为检验高压蒸汽灭菌效果常用方法

① 高压蒸汽灭菌法效果最可靠的是哪种检测方法

细菌培养法。取灭过菌的样品，涂布到无菌培养基上，用未灭菌样品和未涂布的板子分别做对照，培养一定时间后数菌落数，即可获得灭菌效果。

② 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌.高压蒸汽灭菌.紫外线灭菌.过滤除菌四种各有那些优缺点

干热灭菌.高压蒸汽灭菌.紫外线灭菌.过滤除菌各有利弊。 高压蒸汽灭菌
为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。压力和温度之间的关系见表9－1。

高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下（121.6℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。

进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。

可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。
干热灭菌

wei生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。

干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。
间歇灭菌

各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。

间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。

间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。

紫外线灭菌

紫外线杀菌力最强的是波长2650～2660Å的部分。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。无菌室和缓冲间的照射时间为20～50分钟（视房间大小而定），接种箱照射10～15分钟即可。

为了加强紫外线灭菌的效果，在照射前，可在无菌室、缓冲间或接种箱内喷洒5%石炭酸，以使空气中附着有微生物的尘埃降落，同时也可以杀死一部分微生物。无菌室的工作台的台面和椅子，可用2～3%的来苏儿擦洗。然后再照射紫外线。由于紫外线对人体有伤害作用，所以人不要直视正在照射的紫外线灯，也不要在照射情况下进行工作。

灭菌后，为了检验紫外线的灭菌效果，可以在无菌室、缓冲间或接种箱内放一套盛有培养基的培养皿，将皿盖打开5～10分钟，盖好后，放入温箱中培养。如果只有一、二个菌落，可认为灭菌效果良好。如杂菌丛生。则需延长照射时间或同时加强其它灭菌措施。

③ 高压蒸汽灭菌锅的原理、使用方法和注意事项。

原理:是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。

使用方法：

加水——堆放——密封——设定灭菌温度及时间——加热(排放冷空气)——灭菌——结束

加水:打开灭菌器盖，取出灭菌桶，向容器内注入蒸馏水至水位线标志处;

堆放:堆放时物品之间应保持适当空隙;

密封:物品堆放好后，将灭菌器盖盖好，将手轮按顺时针方向旋紧，使盖与口密合，但不宜太紧，以免损坏密封圈;

设定灭菌温度及时间:调节设定键设定所需灭菌温度及时间;

加热(排放冷空气):接通电源，电源指示灯及加热指示灯亮。开始加热前将放气阀旋至放气位置，待冷空气充分逸出后，关闭放气阀;

灭菌:当温度、压力升至预置灭菌温度值时，加热灯灭，仪器进入恒温控制状态进行灭菌，计时器自动计时;

结束:待灭菌时间到达设置时间后，蜂鸣器发出警报，灭菌结束。关闭电源，待压力降至零位时，打开放气阀，待蒸汽完全放出后，打开容器，取出灭菌物品。

注意事项：

压力蒸汽灭菌器的容器中存在着一定的压力和温度，属于特种设备，如果使用操作不当，容易造成人身伤害事故，所以使用时应注意。经常检查灭菌器电源线的接地是否良好，以确保人身安全。灭菌器应置于通风干燥、无易燃易爆物品的室内使用。安全阀、排气阀出厂时已校定位置，阀上的铅封及螺丝不得任意拆启。对堆放物品不得超过总容积的4/5位置。密封圈切勿附油，以免损坏胶质而造成漏气。严禁对与蒸汽介质接触引起爆炸或突然升压性的化学物品灭菌。堆放灭菌器物品时，严禁堵塞安全阀、排气阀的出气孔，必须留出空位确保空气畅通，否则安全阀和排气阀因出气孔堵塞不能工作，造成事故。灭菌液体时，应将液体灌装在耐热玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口选用棉花纱塞。切勿使用打孔的橡胶或软木塞；在灭菌结束后，不准立即释放蒸汽，必须待压力表指针回零后方可排放余气。对不同类型、不同灭菌要求的物品，如敷料和液体等，切勿放在一起灭菌，以免造成损失。压力表使用日久后，压力指示不正确或不能回复零位，应及时予以更换，平时应定期送有资质的单位进行校验，若不正常，应换上新表。安全阀应定期检查可靠性，如压力表指针已超过0.165Mpa时安全阀不起跳则必须立即停止使用并更换合格的安全阀。消毒器使用时应消毒室内，有专人操作，不得在公共场所使用。插座必须装有连接地线应确保电源插头插入牢固。切勿损坏电线或使用非指定的电源线。电源线连接上的弹簧片为保护接地，应保持接触良好。安全阀和压力表使用期限满一年应送法定计量检测部门鉴定。消毒器物品之间留有间隙，顺序地堆放在消毒器内的筛板上，这样有利于蒸汽的穿透，可提高灭菌成效。加热时注意把电源线插头插紧，使插头接地铜片与护罩紧密接触，确保使用安全。加热开始时打开排气阀，消毒器内冷空气会随着加热由阀孔溢出。当阀孔有急的蒸汽冲出时，将排气阀关闭。消毒器压力达到所需范围时，适当调整或通断热源，使之维持恒压，并开始计算消毒时间，按不同的物品和包装保持所需消毒的时间。敷料、器械和器皿等消毒后需要干燥时，可在消毒终了时将消毒器内的蒸汽由排气阀排出，当压力表指针回复到零位后稍待1-2分钟，将盖打开，并继续加热几分钟，这样能使物品达到干燥目的。溶液培养基等若在消毒后立即放汽，会因压力突然下降引起瓶子爆破或消毒器内装溶液溢出等严重事故。所以在消毒终后不应立即放汽，而应停止加热使其自然冷却20-30分钟，使内在压力冷却而下降至零位（压力表指针回到零位）后数分钟，将排气阀打开，然后略微打开盖子（开一条缝），人离开消毒室，待其自然冷却到一定程度再取出。

苏州海思源

全自动高压蒸汽灭菌器

④ 高压蒸汽灭菌法灭菌效果的检测方法包括那三种

1. 灭菌包内放化学指示卡
2. 生物检测方法
3. 进行B-D实验

⑤ 微生物学实验室常用的灭菌方法有哪些

主要包括以下三种：干热灭菌；湿热灭菌；紫外灭菌
1.干热灭菌法
1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达灭菌目的,火焰灭菌通常用于无菌操作中试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等实验物品的灭菌,防止管口污染。
1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌.将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,在烤箱内加热至160℃,保温2h可完全灭菌.但不宜超过170℃.此外降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂.干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底.
2.湿热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,温度高,灭菌效果最好.
注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除.否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底.
3.紫外线
杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制.
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关.紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对湿度40%~60%为宜.

⑥ 高压灭菌锅的使用方法

高压蒸汽灭菌器使用方法
（1）在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
（2）加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到
33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针
下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。
（3）继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭
菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排
气阀以排除余气，然后才能开盖取物。
二、高压蒸汽灭菌器注意事项：
（1）待灭菌的物品放置不宜过紧。
（2）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。
（3）灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭
菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。又名:高压灭菌器,高压灭菌锅,高压蒸汽灭菌锅,手提高压灭菌器
,手提高压灭菌锅,手提式高压灭菌器,手提式高压灭菌锅,手提式高压蒸汽灭菌器,手提式高压蒸汽灭菌锅
（4）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
（5）为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115℃）或安息香酸（熔
点为120℃）置于试管内，然后进行灭菌试验。如上述物质熔化，则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求
，灭菌的效果是可靠的。也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装
上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的。
（6）现在已有微电脑自控型高压蒸气灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动
切断电源并鸣笛，使用起来很方便。

⑦ 高压灭菌的温度,时间,适用范围,如何对高压灭菌效果进行监测

压力蒸汽灭菌效果监测包括物理监测、化学监测和生物监测。
(1)物理监测：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。温度波动范围在+3℃以内，时间满足最低灭菌时间的要求，同时应记录所有临界点的时间、温度与压力值，结果应符合灭菌的要求。
(2)化学监测：包括包外、包内化学指示物监测。具体要求为灭菌包包外应有化学指示物，高度危险性物品包内应放置包内化学指示物，放于包内最难灭菌的部位。通过观察化学指示物颜色的变化，判定是否达到灭菌合格要求。采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将包内化学指示物置于待灭菌物品旁进行化学监测。
(3)生物监测：将嗜热脂肪杆菌芽孢片制成标准生物测试包、生物PCD（灭菌过程验证装置），或使用一次性标准生物测试包，对灭菌器的灭菌质量进行生物监测。将生物监测包置于灭菌器最难灭菌的部位，并设阳性对照和阴性对照。根据微生物芽孢的死亡情况来判断灭菌是否成功，考核灭菌器负荷是否达到无菌保障水平，这是确定压力蒸汽灭菌是否有效的最可靠的方法

⑧ 高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法及注意事项

高压蒸汽灭菌锅的使用注意事项：

1、挡水板下的水要足够

2、为保证安全待排气排到零下在开盖

3、挡水板下的水要用纯水，而且要经常换

正确使用方法：

1、检查高压蒸汽灭菌锅里的水是否足够，关紧排水阀，将灭菌物品放进灭菌锅。

⑨ 检测固体培养基灭菌效果的常用方法

检测固体培养基灭菌效果的常用方法：每个菌种生产者和栽培户，当采用一种新培养基，或使用新灭菌设备，或对灭菌压力变更时，要通过试验对培养基灭菌效果进行严格检验。具体检验方法如下：

1、灭菌结束后，在锅内不同位置，取若干支试管或菌种瓶（袋），贴上标签，置25℃～30℃下空白培养6天进行检查。如果所有试管或菌种瓶（袋）培养基表面和内部无变化，表明已达到灭菌目的，可供接种使用。

2、如果个别试管或菌种瓶（袋）培养基上出现杂菌菌落，可能是在摆放试管、菌种瓶（袋）时，放得过紧，没有间隙，导致热蒸汽流通不畅，或灭菌锅结构不合理等原因所致，应根据具体情况进行改进。

3、如果是大部分或全部试管、菌种瓶（袋）培养基上出现杂菌菌落，可判断为温度或灭菌时间不够，要提高灭菌压力或延长灭菌时间。经多批次灭菌和检验后，培养基都能达到彻底灭菌要求，以后在采用同样培养基和同样灭菌方法时，就不用每批都进行检验了。

检测培养基灭菌是否合格的方法

灭菌是杀灭培养基中本身的原着菌或在空气中附着的杂菌，更好的让目标菌生长（减少杂菌消耗培养基中的营养，而且有些杂菌会抑制你目标菌的生长）。一般灭完菌后将培养基放在30-37度的环境中培养一天，看其有没有长菌（液体看是否变浑浊，固体看是否长菌落），即知是否灭菌后为无菌。

把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管（瓶）,标上记号，置25℃～30℃培养一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好。