‘壹’ 微生物计数方法有哪些我想知道详细的操作步骤
微生物的显微直接计数法
一、实验目的
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法,掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理
测定微生物细胞数量的方法很多,通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质,常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图21-1),计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm,则计数区的面积为l mm2,每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后,计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
已知:1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以:1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格,即系数K=4×106 。
因此:每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数(N)×系数(K)×菌液稀释倍数(d)
三、实验器材
1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面或培养液。
2.器材:显微镜、血球计数板、盖玻片(22mm×22mm)、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。
四、实验方法
1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释到10-2),以每小格的菌数可数为度。
2.取洁净的血球计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。
3.将酵母菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上,不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。4.静置片刻,将血球计数板置载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。
5.计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格(即100小格)的菌数。如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央l个大方格的菌数(即80个小格)。如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。
6.对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2—3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),求出每一个小格中细胞平均数(N),按公式计算出每ml(g)菌悬液所含酵母菌细胞数量。
7.测数完毕,取下盖玻片,用水将血球计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。
五、实验作业:
将实验结果填入下表中:
计数次数 每个大方格菌数 稀 释
倍 数 试管斜面中的总菌数 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次
‘贰’ 微生物计数方法有哪些
测定微生物细胞数目的方法有很多,介绍几种
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数。
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。
②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数。
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。
④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞。
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数。
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目。
此法也是统计样品中活菌的数目。
4.比浊法
原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大。因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确。
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。再如滤膜法也一样,可以有两种情况。
另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。
‘叁’ 能不能介绍下生物学上统计的方法
一般来说在普通生物上的统计方法基本都是抽样法,比如蜗牛的牙齿,科学家可以先确定出蜗牛有牙齿的部分面积有多大,然后从这个面上随机的取一定数量的小方块,比如100个,比如每个方块0.1平方毫米。然后算出每个方块中的平均牙齿数量,然后再乘以总面积,恩,就得出来了。也有可能是其他方法,但思路和这个差不多,抽样法,绝不可能是一个一个数的。。。
但是关于基因这方面的不是这样的,1号染色体有多少对碱基这个我可以负责任的告诉你,确实是一个一个测出来的,这个工程叫“人类基因组计划”花了10年时间,测出了所有的30亿对碱基。
但是呢,上面包含的基因数量不完全是确定了的,有一些是通过计算机预测出来的,但很大一部分是被科学家鉴定过的。上面的抽样法在基因这个层面就不太适用了。
生物统计学是一个专门的学科,如果你有兴趣我可以给你介绍一下,你也可以自己找书看看,就找《生物统计学》就好。
‘肆’ 用来测定细菌生长量的直接计数法和间接计数法包含哪些具体的方法
显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方 法。 直接计数法中常用的是显微镜直接计数法,这种方法是先将待 测样品制成悬液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1- 3-1)。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微 生物总数。直接计数法所需设备简单,可迅速得到结果,而且在计数 的同时能观察到所研究微生物的形态特征,其缺点是难以计数微小的 细菌。这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。 间接计数法最常用的是稀释平板计 数法,它是根据微生物的培养特征而设计 的计数方法。这种方法在样品中含菌数较 少的情形下,也可以完成计数。 应用稀释平板计数法计数时,需要 将待测样品配制成均匀的系列稀释液,尽 量使样品中的微生物细胞分散开。再取一 定稀释度、一定量的稀释液接种到平板 中,使其均匀分布于平板中的培养基内; 或是将一定量的稀释液,与溶化后冷却至 45℃左右的琼脂培养基混合,倾入无菌培 养皿中,摇匀、静置待凝。经过培养后, 就由单个微生物生长繁殖形成菌落,这样 的一个菌落就代表着一个微生物个体。统 计培养基中出现的菌落数,即可推算出检 测样品中的活菌数。 FOR EXAMPLE:] 土壤中好气性细菌的计数 土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的,这些数量众多的 微生物对提高土壤肥力有重要作用。因此,测定土壤中的含菌量可以 作为判定土壤肥力的一个重要指标。 材料器具 土壤样品;牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录二)、无菌水;培养皿、 移液管、天平、锥形瓶、试管、酒精灯、恒温培养箱、摇床等。 活动程序 1.制备土壤稀释液 取土壤表层5~10 cm 处的土样。准确称取1 g 土样,放入盛有 99 mL 无菌水的锥形瓶(250 mL,放有小玻璃珠)中,用手或摇床振荡 20 min,即制成102 倍的稀释液。 用1 mL无菌移液管,吸取10 2倍稀释液0.5 mL,移入装有4.5 mL 无菌水的试管中,配制成103 倍稀释液。 用同样的方法可制成稀释倍数为104、105、106 的系列稀释菌液 (图1-3-2)。 图 移液时,要将移液管插入液面,吹吸3 次,每次吸上的液面要高 于前一次,让菌液混合均匀并减少稀释中的误差。每配一个稀释度要 换用一支移液管。 2.取样及倒平板 将无菌培养皿编号,依次为104、105、106,每一号码设置三个 重复。 用无菌移液管三支,分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释 液各0.2 mL,注入到相应编号的培养皿中(每个稀释倍数各三个培养皿)。 将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化,待冷却至45~50 ℃左 右,倾入到无菌培养皿中,每皿约15 mL,轻轻转动培养皿,使土壤 稀释液与培养基混合均匀。 3.培养 将上述接种好的平板培养基冷却后,倒置放入28~30 ℃的恒温 培养箱中培养24~36 h,直至长出菌落为止。 4. 观察记录 将实验中得到的菌落数填入表1-3-1。 结果分析 1.选取具有合适菌落数的稀释倍数并计数。 在计算结果时,从接种的3 个稀释度中选择一个合适稀释倍数, 统计出菌落数(图1-3-3)。选择的原则是: 过 (1) 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30~300 个菌落为 宜。霉菌以每个培养皿内有10~100 个菌落为宜。 (2) 同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不太悬殊。 2.将统计出的菌落数按下列公式计算,得出每克样品菌数。 每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数
‘伍’ 微生物计数方法有哪些
测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种:
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.
②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.
④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数.
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.
此法也是统计样品中活菌的数目.
4.比浊法
原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确.
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.
另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目.
‘陆’ 生物实验中常用的数据统计方法
具体要看统计什么样的数据了。。。
一般的就是分类统计,把不同“质量”的数据统计在一起,比较,得出规律。例如孟德尔那个 统计。
或者平均值法,用于统计数量性状。例如观察XX因素对“叶片生张的影响”啦,就统计在一个因素下全部植株的叶片数,算个平均值了。。。这个就是减小误差了。
还可以进行χ检验,但这些高中都用不到。
‘柒’ 请教 谁知道高中生物里的一些计数法啊
显微计数法:利用血细胞计数板,滴取样夜后盖上盖玻片,在显微镜下选小格计数.
样方法(针对植物等移动能力力弱的生物)
标志重捕法(活动能力强的生物)
‘捌’ 求高中生物涉及到的计数方法 像标识重捕法 样方法 显微计数法什么之类的 谢谢各位了
1-标志重捕发(多用于活动范围大的动物)
2-样方法(植物密度)
3-取样器取样法(土壤中小动物,调查土壤中物种丰富度的方法)
4-稀释涂布平板法(培养菌落)
5-显微计数法
6-红细胞板计数法
第5和6方法在高考范围不常考
‘玖’ 高中生物的调查方法 统计方法 计数方法 取样方法分别有哪些
1、取样器取样法是用来调查土壤小动物的种类时的取样方法;
2、目测估计法和记名统计法 是调查土壤小动物的时候 具体计数的方法.一个准确一个模糊;
3、显微计数法 是在显微镜下观察并计算某种微生物的数量的方法;
4、稀释涂布平板法是用稀释后 在培养基上形成 菌落的方法来计算 细菌等微生物的数量的方法。
‘拾’ 生物学的计数方法
生物学计数方法有很多啊,你问的是哪一类的计数方法?
标志重捕法?样方法?