写出线虫的常用病原学诊断方法

A. 病毒线虫细菌的常规鉴别方法

对于植物的病毒、线虫和细菌等病害，通常从它们引起的症状可以进行判断：
病毒病通常会引起植株叶片扭曲、花叶、皱缩、畸形；
线虫一般是使植株根部产生肿瘤、突起，影响根的功能从而影响植物生长；
细菌引起的症状一般是腐烂坏死，而且病部常常会产生粘状物或透明膜状物，是因为有的细菌能产生荚膜

B. 线虫死活鉴定

首先声明偶谈不上专家，只是目前在做线虫实验。据偶所查文献资料，线虫死活鉴定方法有以下几点：

1.刺激法，用挑针自己虫体，看是否有反应（少数不是很准确）；
2.染色法，用0.05％Newblue水溶液染色，死虫虫体为紫色，活虫为透明；
3.体型的变化，将线虫放入2％NaCl溶液2min后观察，死虫虫体僵直，活虫蜷曲扭动；
4.荧光检测，把虫子在0.5％丫啶溶液放1天，用荧光显微镜镜检，活虫为绿色，死虫赤铜色。

C. 根结线虫病的发生症状、病原、发病规律及防治方法如何

症状：根结线虫病在长江流域以南普遍发生，北方保护地育苗栽培发生较重。主要发生在根部的须根和侧根上，受害根部肿起，形成不规则瘤状物，初为白色，后呈黄褐色至黑褐色。由于破坏了根系正常功能，使地上部植株生长衰弱，造成不同程度的矮小，严重时整株枯死。

病原

本病是由南方根结线虫引起，属植物寄生线虫。

发病规律

根结线虫常以2龄幼虫或卵随病残体遗留在土壤中越冬，可存活1～3年。条件适宜，越冬卵孵化为幼虫，继续发育并侵入寄主。初侵染源主要是病土、病苗及灌溉水。土温25～30℃，土壤持水量40%左右，病原线虫发育快；10℃以下幼虫停止活动，55℃经10分钟死亡。地势高燥、土壤质地疏松、盐分低的条件适宜线虫活动，有利于发病，连作地发病重。

农业防治：

（1）轮作倒茬。

凡易受根结线虫为害的蔬菜作物，如南瓜、黄瓜、胡萝卜等，不宜做加工番茄的前茬，最好与禾本科作物如春小麦、水稻、高粱等轮作。

（2）深翻。

根结线虫多分布在3～9厘米的表土层中，深翻土壤可减少为害。

（3）选用无线虫土育苗。

化学防治：土壤消毒，保护地育苗栽培利用7、8月份休闲时间将棚扣严一周，用高温杀死虫卵和成虫，或在冬季将棚内灌一次冻水，不扣膜，经2个月结冰冷冻，或每平方米用1.8%爱福丁（阿维菌素）乳油1毫升处理土壤，使用时将其用少量水稀释喷在地面，立即翻入土中。

D. 蛲虫病的首先病原学检查方法是什么

透明胶纸法、棉签拭子法

E. 什么是植物线虫病害

plant nematode diseases

冯志新，黎少梅线虫对植物的为害其发病过程与昆虫咀嚼植物造成的机械损害不同。在摄取寄主体内营养物以前，线虫由食道腺分泌含有多样酶系的唾液，注入受害细胞。因唾液的毒害作用，寄主植物内部发生一系列生理病变和组织病变，外部出现症状。

分布

世界各地区均有分布。不同线虫病害因地理、气候条件、寄主植物、土壤类型和发生历史等因素而不同。而具有一定的地理分布区。多数根结线虫如南方根结线虫和爪哇根结线虫主要在热带和亚热带地区发生，少数根结线虫如北方根结线虫主要分布在月平均温度最低0℃和最高15℃的北纬35°以北地区。在全世界，南方的植物根结线虫病之所以较北方发生普遍和危害严重，温度条件起了主要作用。小麦和大麦根瘿线虫病和茶卢斯根腐线虫病分布在高海拔地区，前者在中国云南省分布在海拔2000米以上的高山地区，后者在斯里兰卡分布在900～1800米的高地上。各种病原线虫对寄主植物种类和品种有选择性，因而某些线虫病害与该地区的植被类型和栽培作物的种类和品种有关。如尖头螺旋线虫和变尾螺旋线虫等在英国某些荒地（broadbalk wilderness）上流行，与该地覆盖的再生林、草类型有一定联系。松材线虫萎蔫病[Bursaphelenchus xylophilus（Steiner&Buhrer）Nickle]在日本流行成灾，因为日本林地内广泛分布高度感病的树种日本赤松和日本黑树。有些线虫病害的发生与土壤类型有密切的关系，如根结线虫病一般分布在砂土地区；洋葱茎线虫病[Ditylenchus dipsaci（kühn）Filipjev]则在重粘土地区发生严重。此外，某些线虫病害局限在少数国家发生，如松材线虫萎蔫病，长期以来只是在日本、美国等少数国家发生，近年来才在中国江苏、台湾、香港和韩国等国和地区出现。

为害

植物线虫主要为害粮、棉、油、烟、茶、蔬菜、果树、林木、花卉、热作、牧草和药材等各类作物乃至食用菌，给农林业生产造成巨大的损失。据1971年美国线虫家协会作物损失委员会统计，美国农作物线虫病引起平均损失为10%，约为16亿美元。美国萨瑟（J.N.Sasser）等1987年估计每年全世界线虫造成的损失超过1000亿美元；巴里加（R.Barriga）报道1976年哥伦比亚由根结线虫引起咖啡的损失每年多达8亿美元。目前在世界各地普遍发生的线虫病害主要有根结线虫、短体线虫、胞囊线虫、茎线虫、球形胞囊线虫、半穿刺线虫和穿孔线虫等所引起的各种植物线虫病害。其中，相似穿孔线虫、马铃薯金线虫、马铃薯白线虫、松材线虫、椰子红环腐线虫、起绒草茎线虫、稻茎线虫和甜菜胞囊线虫等在某些国家流行，造成毁灭性为害，因此列为中国对外检疫对象。中国比较突出的线虫病害有花生、烟草、柑橘、桑、茶、麻、蔬菜、花卉和药材等多种作物的根结线虫病及大豆胞囊线虫病、甘薯茎线虫病和苎麻根腐线虫病等。近年来局部地区发生的松材线虫萎蔫病，小麦根瘿线虫病、小麦禾谷胞囊线虫病、珠兰叶斑线虫病[A.fragariae（Ritzema Bos）Christie]和当归麻口病（D.destructor Thorne）等也引起较大的经济损失。还有一类线虫病害如甘蔗矮化线虫病、水稻潜根线虫病和玉米根腐线虫病等在中国普遍发生，目前尚未造成很大损失，但都是农业生产上值得重视的问题。

症状

植物线虫病害的症状与病原线虫的为害习性有关。线虫大多侵染根、根茎、块根、块茎和鳞茎等地下部，对侵害的组织不诱发明显的症状，少数如根结属、柯柏线虫属等内寄生线虫与毛刺线虫属、拟毛刺线虫属以及部分长针线虫属、剑线虫属、鞘线虫属等外寄生线虫，可引起显着的外部病变，包括根结、粗短根、发根或其它样式的根部膨大；内寄生线虫中的短体线虫属、穿孔线虫属等线虫可以诱发地下部坏死。这类病株的地上部往往表现黄化和矮缩，严重时出现死株。病株根系的腐烂症状除线虫侵染外，常常还有其它微生物的参与，通常属于复合病症状。

滑刃科中的部分滑刃属线虫、松材线虫、红环腐线虫与粒科中粒线虫属、拟粒线虫属及茎线虫属的部分线虫仅为害植物地上部，可以引起病株出现特异的症状，能从被害部分分离到病原线虫。地上部线虫病的症状可以划为4类。①畸形。包括茎、叶变形和植株矮缩。由起绒草茎线虫引起的洋葱、水仙、苜蓿、麦类和豆类等许多作物的茎线虫病，病茎往往肿大、扭曲、节间缩短，叶和花也发生畸变；草莓春矮病（草莓芽线虫）和夏矮病（稻干尖线虫）的典型症状是叶片皱缩和病株生长受抑，比健株显着矮小。②坏死和变色。常在一些滑刃线虫病害中出现。如菊叶线虫病（菊叶线虫）及蕨类、珠兰、秋海棠等线虫病（草莓芽线虫）的叶斑症状与椰子红环腐线虫病（红环腐线虫）的红环病变等。③种瘿、叶瘿和茎瘿。在许多植物特别是禾本科植物的粒线虫病和拟粒线虫病中，往往在受害的花芽、叶和茎上形成暗色的瘿瘤。在瘿内普遍贮有病原线虫的幼虫。④萎蔫。松材线虫萎蔫病（松材线虫）的系统萎蔫是线虫病中出现这类症状的唯一实例。

诊断

植物根结线虫病、小麦粒线虫病、稻干尖线虫病和椰子红环腐病症状比较特异，根据症状特点即可作出初步诊断。田间出现局部植株黄化、矮缩以及根系生长不良等现象时，可以初步确定是病原线虫所致。准确诊断需进行病原线虫的分离和鉴定，必要时还需进行接种试验。对于新的线虫病害，则需要根据柯赫氏法则进行证明。病原线虫诊断需注意下述问题。为害植物地上部的线虫和根内的寄生线虫容易在病组织上分离到，但根的外寄生线虫一般需要从根围土壤中分离。因此要选用合适的采样和分离方法。其次，一种植物往往被多种线虫寄生，需要根据症状特点和线虫群体等因素判断优势病原线虫。此外，进行人工接种试验时，还需采用适当的接种方法和适宜的发病条件。

控制

植物病原线虫长期或短期生活在土壤中，繁殖速度快，对寄主的为害程度与其群体的数量往往相关。控制植物线虫病主要针对病原线虫，应用植物检疫、农业的、化学的、物理的和生物的单一或多种防治措施，阻止线虫群体数量达到或超过其为害水平。对于部分线虫病也可以通过选育和种植抗病品种进行防治。

一些病原线虫的远距离传播是由于带病植物、植物产品及其沾附的病土的人为流动所致。因此植物检疫是许多国家或地区用于控制多种危险性线虫病的主要措施。

在农业防治中广泛应用作物轮栽和休闲，降低线虫群体数量及其危害水平。化学防治以处理土壤为主，少数属于种苗处理。合理使用杀线虫剂处理土壤，可以防治许多植物寄生线虫和增加作物产量，但是对于生产价值不高的作物，化学防治是不经济的，不能完全取代作物轮栽和休闲等防治措施。热力处理是防治线虫最重要的物理方法。湿热防治线虫较干热防治的有效。热力防治线虫只限于温室和苗床，用于处理大田是很不合算的。在线虫受控和植物受害之间的温差极小，适于热力处理的常是那些较耐高温的植物材料。在自然条件下，多种土壤微生物如真菌、细菌和病毒等都能侵害植物寄生线虫，如淡紫拟青霉和厚膜轮枝孢霉可以分别有效地防治南方根结线虫和燕麦胞囊线虫。在日益提倡无污染或少污染种植的今天、生物防治线虫是很有意义的待开发领域。

参考书目

J.M.韦伯斯特编，胡起宇译：《经济线虫学》，农业出版社，北京，1988。

Luc，M.Sihara R.A.and Bridge J.(eds.)，Plant Parasi-tic Nematodes in Subtropical and Tropical Agriculture，CAB International，1990.Nickle W.R.(ed.)，Manual of Agricultural Nematolo-gy，Marcel Dekker，Inc.，New York，Basel，Hongkong，1991.

F. 松材线虫病的鉴定方法

1、形态鉴定：通过显微镜观察线虫头部，尾部以及生殖器官等特征来鉴定其是否属于松材线虫。
2、分子鉴定：BX-48松材线虫自动化分子检测系统
BX-48松材线虫自动化分子检测系统利用分子生物学原理，采用荧光PCR技术，利用松材线虫特异性引物与探针，达到准确检测松材线虫的目的，准确率可达到100﹪；由于使用的是荧光PCR技术，整个检测过程由仪器自动化完成，故无需人工使用显微镜观察松材线虫来进行判读，从而解决了人工镜检因视觉疲劳降低工作效率的问题，亦不会出现误读误判，完全避免人为出现误判的可能性，同时鉴定结果简单易读，窗口直接显示样本内是否含有松材线虫；操作简单便捷，只需将试管放入检测位内，其余工作均在电脑上通过鼠标完成，大大减少了操作人员的劳动强度；该设备拥有48个检测位，可同时检测大批样本，进一步提高工作效率。

G. 如何进行植物病害诊断和鉴定:

进行植物种植，传统的就是除草、浇水和防治病虫害，那么植物病虫害应该如何去防治呢？首先要知道如何辨别别植物病虫害，我们生产的植物病害检测仪可以迅速的将植物病虫害进行鉴别，不过这是建立在知道植物病虫害的发病机理上的，下面我们一起看下植物病虫害是如何被引发的。
一、非传染性病害：植物在不适宜的土壤上，或是遇到不适合的气候、水分、肥料过多过少等所引起的病害。如甜菜地里如果土壤中缺乏微量元素“硼”，就要引起甜菜根变黑腐烂，叫做缺硼病。这一类的病害不会传染蔓延，所以叫做非传染性病害。

二、传染性病害：是由病菌侵害发生的，能够传染，所以叫做传染性病害。这类病害种类最多。引起传染性病害的病菌大多数为真菌，其次就是病毒和细菌，以及线虫和寄生性种子植物等。
植物得病后，一般常见的症状有:变色、斑点、矮化、丛生、黄化、坏死、腐烂、萎蔫、缩叶、缩果、扭曲、瘤肿、畸形等。叶面上有时布满霉状物(黄色、红色、绿色等)、黑粉状物、白粉状物、锈状物以及小黑点等颗粒状物。
传染性病害中，由于病原菌不同，植物生病后，外部的形态改变也不一样，而且同一种寄生物在不同的植物上或者在同一植物的不同发育时期，以及受环境条件的影响，都可表现不同的症状。相反，不同的寄生物也可能引起相同的症状。因此，对植物病害除分析发病的原因外，还必须进一步鉴定病原生物，才能做出正确的诊断。对植物病害的诊断方法一般采用以下几个步骤：

1.症状诊断：
在诊断植物病害时，首先进行症状观察，根据症状特点，区别病害还是伤害。伤害是没有病变过程，病害是有病变过程的。如果是病害，还要区别是非传染性的，还是传染性的病害。在观察症状时，一般用扩大镜或用肉眼观察病株的外部表现，当外部症状不明显时，再进行病理解剖，检查内部症状。由于各种病害在田间的发生和发展其表现有一定的规律，因此在观察植物病害的症状时，应特别注意：
(1)病害的普遍性和严重性多；
(2)病害发展和在田间的分布；
(3)发生时期和植株生育期；
(4)受害寄主和部位位；
(5)栽培管理方法等。

病毒病害与非传染性病害容易混淆，因为病毒病害在外表看不出病症，区别病毒病与非传染性病害，除根据有无传染现象外，还可根据病害的发生特点。非传染性病害在田间大都是普遍、均匀、成片发生，发病地点与地形土质或环境条件有关。病毒病害在田间多是分散发生，在病株周围可找到健株，其症状除呈现花叶、黄化或矮缩畸形外，还常与传毒昆虫的活动有密切关系。

2.病原鉴定：
鉴定病原是对植物病害进行诊断最可靠的方法。对不同性质的炳原必须采取不同的鉴定方法。
(1)非传染性病害的病原鉴定
在对养分、水分、温湿度和厌围环境条件进行分析的基础上，可进行化学诊断，就是将有病的植物榨出液或病土进行分析，测定矿物营养(如氮、磷、钾、硫、铁以及其他微量元素的含量)，是否符合健康植物的标准，并查明所缺元素。其次还可以进行人工诱发试验，如水培法和砂培法，人为的提供可疑的类似条件，观察是否发病。
(2)传染性病害的病原鉴定
①病毒病害的病原鉴定

病毒病害的病原用普通显微镜观察不到组织病变。目前在电子显微镜还不普及的情况下，多采用人工接种试验来验证。人工接种试验是用病株汁液磨擦接种、嫁接、昆虫传染等方法。同时还可以根据病毒的生物学特性，如传播方法、寄主范围、寄主反应、体外保毒期、稀释终点以及血清方法等来区别病毒的种类。有些植物病毒还可以采用指示物进行鉴定。
②细菌病害的病原鉴定

对细菌病害的病原鉴定，多采用“细菌溢”的方法。具体是切取小块病组织制片，放载玻片于显微镜下检查，如觉现有“细菌溢”从病组织(维管束)涌出，即可勿步确定为细菌病害。
如果鉴定细菌的种类，就可进行革兰氏染色，通过阳性和阴性反立来区别。此外还可以进行分离培养，获得较纯的培养菌种，然后通过伤口或白然孔(水孔、皮孔、气孔等)人工接种，来确定细菌的种类。

目前，对细菌病害病原的鉴定，较迅速准确的方法是采用血清反应。具体方法是取一定病原的细菌液少许放载玻片上，然后加入某种用生理盐水稀释过的“抗血清”，如果两者产生“凝集”即证明是某细菌病害的病原。例如鉴定马铃薯环腐病的病原菌时，可将已培养好的环腐病细菌液注射到兔子体内，然后抽取兔子血液，使沉淀后取上部的血清(即抗血清)，用生理盐水稀释后放载玻片上，与被怀疑为马铃薯环腐病的病原细菌掖混合，如产生“凝集”，即证明为环腐病病原。否则为非环腐病病原。
③真菌病害的病原鉴定

鉴定真菌病害，一般常用的方法是挑取病株组织上的菌丝或子实体制片，然后置显微镜下观察病菌的形态、特征、色泽、大小、结构等。其次是采用分离培养和接种试验。分离培养是切取小块病株组织经表面消毒和灭菌水洗后，移到一定的培养基平板上，在一定的恒温下培养，几天后观察菌落、菌丝体、无性抱子、有性抱子等形态、色泽。接种试验应根据真菌病害不同的侵染类型，将病菌抱子进行拌种、花器接种、土壤接种、涂抹接种或将抱子棍悬液进行喷雾接种。
④线虫病害的病原鉴定

植物受线虫为害后，多在受害部位产生虫廖或膨胀的形态变化，剖切虫瘦或膨胀部分用针挑取内部含有物制片，然后放显微镜下观察有否线虫及形态特征。有些线虫病并不引起植物形态变化，可采用漏斗分离法和叶片染色法进行检查，作出诊断结果。

H. 松材线虫病的检疫方法是什么

1、直观检验：此种方法主要在产地调查时使用。在调查时仔细观察树木发育是否正常，注意察看有无树脂分泌减少、停止，针叶变褐、萎蔫，枝干及整株枯死的现象，同时观察树干上有无天牛蛀食的痕迹、产卵孔、羽化孔等，如有再行解剖检查。

2、解剖检验：用工具将可疑感病的树木锯断劈开，看材质重量是否明显减轻；木质部有无蓝变现象；树干内有无松褐天牛栖居的痕迹。

3、漏斗分离检验：从罹病木发病部位或天牛栖居处钻取木材组织并粉碎，用双层纱布包好，置于下方带有胶管和截流夹的玻璃漏斗上，加水浸泡12小时，取下部浸泡液离心，取其沉淀液15ml，置于解剖镜下，对照松材线虫的形态特征进行检查鉴定。

4、接种试验：把分离到的松材线虫接种到健康的松树上，观察健康树是否发病。

I. 根结线虫病如何识别与防治

（1）为害症状 寄生在植物的根上，形成许多根瘤状物，即根结。根结初为白色，后成淡褐色，可互相连接成节结状。被寄生的植株，严重时地上部分表现为营养不良，生长势弱，结瓜少而小，甚至不结瓜。瓜类整个生育期可多次重复被侵染，根结线虫还可传播病毒病。
（2）防治方法 ①农业防治。与禾本科作物或葱、蒜等实行3年以上的轮作或水旱轮作；用鸡粪或棉籽饼作基肥，对线虫有一定的抑制作用；作物收获后可大水漫灌浸淹1个月，杀灭线虫；采瓜后，在炎热季节，翻耕浇灌并覆膜，晒5～7天，杀虫效果很好。②药剂防治。在播种和定植前，用杀线虫剂处理土壤。因杀线虫剂多为高毒农药，一定要注意用药安全。施药方法，可参看产品使用说明书。

J. 如何鉴别四种肠道寄生的土源性线虫的成虫

1、蛔虫病

成虫是蛔虫病的主要致病阶段：夺取营养；影响吸收；变态反应；并发症及异位寄生，导致肠梗阻，以及胆道、胰管、阑尾等蛔虫症，严重时可以致命。

2、鞭虫病

轻度感染一般无明显症状，如果感染者粪便的虫卵数超过5000/g或10000/g时，则往往有症状，出现食欲不振、恶心、呕吐、腹痛、腹泻或便秘，以及消瘦、乏力等症状。严重感染者（粪便虫卵数超过20000/g）大多发生严重腹泻或者痢疾综合征。

极重度感染者，成虫附着于直肠粘膜，可引起慢性痢疾，伴有腹痛和严重的里急后重，偶尔可致直肠脱垂。

3、钩虫病

钩蚴侵入人体皮肤可引起钩蚴性皮炎，病人可感到局部皮肤有烧灼、针刺或奇痒等感觉。多见于手指、足趾间皮肤嫩、薄处，也可见于手、足背部等，俗称“粪毒”。钩虫幼虫移行至肺泡后，病人可出现咽痒、咳嗽、伴有畏寒、发热、哮喘样发作等全身症状。

成虫寄生于小肠可引起消化、吸收等功能障碍。持续性、弥散性腹痛为常见症状，以上腹部和脐周为剧烈。重度感染者还可出现黑色粪便和营养不良等。少数钩虫病人有喜食常人不能吃的东西，称“异嗜症”。

4、蛲虫病

蛲虫病的主要症状为雌虫爬出产卵引起肛门周围及会阴部奇痒和炎症，影响睡眠。患儿常有烦躁不安、夜惊、失眠、夜间磨牙、遗尿、食欲减退、消瘦等表现。

人染蛲虫后，可引起肛门及会阴部皮肤瘙痒、烦躁不安、失眠、食欲减退、夜惊，长期反复感染,会影响儿意的健康和学习成绩。当蛲虫异位寄生时，则可导致严重后果，较为常见的是由于蛲虫的雌虫侵入阴道后而引起阴道炎、子官内膜炎、输卵管炎、盆腔炎等。

(10)写出线虫的常用病原学诊断方法扩展阅读

防治原则：粪便无害化处理，加强卫生宣传，注意个人卫生和饮食习惯。

与生物源性蠕虫区别：在发育过程中只需一个宿主，虫卵或幼虫在外界环境发育后即具感染性，这类蠕虫称土源性蠕虫，如蛔虫、鞭虫、蛲虫和钩虫。另一类蠕虫在其发育过程中需要中间宿主，人的感染来源于另一生物，这类蠕虫称生物源性蠕虫，如常见的吸虫、猪带和牛带绦虫、丝虫等。