蛋白质沉淀常用方法中不变性的

❶ 蛋白质的沉淀与变性的区别有哪些

1、性质不同

蛋白质从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。蛋白质的变性（denaturation），在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，称为蛋白质的变性。

2、结果不同

蛋白质沉淀，破坏蛋白质分子的水化作用或者减弱分子间同性相斥作用的因子，使蛋白质在水中的溶解度降低而沉降下来转化为固体的分离方法。

蛋白质变性，蛋白质的变性不涉及一级结构的改变，蛋白质变性后，其溶解度降低、黏度增加，生物活性丧失，易被蛋白酶水解。若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，有些蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性。变性的蛋白质不一定发生沉淀，在一定条件下也可以使蛋白质不变性而沉淀（如盐析）。

3、方法不同

蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。

❷ 沉淀蛋白质的方法有哪些，各有和特点

等电点沉淀法和盐析

一、等电点沉淀法

等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。

在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。

二、盐析

盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。中性盐是强电解质，溶解度又大，在蛋白质溶液中，一方面与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出。

向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。

把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物（胶体）。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。

(2)蛋白质沉淀常用方法中不变性的扩展阅读：

蛋白质的变性

1、物理因素包括：加热、加压、搅拌、振荡、紫外线照射、X射线、超声波等

2、化学因素包括：强酸、强碱、重金属盐、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。

3、在热、酸、碱、重金属盐、紫外线等作作用下，蛋白质会发生性质上的改变而凝结起来。这种凝结是不可逆的，不能再使它们恢复成原来的蛋白质．蛋白质的这种变化叫做变性。蛋白质变性之后，紫外吸收，化学活性以及粘度都会上升，变得容易水解，但溶解度会下降。

4、蛋白质变性后，就失去了原有的可溶性，也就失去了它们生理上的作用，因此蛋白质的变性凝固是个不可逆过程。

❸ 欲使蛋白质沉淀且不变性宜选用（ ）A. 加热 B. 重金属盐 C. 某些酸类 D. 盐析

选D，加热、重金属盐、某些酸类都会使蛋白质变性，盐析蛋白质会沉淀，不会变性。

❹ 蛋白质沉淀法原理

原理：蛋白质通过盐析的办法沉淀的原理是降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出。

蛋白质分子聚集而从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。由于水化层和双电层的存在，蛋白质溶液是一种稳定的胶体溶液。如果向蛋白质溶液中加入某种电解质，以破坏其颗粒表面的双电层或调节溶液的pH，使其达到等电点，蛋白质颗粒因失去电荷变得不稳定而将沉淀析出。

蛋白沉淀法是毒物分析过程中对生物样品进行前处理的一种常用方式。对于富 含蛋白质的检材，在进行分离、提取时要将 大量干扰测定的蛋白质沉淀除去，使待测毒 物仍留存于溶液中。

操作时一般要先将检材组织磨碎，然后再加入蛋白沉淀剂进行蛋白质沉淀，组织中的蛋白质与沉淀剂形成疏松的絮状沉淀物，而毒物则留在溶液中。

(4)蛋白质沉淀常用方法中不变性的扩展阅读：

有机溶剂易使蛋白质或酶变性，常采用降低温度的方法进行有效控制， 而且有机溶剂使用量大，溶剂的使用及回收；储存都比较困难或 麻烦。 盐析法：盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种 球蛋白的提取、蛋白质的浓缩等。

盐析法提纯的抗原浓度不高，只用于抗原的初步纯化。 金属离子沉淀法纯度高,太耗电，沉淀效果很好，容易使生物分 子变性，复合物难分解。

选泽性变性沉淀法：溶解度下降、粘度 增加、紫外线吸收增加、侧链反应增强、对酶的作用敏感，易被 水解 （这就是为何蛋白类食品在被加热至变性后人体对其中氨基 酸的吸收。能力增强） 等电点沉淀法无机酸会引起较大的蛋白质不可逆变性的危险等电点装置复杂,也比较纯。

蛋白质变性指在某些物理和化学因素如热、有机溶剂、重金属离子、生物碱试剂等作用下，蛋白质特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。

❺ 蛋白质沉淀不变性的有哪些

蛋白质的变性与沉淀有密不可分的关系,常可以看到变性的蛋白质在溶液中沉淀,但并不是所有变性的蛋白质都会在溶液中沉淀.具体地说,变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀,变性蛋白质只在等电点附近才沉淀,沉淀的变性蛋白质也不一定凝固.例如,蛋白质被强酸、强碱变性后由于蛋白质颗粒带着大量电荷,故仍溶于强酸或强减之中.但若将强碱和强酸溶液的pH调节到等电点,则变性蛋白质凝集成絮状沉淀物,若将此絮状物加热,则分子间相互盘缠而变成较为坚固的凝块.
蛋白质沉淀的原理.蛋白质形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即颗粒表面的水化层和电荷.若无外加条件,不致互相凝集.然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂),蛋白质便容易凝集析出.如将蛋白质溶液pH调节到等电点,蛋白质分子呈等电状态,虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了.但是还有水化膜起保护作用,一般不致于发生凝聚作用,如果这时再加入某种脱水剂,除去蛋白质分子的水化膜,则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀.反之,先使蛋白质脱水,然后再调节pH到等电点,同样可使蛋白质沉淀析出.

❻ 常用蛋白质沉淀方法有哪些有哪些应用实例求答案

沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀，也可以是由于盐析。
蛋白质变性是指光照，热，有机溶济以及一些变性剂（如重金属盐）的作用时蛋白质的空间结构被破坏，使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆。
盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐，使得蛋白质沉淀析出，这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆，加水蛋白质又会溶解。
（一）材料的预处理及细胞破碎
分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有：
1. 机械破碎法
这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
2. 渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
3. 反复冻融法
生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4. 超声波法
使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
5. 酶法如用溶菌酶破坏微生物细胞等。
(二) 蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
（三）蛋白质粗制品的获得
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：
1. 等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2. 盐析法不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
3. 有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。
（四）样品的进一步分离纯化
用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。

❼ 蛋白质沉淀了就变性了吗用什么方法能让它溶解且有活性

用普通的盐不会变性
只有加热，重金属盐，强酸强碱，各种射线才会变性
沉淀不一定变性的

❽ 为什么说蛋白质变性不一定沉淀，而沉淀不一定变性

1、蛋白质变性是指光照，热，有机溶济以及一些变性剂（如重金属盐）的作用时蛋白质的空间结构被破坏，使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆。

2、沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀，也可以是由于盐析。盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐，使得蛋白质沉淀析出，这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆，加水蛋白质又会溶解.。

(8)蛋白质沉淀常用方法中不变性的扩展阅读：

一、蛋白质变性的结果：

1、生物活性丧失：

蛋白质的生物活性是指蛋白质所具有的酶、激素、毒素、抗原与抗体、血红蛋白的载氧能力等生物学功能。生物活性丧失是蛋白质变性的主要特征。有时蛋白质的空间结构只要轻微变化即可引起生物活性的丧失。

2、某些理化性质：

蛋白质变性后理化性质发生改变，如溶解度降低而产生沉淀，因为有些原来在分子内部的疏水基团由于结构松散而暴露出来,分子的不对称性增加，因此粘度增加，扩散系数降低。

3、生物化学性质

蛋白质变性后，分子结构松散，不能形成结晶，易被蛋白酶水解。蛋白质的变性作用主要是由于蛋白质分子内部的结构被破坏。

二、引起蛋白质变性的原因可分为物理和化学因素两类。

1、物理因素：加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波的作用等。

2、化学因素：强酸、强碱、尿素、重金属盐、十二烷基硫酸钠(SDS)等。

❾ 使蛋白质沉淀但不变性的方法有： A.中性盐沉淀蛋白 B.鞣酸沉淀蛋白 C.低温乙醇沉淀蛋白 D.重金属盐沉淀蛋

A和C
别的都简单，C选项：低温乙醇分离法是十九世纪40年代创建的一种血浆蛋白分离纯化的生化技术，乙醇作为一种蛋白沉淀剂，具有许多优点：介电常数低、与水易混溶、在正常环境和工作条件下无易爆性、低分子量、化学上的相对惰性、低毒、价廉、易得和抑菌作用。至今，大规模血浆蛋白分离仍基本采用低温乙醇分离法。