物的影响
【目的】 通过观察神经、体液因素及药物等对动脉血压的作用及影响,加深理解动脉血压作为心血管功能活动的综合指标、及其相对恒定的调节原理和重要意义。学习大动物实验的基本方法和技术。
【实验原理】 动脉血压是心血管功能活动的综合指标。正常心、血管的活动在神经、体液因素的调节控制下,保持相对稳定,动脉血压相对恒定。因而通过改变神经、体液因素或施加药物,观察动脉血压的变化,以间接反映诸因素对心、血管功能活动的调节及影响。动脉血压的相对恒定对于保持各组织、器官正常的血液供应和物质代谢是极其重要的,动脉血压的剧烈变化会显着影响各组织、器官的正常活动。当动脉血压大大降低时,会造成组织、器官的血供严重不足,功能障碍,甚至危及生命,此时需要及时救治。
心脏受交感神经和副交感神经(迷走神经)的双重支配。交感神经兴奋通过其末梢释放的去甲肾上腺素(norepinepherine,NE)与心肌细胞膜上的b1受体结合,引起心率加快、心肌收缩力增强,心输出量增加,血压升高。迷走神经兴奋通过其末梢释放的乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)与心肌细胞膜上的M受体结合,引起心率减慢、心房肌收缩力减弱,心输出量减少,血压降低。
绝大多数血管受交感神经支配。交感缩血管神经兴奋通过其末梢释放的NE与血管平滑肌上的a受体结合,引起血管收缩,循环外周阻力增大,血压升高。反之,交感缩血管神经的紧张性降低,血管舒张,循环外周阻力减小,血压下降。
本实验通过切断、刺激支配心、血管的神经以及给药或体液因素等方法,除可直接观察心率、心脏收缩力及缩血管效应外,还可通过观察动脉血压的变化间接了解心、血管活动的变化情况。
【实验器材和药品】
1.动物 家兔。
2.器材 兔手术台、捕绑固定用绳、哺乳类动物手术器械、纱布、搪瓷碗、盛毛筒、量筒、手术灯、动脉插管、股动脉插管、动脉夹、血压换能器、石蜡油、多道生理记录仪或计算机记录分析系统、心电图记录导线、双凹夹、铁支架、保护电极、电子刺激器、2ml注射器、5ml注射器、20ml注射器、有色丝线、棉线、20%氨基甲酸乙酯、肝素(1000单位/毫升)、5%柠檬酸钠、1:1万肾上腺素、1:1万去甲肾上腺素、生理盐水、1%肝素生理盐水、0.1%多巴胺、1:10万异丙肾上腺素、2.5%妥拉唑林、0.1%普萘洛尔。
【实验步骤和方法】
1.实验装置 计算机Biolap98软件系统的使用:打开计算机,显示windows桌面。点击图标“biolap98”,进入BL-310智能型生物信号显示与处理系统。点击“可进行生理、药理、毒理、病理等实验”,进入主画面。点击菜单“输入信号”栏,选择通道1及标Ⅱ导联显示动物心电,通道2显示压力曲线;点击菜单“显示方式”栏,选择双通道显示方式。调节增益至100左右,时间常数为“DC”,滤波用“1kHz”。
如用多道生理记录仪,则打开电源后,校正两个通道的扫描电压,并调节增益至适当位置。打开记录仪,调节描笔的位置,校正描笔的摆动幅度。
电子刺激器的准备 打开电源,选择“连续”刺激方式,波宽为0.5ms,电压为2~3V,频率为16Hz。将刺激电极连接于刺激器。
检查血压换能器,用石蜡油将其充满,将换能器三通管与动脉插管的导管相连,将换能器导线与计算机或多道生理记录仪相连。
2.准备动物 秤重后,用20%氨基甲酸乙酯按每公斤体重1克的剂量从耳缘静脉缓慢注入,动物麻醉的标志为四肢松软,角膜反射消失。麻醉后用绳子将动物背位固定于手术台上,打开手术台底部的电灯保温。剪去颈部手术野的毛以便施行手术。
3.手术 沿颈部正中线切开皮肤6~7厘米,用止血钳沿正中线分离皮下组织及肌肉(胸舌骨肌),暴露出气管。用两把组织钳分别夹住气管两侧的皮肤和肌肉的边缘,并将其拉向两侧,即可见到气管两侧与气管平行的左、右颈总动脉及与其相伴而行的一束神经,这束神经中包括迷走神经、交感神经和减压神经。由于神经被包绕于动脉鞘中,所以应小心分离颈动脉鞘,仔细辨认三条神经。迷走神经最粗,交感神经较细,减压神经最细且常与交感神经紧贴再一起。一般先分离颈总动脉与迷走神经,然后分离减压神经与交感神经。每条神经各分离出2~3厘米,并在各神经下穿一条不同颜色的丝线以便区别和使用。右侧颈总动脉下穿一条线备用,左侧颈总动脉用于血压测量,在其远心端(头端)和近心端各穿一条线备用。
图14-1 兔颈部血管、神经的解剖位置
4.插动脉插管 插管前先用肝素生理盐水注满插管,检查插管有无破裂,插管尖端是否光滑,不光滑时要用砂纸磨搽。再次钝性分离左颈总动脉,尽可能长的向头端分离,然后结扎动脉头端。用动脉夹(与动脉垂直并处于水平位置)夹住动脉的近心端,在尽可能长的靠远心端处用眼科剪将动脉剪开一斜口,约剪开管径的一半,然后将动脉插管向心脏方向插入动脉,用已穿好的线结扎紧插入动脉的插管,并将同一结扎线固定于插管壁。在插管的适当位置固定插管并使其与动脉的走向一致,以防止插管刺破动脉。
向耳缘静脉内注射肝素以抗凝,每公斤体重1000单位。注射后一分钟左右即可打开、移去动脉夹,此时即可见血液冲入动脉插管,同时在显示器上可见有压力波动图象,打开记录仪可记出压力搏动曲线。
5.心室搏动观察装置 将带有小旗的针灸针于胸骨柄下缘左侧垂直刺入,直至小旗随心室搏动而摇动为止,表明针尖已刺入心室肌。
6.心电引导 将心电引导线与针灸针相连接,然后将针灸针刺入动物各肢体末端并固定,在显示器上可观察到心电图象,作为心率、心律的观察指标。
【观察项目】
1.观察描记正常血压曲线 从正常血压曲线上可见到三级波:一级波即心跳波,是由于心脏舒缩而引起的血压波动,与心率及其节律一致。二级波即呼吸波,是由于呼吸时肺的张缩而引起的血压波动,与呼吸周期及其节律一致。一般一个呼吸波中有3~5个心跳波。三级波,不很明显,有时可清楚看到,其原因不完全清楚,可能是由于血管运动中枢紧张性活动的周期性变化所致。三级波历时最长,有数个呼吸波组成。
图14-2 兔动脉血压曲线
2.观察心率及心室收缩强度 从心电图上可准确观察和记数心率。心室收缩强度可通过观察针灸针上小旗的摆动幅度进行估计(可设一个数值为正常强度,实验时与其比较,给出大概的变化值)。
3.用动脉夹夹闭右颈总动脉15秒钟,同时观察、记录血压及心率的变化。
4.用保护电极、以适当强度和频率刺激右侧减压神经,同时观察、记录血压、心率及心室收缩强度的变化。然后用两条线在减压神经中部结扎,再于两结扎间剪断。用上述同样电刺激分别刺激减压神经的中枢端和末梢端,同时观察、记录上述各指标的变化。
5.先在手术灯下观察两耳血管网的密度及血管扩张程度,再结扎右侧交感神经,并于结扎线的末梢端(近心端)剪断,稍待片刻后再观察两耳血管网的密度及血管扩张程度的变化。然后用上述电流刺激交感神经头侧端,同时观察右耳血管网的密度及血管扩张程度的变化。
图14-3 兔耳血管对刺激和切断交感神经的反应
6.用两条线在右侧迷走神经中部结扎,并于两结扎间剪断,用上述电流分别刺激近心端和头侧端,观察、记录血压、心率及心室收缩强度的变化。
7.从耳缘静脉注入1:1万的肾上腺素0.3毫升,观察、记录血压、心率及心室收缩强度的变化。待完全恢复后,静脉注射1:1万的去甲肾上腺素0.3毫升,并进行同样观察。
8.从耳缘静脉注入0.1%多巴胺0.5ml/kg,观察血压变化。待血压恢复正常后,再注入同样剂量的多巴胺,随即注入2.5%妥拉唑林0.3ml/kg,观察血压、心率及心室收缩强度的变化。
9.从耳缘静脉注入1:10万异丙肾上腺素0.5ml/kg,观察血压、心率及心室收缩强度的变化。待血压等指标恢复正常后,再注入同样剂量的异丙肾上腺素,随即注入0.1%普萘洛尔0.5ml/kg,并进行同样观察。
10.股动脉插管和放血 在后肢腹股沟部切开皮肤3~5厘米,用血管钳分离皮下组织及筋膜,可看到股神经、股静脉和股动脉,股动脉的位置在中间偏后,恰被股神经和股静脉所遮盖。小心分离出股动脉约2~3厘米,穿线备用。用两个动脉夹分别夹闭末梢端和近心端,在两个动脉夹之间剪一斜口,向近心端方向插入股动脉插管,并结扎固定;插管所连导管的末端置于量杯中,为防止血液凝固,可在量杯中加入少许5%柠檬酸钠或肝素。待准备就绪,松开近心端动脉夹(不要移去)开始放血,同时密切观察血压变化,当血压降至原水平的50%上下或出现休克现象时,即停止放血,同时观察、记录血压、心率和心室收缩强度的变化。随即以较快速度从耳缘静脉输入所收集的血液,并进行同样的观察。
【注意事项】
1. 麻醉药注射速度要缓慢,不能过量。
2. 避免损伤动、静脉,严防出血。如发现出血现象,应立即止血。
3. 每项实验必须在各观察指标处于正常水平的基础上进行,实验后也必须等待各指标完全恢复后,才能开始下一项实验。
③ 医学实验家兔的捉拿及称重方法,速求
兔的抓取固定方法
抓取:实验家兔多数饲养在笼内,所以抓取较为方便,一般以右手抓住兔颈部的毛皮提起,然后左手托其臀部或腹部,让其体重重量的大部分集中在左手上,这样就避免了抓取过程中的动物损伤。不能采用抓双耳或抓提腹部。
固定:一般将家兔的固定分为盒式、台式和马蹄形三种。盒式固定,适用于兔耳采血、耳血管注射等情况;若做血压测量、呼吸等实验和手术时,则需将兔固定在兔台上,四肢用粗棉绳活结绑住,拉直四肢,将绳绑在兔台四周的固定木块上,头以固定夹固定或用一根粗棉绳挑过兔门齿绑在兔台铁柱上;马蹄形固定多用于腰背部,尤其是颅脑部位的实验,固定时先剪去两侧眼眶下部的毛皮,暴露颧骨突起,调节固定器两端钉形金属棒。使其正好嵌在突起下方的凹处,然后在适当的高度固定金属榛。用马蹄形固定器可使兔取用背卧位和腹卧位,所以是研究中常采用的固定方法。
④ 动物生理学7
手术后动物立即出现全身肌紧张加强、四肢强直、脊柱反张后挺现象,称为去大脑僵直。
如果在动物的中脑上、下丘之间切断脑干,则由于切断了大脑皮层运动区和纹状体等部位和网状结构的功能联系,造成抑制区的活动减弱而易化区的活动相对地加强,动物出现四肢伸直,头尾昂起,脊柱挺硬等伸肌紧张亢进的特殊姿势,称为去大脑僵直
产生原因:
引起过强的牵张反射,主要是由于中脑水平切断脑干以后,来自红核以上部位的下行抑制性影响被阻断,网状抑制系统的活动降低,易化系统的作用因失去对抗而占优势,导致伸肌反射的亢进。脑干前庭神经核对伸肌反射具有易化影响,损毁这一对神经核则僵直现象立即减弱。如同时破坏中脑网状结构,取消了易化影响,则僵直完全消失。
⑤ 家兔去大脑僵直实验具体步骤哪里有
(1)将兔称重后,自耳缘静脉注射20%氨基甲酸乙酯溶液3ml/kg体重。
(2)将兔背位固定于手术台上,剪去颈前部的毛,在颈部正中线切开皮肤,暴露气管,插入气管插管,找出两侧颈总动脉,分别穿线结扎,以避免脑部手术时出血过多。
(3)将兔俯位固定,剪去头顶部毛,由两眼眶前缘连线中点至枕部将头皮纵行切开,暴露头骨及颞肌。将颞肌上缘附着在头骨的部分切开,用手术刀柄将颞肌自上而下地剥离扩大头骨暴露面,并刮去颅顶骨膜。
生物帮有关于这方面的详细介绍,
mRNA 转染 http://www.bio1000.com/experiment/cell/238047.html
⑥ 血液凝固及影响因素实验中最后一步总要加入氯化钙这是因为什么
加快血液凝固速度。
Ca2+浓度增高,血液凝固速度增快。
实验原理
血液流出血管后会很快凝固,血液凝固是指血液由流动的液体变为不能流动的凝胶状台地过程,其实质是血液中的可溶性纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白的过程;纤维蛋白交织成网,把血细胞及血液的其他成分网罗在内,从而形成血凝块。
血液凝固的过程可分为三个阶段:第一阶段是凝血酶原激活物的形成;
第二阶段是凝血酶的形成;
第三阶段是纤维蛋白的生成。
三个阶段的实质是由凝血因子按一定的顺序相继激活而生成的凝血酶最终使可溶性纤维蛋白原变成不溶性的纤维蛋白。
(6)家兔手术台固定方法图片扩展阅读
凝血系统包括内源性和外源性两套凝血系统。内源性凝血途径是指参与凝血的因子全部来自血液,通常因血液与带负电荷的衣物表面接触而被启动。
外源性凝血途径是由来自血液之外的组织因子与血液接触而启动的凝血过程。内源性与外源性凝血系统的区别是:外源性凝血系统所需的凝血因子的种类及凝血步骤较少,因此血液凝固的时间短,而内源性凝血系统的血液凝固时间长。
血液凝固的关键过程是血浆中的纤维蛋白原转变为不溶的纤维蛋白。多聚体纤维蛋白交织成网,将很多血细胞网罗其中形成血凝块。在血液凝固过程后1~2小时,血凝块在血小板的作用下发生收缩并析出的淡黄色液体,这种液体被称为血清。
与血浆相比,血清缺乏纤维蛋白原和少量参与血凝的其他血浆蛋白质,又增添了少量血凝时由血小板释放出来的物质。
⑦ 家兔实验性气胸实验报告怎么写求解答
气胸对呼吸的影响
【实验目的】 观察气胸时呼吸运动、胸内压、肺脏体积和呼吸运动的影响。
【实验原理】 胸内负压形成的主要条件有胸膜腔的密闭性和肺的回缩力。当气胸时,胸膜腔的密闭性受到破坏,胸膜腔内的负压消失,由于肺脏本身的回缩力肺脏缩至其自然体积大小,呼吸运动增强而显得呼吸困难,但通气量减小。
【实验对象】家兔。
【实验器材和药品】 哺乳动物手术器械一套、兔手术台、气管插管、20ml注射器、20%氨基甲酸乙酯、生理盐水、纱布和线、胸腔内插管、水检压器。
【实验步骤及观察项目】
一、实验装置与连接:
参见实验“呼吸运动的调节”和“胸内压的测定”。
二、动物手术
(一)麻醉与固定:用20%氨基甲酸乙酯进行麻醉,剂量为1g/kg体重。待兔麻醉后,仰卧位固定于兔手术台上。
(二)颈部手术:作颈正中切口,气管插管。
(三)胸部手术:在兔右侧胸部测量胸内压。
(四)上腹部手术:作上腹正中切口。
1.从剑突起沿腹正中线取出皮毛,切口长约5~7cm。
2.沿腹白线剪开腹白线及腹膜,打开腹腔。
3.用止血钳将剑突往上提可看到膈肌,观察膈肌及其运动情况,并透过膈肌观察肺的情况,
三、实验观察
(一)观察正常实验条件下动物的通气量,胸内压,呼吸运动,并透过各级观察胸腔内肺脏的状况。
(二)气胸时:用止血钳在右侧膈肌上穿一个孔,观察右侧胸内压的变化、右肺的回缩状态、呼吸运动和肺通气量的变化。
实验讨论:根据脏层胸膜破口的情况及其发生后对胸腔内压力的影响,将自发性气胸分为以下三种类型:
一、闭合性气胸(单纯性)
在呼气肺回缩时,或因有浆液渗出物使脏层胸膜破口自行封闭,不再有空气漏入胸膜腔。
胸膜腔内测压显示压力有所增高,抽气后,压力下降而不复升,说明破口不再漏气。胸膜腔内残余气体将自行吸收,胸膜腔内压力即可维持负压,肺亦随之逐渐复张。
二、张力性气胸(高压性)
胸膜破口形成活瓣性阻塞,吸气时开启,空气漏入胸膜腔;呼气时关闭,胸膜腔内气体不能再经破口返回呼吸道而排出体外。其结果是胸膜腔内气体愈积愈多,形成高压,使肺脏受压,呼吸困难,纵隔推向健侧,循环也受到障碍,需要紧急排气以缓解症状。
若患侧胸膜腔内压力升高,抽气至负压后,不久又恢复正压,应安装持续胸膜腔排气装置。
三、开放性气胸(交通性)
因两层胸膜间有粘连和牵拉,使破口持续开启,吸气和呼气时,空气自由进出胸膜腔。患侧胸膜腔内压力为0上下,抽气后观察数分钟,压力并不降低。
⑧ 在兔子的颈动脉鞘内怎样寻找减压神经
[手术操作]
一、麻醉和固定: 用25%氨基甲酸乙酯溶液自耳缘静脉注射(4ml/kg),待动物麻醉后,仰卧、背位交叉固定在手术台上。
二、手术:颈部剪毛,颈部正中切开皮肤约8~10cm,分离皮下组织及肌肉,暴露气管。气管两侧的颈总动脉鞘内走行有颈总动脉、迷走神经、交感神经和减压神经。其中迷走神经最粗,交感神经次之,减压神经最细且常与交感神经紧贴在一起。沿气管一侧用玻璃分针小心分离减压神经,并在神经下穿一条线备用。记录时将减压神经钩在悬空的引导电极上,避免触及周围组织,以减少干扰。
分离一侧颈部的软组织,在颈外静脉和胸锁乳突肌之间用止血钳向纵深分离,可见在脊柱腹外侧颈椎发出的第3、4、5颈神经(臂丛)向后外方走行。在颈椎旁的肌肉上(臂丛内侧)可见一较细的膈神经。膈神经由4、5颈神经的腹支汇合而成,在较粗的臂丛神经的内侧横过并与之交叉,向后内侧行走,从斜方肌的腹缘进入胸腔。用玻璃分针将膈神经分离2cm,穿线备用。将颈部一侧皮肤接地,以减少干扰。做好皮兜,注入38℃的液体石蜡,起保温、绝缘和防止神经干燥用。记录时将膈神经钩在悬空的引导电极上,避免触及周围组织,以减少干扰。
充分暴露、分离气管 。在气管下方穿一丝线,于甲状软骨下方2~3cm处做“⊥”形切口,插入气管插管,以丝线结扎固定。