岛津高效液相色谱仪使用方法

A. 岛津LP-10ATVP操作方法

1．目的
规范岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
2．范围
本规程适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的使用和维护。
3．职责
质检室仪器分析员负责岛津LC-10AT型高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4．规程
4.1 系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、SCL-10AVP系统控制器、CLASS-VP（Ver. 6.1）工作站和IBM台式电脑等组成。
4.2 准备
4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3 开机
4.3.1接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机。
4.3.2启动CLASS-VP工作站
4.3.2.1确认仪器、系统控制器启动后，打开计算机电源，并从Windows的任务栏中选择Start > Programs > Chromatography > CLASS-VP以打开CLASS-VP菜单窗口。（可以通过桌面上的快捷方式，迅速打开CLASS-VP主菜单）
4.3.2.2 在Main Menu 窗口中双击Instrument图标。
4.3.2.3 输入用户名和口令，以登录CLASS-VP。缺省情况下，已经用户名和口令分别为“system”和“2001”。
4.3.2.4 当SCL-10Avp发出蜂鸣声后，说明已建立与计算机之间的连接，Instrument窗口打开。
4.3.2.5 启动色谱图监视器
4.3.2.5.1 从Windows任务栏中选择Program> Chromatography > Chromatogram Monitor 以打开 Chromatogram Monitor 窗口。
4.3.2.5.2 根据需要设置受监视项的类型和格式。
4.3.2.6 启动脱机处理
4.3.2.6.1 在 Main Menu 窗口中双击 Offline Processing 图标。
4.3.2.6.2 双击为数据采集而设置的仪器名称，以打开仪器进行脱机处理。
4.4 CLASS-VP初始系统设置（设置方法缺省参数）
4.4.1 单击“New”按钮，并接着单击 New Method 即可初始化方法参数。
4.4.2 从Option 选项卡的Method菜单中选择命令，并在对话框中更改每条命令的参数，以选择常用的选项。
4.4.3 选择File > Method > Save as Default 即可将在此处设置的选项保存成缺省参数。
4.5 设置分析参数
4.5.1 设置LC参数
4.5.1.1 设置新的分析参数时，请从通过单击“New”按钮打开的列表中选择New Method，则将加载缺省方法参数，且方法文件名“Untitled.met”将显示在LC Setup Assistant窗口中，通过单击Open按钮即可打开现有的方法文件。

B. 岛津LC-20A高效液相色谱测定方法精密度、检出限、准确度的操作步骤是什么

精密度，准确度都是根据方法配制溶液，进样来计算得出来的。RSD相对标准偏差是进6针样品来计算的，准确度是通过加标回收率来计算的，含量在80%-120%之间。检出限即配制溶液不断稀释使其信噪比达到3:1，设置仪器自己显示结果。

C. 高效液相色谱仪的使用和原理分析

高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一，其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中，难免会出现各种各样的问题，并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚预防和排除这些故障的方法，就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。今天我们要从以下几个方面和您分享下在使用高效液相色谱仪中需注意的几个问题。

一、使用试管的问题

1、试管的洁净问题。

高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法，如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。

2、塑料试管的溶解问题。

近年来，一次性塑料试管给试验人员带来了极大的方便，但是，在使用过程中一定要注意有机溶剂对试管的溶解现象，在利用此种试管提取样品时，有些有机溶剂(如氯仿等)对管壁有溶解现象，这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号，从而干扰样品的测定。这时，可用相同的实验条件先行试验一下，看看不含被抽提物时，提取液在检测器上能否产生干扰信号，如确有干扰信号存在，就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。

3、被测样品在试管壁上的吸附问题。

这个问题也应引起注意，否则也会影响测试结果的准确性，在治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被测药物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，为防止提取中吸附现象的发生，可采用0.5%的已二胺已烷液做为提取剂，可有效地防止吸附。

二、操作进样阀的问题

目前，在分析型高效液相色谱仪中常用的进样阀是7725型进样阀，其内部的六通阀结构使进样操作非常方便，但是，如果使用不当，也会带来问题。例如，在高效液相色谱法的试验过程中，有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题，这主要是由于操作方法不当所引起，要想解决此类问题，需从以下几个方面入手。

1、进样量的控制。

用进样阀来进样时，阀内的样品环是定量的，(一般分析型进样阀的样品环体积为20ul)，由于进样时，注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度(即管轴处比管壁处的液流速度快)。因此，要想使样品环中充满样品溶液，从而使用进样阀来准确地定量，则必须使进样量大于样品环体积的2倍。如果用注射器来控制进样量，则最大只能注射样品环体积1/2的量，这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。

2、进样阀的清洁问题。

如果样品环中有上次进样时样品的残留，必然会污染下次注射进的样品，为防止这种现象的发生，应按下列步骤操作：a.进样阀有2个位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置时，以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次，每次用量大约40ul；b.然后将进样阀板手扳至INJECT位置时，再以流动相清洗几次，每次用量还是40ul；c.最后，再将样品注射到进样阀里。

按照上述的步骤操作，可以避免由进样阀引起的污染，从而使干扰峰消除并提高分析结果的准确性。

3、进样阀溢流管的堵塞。

有时，进样阀的溢流管会发生堵塞现象，向进样阀内注射样品时，注射针推不动。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解样品的流动相用的是盐溶液，而其中的盐在溢流管的排空端口处结晶所致。此时，可用小烧杯盛少量蒸馏水对溢流管口稍加浸泡，端口处盐的结晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次进样完成之后，用蒸馏水反复冲洗至溢流管中的盐分全部冲出，则可避免此故障的发生。

三、流动相(MOBLLE PHASE)的问题

甲醇和乙腈在高效液相色谱分析法中常常被用来配制流动相。高效液相色谱法中常用的试剂最好是高等级的专用试剂，如色谱纯试剂。在要求不太严格时，优级纯甚至分析纯的试剂也能用。高效液相色谱分析法中常用的是紫外检测器，因此，从降低基线噪音和提高分析灵敏度上来考虑，应该使用紫外吸收小且杂质含量少的色谱纯试剂。

1、流动相的过滤。

配制好的流动相在使用前一定要先用0.5um孔径的微孔滤膜来过滤。这是因为溶液中含有很多肉眼难以发现的微小颗粒，如果不把它们滤除掉，就会堵塞泵口、柱头上的过滤器，这样就堵塞了流动相的正常通道，使色谱柱的阻力增加，柱压升高，柱效下降。碰到这种情况时，要换用经过滤的流动相，并将堵塞的滤器拆下来浸泡在20%的硝酸水溶液中以超声波清洗机清洗20分钟，以除去滤片上的堵塞物。

2、流动相的脱气。

流动相在使用前必须脱气，以尽可能的除去溶解在流动相中的气体，否则，这些气体会使柱填料的性能降低，还能够对检测器的信号产生很大的干扰。脱气有多种方法，如超声脱气、真空脱气、氮气脱气等。真空脱气法和氮气流脱气法是目前最常用的脱气法。水和甲醇混合后会产生大量的气泡，如果不脱气就使用，气泡就会进入色谱柱和检测器，并将影响分析工作的正常进行。

四、色谱柱的使用和保养

色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件，被测物质能否被很好的分离和测定，色谱柱的性能起着决定性的作用。因此，在日常工作中，应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养，以延长色谱柱的使用寿命。

1、使用预柱和保护柱。

预柱(pre-column)安装于泵和进样器之间，它给色谱柱中的流动相提供了完全的平衡，并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。保护柱(guard column)可以阻挡能够牢固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱，保护柱应与色谱柱的填料相同。预柱和保护柱可以经常更换，而不需要经常更换色谱柱，这就延长了色谱柱的使用寿命。

2、防止气体进入色谱柱。

有些色谱柱(如凝胶柱)是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此，为了防止气泡进入色谱柱，一定要使用经过脱气的流动相，并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱。a.拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝，观察是否有溶剂渗出；b.如有溶剂渗出，即可将色谱柱接到管路上，以避免气泡的进入；c.如无溶剂渗出时，表明色谱柱的此端已经进去空气了，此时，可将色谱柱的出口端接到进样阀上，以流动相来反方向冲洗色谱柱，以便将柱内的空气排除。最好以0.2ml/min的小流量来冲色谱柱，如果溶剂的流速太快或者是压力突然的上升都将会导致柱性能的降低；d.如果流出的溶剂里不含有气泡，说明柱内的气体已经被排出了，再将色谱柱以正确的方向接好，这样气泡就进不到色谱柱里面了。

3、色谱柱的清洗。

为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液，则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱，以冲掉柱内的盐，然后再用合适的溶剂来冲洗。

凝胶滤过色谱法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝胶柱常用缓冲溶液做流动相，用完之后当然要用蒸馏水来冲洗。如果是连续操作，可以将缓冲溶液置于柱内过夜，但最好是维持小流速(＜0.5ml/min)以防止缓冲盐的析出，如果流动相中含有卤化物，即使是停一夜，也必须要用蒸馏水将色谱柱冲洗干净，以防止它们对柱体的腐蚀。

4、色谱柱的存放。

如果色谱柱暂时不用，存放时要注意以下几点：

a.几天之内的短期放置，应先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗)，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。

b.如果色谱柱长期不用，仅用上述方法来处理就不行了，这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱则可用正已烷或庚烷，而凝胶柱则不能用水了，因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低，此时应用0.05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱，再将色谱柱封严。色谱柱长期放置时，一定要将色谱柱的两端封严，以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，因这可导致柱效的严重降低。

c.色谱柱应贮存在室温下，如果放置于0℃以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。

高效液相色谱仪的构造高效液相色谱仪（HPLC）一般由高压输液系统、进样系统、分离系统、记检测系统、数据处理系统等几部分组成。制备型仪器还需配有馏份收集系统。为了取得较好的分析结果，HPLC仪器对于准确度、精确度、灵敏度及结果重现性有较高的要求。

高效液相色谱仪的工作原理

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

(3)岛津高效液相色谱仪使用方法扩展阅读：

高效液相色谱仪的构造高效液相色谱仪（HPLC）一般由高压输液系统、进样系统、分离系统、记检测系统、数据处理系统等几部分组成。制备型仪器还需配有馏份收集系统。为了取得较好的分析结果，HPLC仪器对于准确度、精确度、灵敏度及结果重现性有较高的要求。

A

BOUT

高压输液系统

高压输液系统包括：溶剂储液瓶、溶剂脱气装置、高压输送泵以及梯度洗脱装置。其中，高压输液泵是高效液相色谱仪的主要部件之一，输送压力达150—350×105Pa。输液系统要为HPLC仪器提供流量恒定、准确、无脉冲的流动相，流量的精度和长期的重复性要好，同时还要提供精度好、准确度高、重现性好的多元溶剂梯度。因此，输液泵的好坏直接影响着整个系统的质量和分析结果的可靠性。

进样系统：进样能在试样引入色谱柱，有六个接口：1,4之间接定量环；2接高压泵；3接色谱柱；5,6接废液管。

色谱分离系统：色谱柱通常为不锈钢柱，内装各种填充剂。常用的填料为硅胶，可用于正相色谱;化学键合固定相，根据键合的基团不同，可用于反相或正相色谱。其中、最常用的是十八烷基键合硅胶，即ODS柱，可用于反相色谱或离子对色谱。

检测系统：检测系统用于连续检测色谱柱流出的物质，进行定性定量分析。要求其灵敏度高、噪音小、基线稳定、响应值的线性范围宽等。近年来各国都在研究开发新的检测技术，进一步扩大了HPLC的应用。

根据检测需要的不同检测器可分为紫外检测器(UVD)、示差折光检测器(RID)、电化学检测器(ECD)、红外检测器(IRD)、核磁共振检测器(NMRD)、质谱检测器(MSD)、蒸发光散射检测器(ELSD)、小角度激光散射检测器(LALLSPD)。

数据处理系统：高效液相色谱的分析结果除可用记录仪绘制谱图外，还可使用微处理机和色谱数据工作站来记录和处理色谱分析的数据。

D. 高效液相色谱质朴联用仪的用法

答案隐藏其中，耐心看吧
LCMS 2010A高效液相色谱质谱联用仪(日本岛津公司) ，配有荧光检测器的Agilent 2010 液相色谱仪（美国惠普公司），Millipore SAS 67120 超纯水仪（Millipore Inc,USA）。LIle(成都化学试剂厂)；DIle和DalloIle（美国Newjersey公司）,LalloIle(瑞士Fluka公司）,其它16对氨基酸（His、Ser、Asp、Glu、Cys、Thr、Try、Leu、Phe、Ala、Tyr、Lys、Pro、Val、Met和Arg）及甘氨酸标准品（Gly）（成都化学试剂厂）；邻苯二甲醛(OPTA)(瑞士Fluka公司)，N乙酰L半胱氨酸（AcCys）(美国Aldrich公司)；醋酸铵为国产分析纯试剂；甲醇为国产色谱纯试剂。水为超纯水。

2.2 液相色谱条件

色谱柱：ShimPack VPODS 5 μm,150 mm×2.0 mm i.d.; 流动相：甲醇0.05 mol/L醋酸铵溶液（40∶60，V/V）；流速：0.2 mL/min；柱温：35℃；进样量：5 μL。荧光检测波长：λex 345 nm，λem 445 nm。

2.3 质谱条件

电喷雾离子化源(ESI)；负离子检测方式；选择离子监测（SIM），m/z 391[M-H]-；曲型脱溶剂装置（CDL）温度：250℃，加热块（block）温度：200℃；毛细管电压：25 V；检测电压：+1.3 kV；雾化气：N2，流速，1.5 L/min；干燥气：N2，流速，2.0 L/min 。

E. 岛津液相色谱仪梯度程序怎么设置

做实验时，需要设置梯度洗脱。对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，往往很难得到理想的分离效果，要么分离时间太长，要么分离度太差。这种情况，采用梯度洗脱就可以缩短分析时间，提高分离效果。1仪器岛津LC2010CHT型高效液相色谱仪（四元泵、在线脱气、自动冷却装置、全自动进样器、紫外检测器)：梅特
勒-托利多AB135-S双量程电子天平；超声波清洗器。色；实验用水采用双重燕馏水；其它试剂均为分析纯。进行高效液相色谱分析时，两种洗脱方法：等度洗脱和梯度洗脱。等度洗脱是由不同溶剂构成的固定比例的流动相，在整个洗脱过程中，流动相的极性、离子强度、DH值等因素皆保持不变。对于较复杂的中药成分来说，只单纯的用等度洗脱来分析中药的成分，显然有些力不从心，为此采用梯度洗脱，在此过程中可调节流动相的极性，改善样品中每个组分的分离度从而达到彻底分离的目的。

F. 岛津高相液相色谱仪如何设置自动关机

摘要 1开机1.1准备流动相，过滤及超声脱气，样品过滤并安装色谱柱。1.2打开SPD-20A，CTO-10Asvp,SIL-20A电源，待各单元自检通过,再打开LC-20AT电源。1.3排气操作：打开LC-20AT泵排空阀，按“Purge”键，泵开始排气运行；按SIL-20A自动进样器“Purge”键，开始排气。1.4在计算机中双击“LCSOLUTION”图标，进入工作站，再双击“仪器1”进入实时分析窗口。2编辑分析方法2.1选择“新建方法”：分别设定Detector  A  SPD-20A的波长， End Time（采集停止时间）， Pump泵参数（流量，最大压限等，在“高级”选项中还可以设置梯度进样），CTO-10Asvp柱温等。2.2保存方法：选择“方法另存为”，文件命名为“*****.lcm”并保存方法。2.3 查看及修改方法: 双击“LCSOLUTION”图标,点击“仪器1”（此图标为一只羽毛笔在纸上书写），出现“分析编辑器”，点击“文件”项下“打开方法文件”调出所需方法文件，即可查看或修改文件，如波长，流速等，修改以上参数后，点击保存，退出。3 系统运行3.1点击图标“下载”传输方法，点击图标“仪器开关”，系统开始运行。3.2检查各单元参数应与方法设定一致，等待系统平衡及仪器出现绿色“就绪”。注：一般情况下，由于流动相交换平衡时间不定。可以观察SPD—20A检测器吸收变化,如果吸收值稳定不变，即认为接近平衡，可以调零等待，确认不变后，可以进样。

G. 岛津高效液相色谱仪液相验证中最小检测浓度的具体操作步骤怎么做

用微量进样器注入20 μL 1×10-7 g/mL 萘－甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声－峰高计算，按照下式计算最小检测浓度：（以20μL进样量计）：
cL=2Ni*c*V/20H
式中：
cL——最小检测浓度，g/mL；
Ni——噪声峰高，Au（或V）；
c——样品浓度，g/mL；
H——样品峰高，Au（或V）。
V——进样体积，μL

按标准就是以上，当然也可以用其他你更关注的样品

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H. 大连江申液相色谱仪LC-10P使用说明书

高效液相色谱仪使用说明
型号：LC-10AT 产地 日本岛津 型号： L C - 10A T 高效液相色谱仪是日本岛津公司 1996 年的产品, 检测器为可变波长紫外检测 器, 色谱柱为岛津公司的 ODS - C18 。 2. 用途： 用途： 高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽, 固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、 离解的和非离解的以及各种分子 量范围的物质。 与试样预处理技术相配合，HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定 性质上十分相近的物质成为可能， 能够分离复杂相体中的微量成分。 随着固定相的发展, 有 可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。由于 HPL C 具有高分辨率、高灵敏 度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食 品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用 是一个重要的发展方向。 3. 测定原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。 储液器中的流动相被高压泵打入系统， 样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱 (固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运 动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被 分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录 仪，数据以图谱形式打印出来。 4. 使用方法 4.1 系统组成：本系统由 1 个 LC-10ATvp 溶剂输送泵、Rheodyne 7725i 手动进样阀、 SPD-10Avp 紫外-可见检测器、色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间 断电源等辅助设备。 4.2 准备 4.2.1 准备所需的流动相，用合适的 0.45?m 滤膜过滤，超声波脱气 20min。 4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。 4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制） ，用合适的 0.45?m 滤膜过滤。 3.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常，特别注意输液管道内 是否有气泡。 4.3 开机：接通电源，依次开启不间断电源、溶剂输送泵、先将机器预热半小时，这时 的流动相用 85％甲醇溶液（已脱气） ，而且要时刻注意输液管道内是否有气泡，如有气泡 要进行排气。预热半小时后，开启检测器，待检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示 器、主机，最后打开色谱工作站。 4.4 各种参数设定 4.4.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按 [Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 4.4.2 流速设定：在输送泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在 线时流速一般不超过 1ml/min） ，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 4.5 更换流动相并排气泡 4.5.1 将输送管道的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶（已排气）中； 4.5.2 逆时针转动泵的排液阀 180 度，打开排液阀； 4.5.3 按泵的[purge]键，pump 指示灯亮，泵大约以 2ml/min 的流速冲洗，3min（可设定） 后自动停止； 4.5.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。 4.5.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 4.5.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为 5ml/min，按[pump]键，冲洗 3min 后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定 值。 4.6 平衡系统 4.6.1 按《大连江申色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信 息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。 4.6.2 等度洗脱方式 4.6.2.1 按输送泵的[pump]键，泵启动，pump 指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系 统，一般最少需 6 倍柱体积的流动相。 4.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。 4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过 1MPa。如超过则可初步判断为柱 前管路仍有气泡，按 3.5 操作。 4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV 时，可认为 系统已达到平衡状态，可以进样。 4.7 测定步骤 4.7.1 计算校正因子 4.7.1.1 用编辑∈实验参数编辑实验参数在编辑实验参数时， 纪录图谱名要按照校正文件名 的格式输入 xxxx0101. 4.7.1.2 用编辑∈积分定量参数对话框，选择单点外标法 4.7.1.3 用编辑∈报告参数对话框编辑好相应的参数，选择校正实验检查框 4.7.1.4 用编辑∈校正∈校正实验参数对话框编辑相应的校正参数及方式， 校正文件名前缀 必须与编辑∈实验参数的文件名前 4 位一致 4.7.1.5 用编辑∈校正编辑定量峰表对话框编辑需要的校正的色谱峰的保留时间、样品名、 每点的含量、峰标志及误差，编辑完成后确认，以后∈校正∈计算校正因子命令利用定量 峰表进行峰的匹配及计算。 4.7.1.6 用∈操作∈数据采集功能进行求校正因子的实验，将标准样品进样，进样前按检测 器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使 其弹起。 4.7.1.7 用∈操作∈峰检测功能对图谱进行峰检测， 完成后用∈操作∈校正∈计算校正因子 及绘制标准曲线。 4.7.2 进样 4.7.2.1 进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一 下 [查看基线] 按钮使其弹起。用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量 4.7.2.2 进行样品分析，用∈操作∈数据采集对样品进行数据采集，并把编辑∈报告参数把 校正文件名填入校正文件名编辑框，然后进测定样。 4.7.2.3 用∈操作∈峰检测， 对采集的色谱峰进行检测， 之后工作站自动装入外标因子文件， 计算出含量。 4.7.2.4 打印报告 用∈打印∈打印分析报告，打印机输出分析报告。 4.8 关机 样品测定结束后，将检测器关机，将输送管道的吸滤器放入装有 85％甲醇溶液（已脱气） 的储液瓶，进行测定系统清洗，半小时后关机。 5. 注意事项 5.1 流动相内有气泡, 关闭泵, 打开泄压阀, 打开 purge 键, 清洗脱气, 气泡不断从过滤器冒 出, 进入流动相, 无论打开 purge 键几次,都无法清除不断产生的气泡。 原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内, 过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团, 阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动 相。 处理过滤器浸泡于 5 %硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于 5 %硝酸 溶液中 12～36 小时, 轻轻震荡几次, 再将过滤器用纯水清洗几次, 打开泄压阀, 打开 p urge 键,清洗脱气, 如仍有气泡不断从过滤器冒出, 继续将过滤器浸泡于 5 %硝酸溶液中, 如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏, 流动相可以 流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至 1. 0～3. 0ml/ min ,纯水冲洗过滤器 1 小 时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。 5.2 柱压高原因(1) 缓冲液盐分如(乙酸铵等) 沉积于柱内; (2) 样品污染沉积。 处理对于第一种情况先用 40～50 ℃的纯水,低速正向冲洗柱子, 待柱压逐渐下降后, 相 应提高流速冲洗, 柱压大幅度下降后, 用常温纯水冲洗, 之后用纯甲醇冲洗柱子 30 分钟; 对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的 C18 柱,和纯水反向冲洗柱子, 然后换成甲醇冲 洗, 接着用甲醇+ 异丙醇(4 + 6) 冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) , 再用 换成甲醇冲洗, 然后用纯水冲洗, 最后甲醇冲洗正向冲洗柱子 30 分钟以上。 5.3 既无压力指示,又无液体流过 原因(1) 泵密封垫圈磨损; (2) 大量气泡进入泵体。 处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时, 用一个 50ml 的 玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。 5.4 压力波动大,流量不稳定. 原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。 处理工作中注意观察流动相的量, 保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动 相要充分脱气[2 >。 如为单向阀和阀座之间夹有异物, 拆下单向阀, 放入盛有丙酮的烧杯用 超声波清洗. 5.5 出峰不佳,峰分叉。 原因(1) 色谱柱被污染; (2) 柱头填料塌陷。 处理对于第一种情况, 先用纯水反向冲洗柱子, 然后换成甲醇冲洗, 接着用甲醇+ 异丙 醇(4 + 6) 冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) , 再换成甲醇冲洗, 然后用纯 水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子 30 分钟以上。 如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情 况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料) , 装入新填料, 滴一滴甲醇, 填料下陷, 再填, 用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧, 再填平, 滴甲醇, 再压紧反复几次, 直至装满填平[2 >。柱头用甲醇冲洗干净, 擦净柱外壁 的填料, 拧紧柱头,用纯甲醇冲洗 30 分钟以上。 5.6 峰面积重复性不佳。 原因(1) 进样阀漏液; (2) 加样针不到位。 处理对于第一种情况更换进样阀垫圈; 对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶 液后须快速、平稳地从 LOAD 状态转换到 INJ EC T 状态,以保证进样量的准确。日常工 作中, 液相色谱仪的保养非常重要, 如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中, 储液 器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液, 每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲 洗干净,防止无机盐析出或沉积; 样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质, 完全溶解, 尽量减少对色谱柱的污染, 以延长色谱柱的使用寿命, 同时避免注射过浓的样 品溶液, 以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞; 色谱柱作好标记,用于不同分析目的 的色谱柱不要混用等。