⑴ pcr仪的用途是啥子
PCR仪器被广泛运用于医学、生物学实验室中,例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定等。
⑵ 跪求MyCycler 个人普通 PCR 仪 / 梯度 PCR仪的使用说明书
bio-rad的官方网站就有他们公司各种仪器的产品说明书和宣传海报的pdf下载。
bio-rad的网址 http://www3.bio-rad.com
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MyCycler pcr 仪是一个系列,你没有注明型号,我也没法帮你找具体是哪个pdf文件。不过,按照我说的方法,肯定能找到满足你需求的。
其实这个系列的pcr仪的操作方式非常简单,不用看说明书也能立即上手的。
⑶ pcr仪使用时,在设定反应程序时,一共分了多少个步骤
1.常规程序
将PCR反应所需的成分配置完后,在PCR仪上于94-96℃预加热几十秒至几分钟,使模板DNA充分变性,然后进入扩增循环。在每一个循环中,先于94℃保持30秒钟使模板变性,然后将温度降到复性温度(一般50-60℃之间),一般保持30秒钟,使引物与模板充分退火;在72℃保持1分钟(扩增1kb片段),使引物在模板上延伸,合成DNA,完成一个循环。重复这样的循环25~35次,使扩增的DNA片段大量累积。最后,在72℃保持3-7min,使产物延伸完整,4℃保存。
2.复性(退火)和延伸温度
复性的温度是PCR扩增是否顺利的关键因素,通常在50-60℃之间。具体的温度主要由引物的Tm值决定。延伸温度绝大多数设定为72℃。如果复性的温度很高,可以将延伸温度和复性温度设置成同一温度,变成二步法PCR。
3.反应时间
变性步骤一般使用30秒钟,如果模板的G+C含量较高,或直接用细胞做模板,变性时间可适当延长。复性时间有30秒种一般是足够的。延伸时间由扩增产物的大小决定,一般采用1kb用1分钟来保证充足的时间。
4.循环次数
循环次数主要与模板的起始数量有关,在模板拷贝数为104~105数量级时,循环数通常为25~35次。
平台效应(plateaueffect):PCR扩增过程后期会出现的产物的积累按减弱的指数速率增长的现象。原因:底物和引物的浓度已经降低,dNTP和DNA聚合酶的稳定性或活性降低,产生的焦磷酸会出现末端产物抑制作用,非特异性产物或引物的二聚体出现非特异性竞争作用,扩增产物自身复性,高浓度扩增产物变性不彻底。
5.PCR反应液的配制
PCR反应体系的配置方式有时也会影响反应的正常进行。常规方法与其它酶学反应一样,在最后加入DNA聚合酶。早期的PCR仪没有带加热的盖子,要求在反应液上覆盖一层矿物油,防止水分蒸发。
对于使用具3’-5’外切活性的高温DNA聚合酶时,有时会扩增不出产物。在遇到这个问题时,如果将反应成分分开配制,A管含模板、引物和dNTP,以及调整体积的H2O,B管含缓冲液、DNA聚合酶和水,然后再将两管溶液混合起来,可较好地克服这个问题。
按照常规的方法配制反应体系,有时会出现非特异性扩增的问题。热启动(hotstart)PCR操作方式可较好解决这一问题。将dNTP、缓冲液,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蜡珠(如AmpliWaxPCRQam100),加热熔化,再冷却,使蜡将溶液封住,最后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有当PCR反应进入高温阶段后,蜡层熔化,所有反应成分才会混合在一起。
⑷ pcr仪如何使用
1,设计程序:预变性温度 时间
变性温度 时间
退火温度 时间
延伸温度 时间 一般10分钟左右
循环 设计次数 一般35次左右
保持温度 一般37度 foreve
end
如果继续下一阶段实验,按退出,及下一步step,就是end,然后就可以取出样品了
⑸ 实时荧光定量pcr仪器怎么用的
实时荧光定量pcr仪器怎么用的
用已知浓度的DNA样本(通常是质粒)梯度稀释成一系列的样本。做实验的时候,这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内。一起做PCR。
标准品的荧光强度和已知的浓度作图,可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后,就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
⑹ PCR仪器怎么用
不用说明书啊 你就看着它的界面按顺序一步步操作就可以了,一般都是很容易设置的,无非就是设一下时间温度循环数。
或者可以上这个网站看看,里面有比较详细的说明,常用的型号一般都有。
http://www.bbioo.com/instrument/PCR/Index.htm
⑺ 请问谁有ABI 2700的PCR仪的操作说明,希望能指教一下,不胜感激,谢谢啦!
我就大概讲下吧。不大明白再问。
首先,PCR体系构建好后,把标签写在PCR管的管身上部分上,不要写在管盖上。
然后将PCR管放入PCR仪内,盖上盖子后,打开电源。
进行开机页面后,按F2,对应“Create”命令。进行PCR体系设定页面。
通过上下左右键来移动到相应的设定位置上。要注意的是最前面一行上有个循环数记得设定。
参数设定好后,进入一个页面,设定PCR体系的体积,20ul或50ul,然后就开始进行PCR反应了。
⑻ PCR仪使用的注意事项
PCR仪的使用应该按照说明书上的来!
尽量不要保存过夜,能经常使用就不容易坏!