麦氏比浊管使用方法

1. 请问麦氏比浊管配制方法

附件3 药敏试验
药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉维酸（AMC），头孢噻吩（CFT），头孢噻肟（CTX），庆大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），环丙沙星（CIP），四环素（TBT），利福平（RFA），复方新诺明（SMZ）。药敏结果判定标准按照NCCLs手册2005版。
1. 操作方法：
（1）将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。
（2）用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。用棉拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
（3）待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。在菌接种后15分钟内贴完纸片。
（4）将平板反转，孵育18～24小时后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录（附表6）。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。
（5）每次药敏试验必须用ATCC 25922大肠杆菌做质控。只有当质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内测试菌株的结果才可以报告。ATCC 25922的结果必须与测试菌株同时记录和报告在附表6中。
0.5麦氏比浊管配制方法：
0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml
0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml
将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。

2. 注意事项：
(1) 制备MH琼脂平板应用直径90mm平皿，在水平的实验台上倾注。琼脂厚为4±0.5mm（约25-30ml培养基），琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在5日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。pH过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。
(2) 药敏纸片长期储存应于－20℃，日常使用的小量纸片可放在4℃，但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开，用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。 过期纸片不能使用, 应弃去。
(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保证质控菌株不变异的简便方法，将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，传出细菌供常规用。待用剩至最后一支，可传种在M-H平板上，再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。
3.质量控制
质量控制方法 是用与常规实验相同的操作方法，测定质控菌株的抑菌环。应使用新鲜传代的菌种。接种菌液的涂布方法等均同常规操作，测定的抗菌素种类也应与常规测定的种类相同。

2. 麦氏比浊管的介绍

在微生物学中，通过比对溶液浊度，麦氏比浊管常用来校对细菌悬浮液至某个特定浓度。例如在医药学领域常见的微生物抗药物敏感性试验中，用来测量最小抑菌浓度。最初的麦氏比浊管是通过混合特定浓度的氯化钡和硫酸，从而形成硫酸钡悬浮液。例如0.5号麦氏比浊管是由0.05毫升1%氯化钡溶液加9.95毫升1 %硫酸制成。现在也有由乳胶粒子悬浮液制成的麦氏比浊管，与传统的麦氏比浊管相比，保存时间更长也更稳定。

3. 麦氏比浊法

在临床微生物学检验中，麦氏比浊法常用于细菌鉴定、药敏实验前配置菌液时大致判断菌液浓度的一种方法，通常认为，如将配菌液浓度配成0.5麦氏比浊管时，相当于1.5×108细菌数/ml，由于方法本身就是一种估计的方法，所以尽管不同细菌大小差异很大，除了真菌孢子，细菌的差别不大，结果不会有影响。但是，标准比浊管的浓度，是药敏实验结果的影响因素之一。
K-B法药敏试验时接种物配制有两种方法，第一种是肉汤增菌法（对数生长法），是用接环挑取3-5个细菌菌落入肉汤增菌管中进行增菌4-6小时，然后用生理盐水或肉汤对增菌管中的培养物进行稀释校正使其浓度达到0.5麦氏比浊标准（因为经过增菌培养其培养物浓度一般都高于此标准）。第二种方法是直接菌落法：从孵育18-24小时的非选择性培养基上，挑取3-5菌落，直接用肉汤或盐制成悬液作为接种，然后将浊度调整至0.5麦氏比浊标准。此法是检测苛养菌（如嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌）和潜在的对甲氧西林耐药的葡萄球菌的推荐方法。
0.5麦氏比浊管配制方法：
0.048M
BaCL2
(1.17%
W/V
BaCL2
.
2H2O)
0.5ml
0.36N
H2SO4
(1%,
V/V)
99.5ml
将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。
应用时，可目测或使用比浊仪即可。
http://www.cjic.com.cn/bbs/dispbbs.asp?boardid=8&id=84
先弄清原理，再分析就知道了

4. 在没有麦氏比浊管情况下怎样测细菌浓度

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5. 0.25%BaCl2和1%H2SO4如何配制 麦氏比浊管0,5的配制

【】0.25%BaCl2配制：
先计算配制一定体积（例如：1000ml）的0.25%BaCl2 溶液需要的质量数,再用自来水溶解、稀释到1000ml的体积数.
【】1%H2SO4如何配制
以18.4mol/L 的硫酸,确定配制体积、取样体积

6. 麦氏比浊管中1%氯化钡溶液是体积分数么

麦氏比浊管中1%氯化钡溶液是体积分数
个人理解的概念：
0.048mol/L(1.175%)氯化钡0.5ml加0.18mol/L(1%)硫酸溶液99.5ml,混合后用530nm波长比色调整其浊度,使吸收值为0.1.该浊度为0.5麦氏比浊标准（Mcfarland Standard）,相当于5*10的7~8次方CFU/ml的含菌量.
以下内容为引自阳光检验网的一位朋友:
麦氏浊度标准（0.5号）
（1） 将0.5mL 0.048mol/L的BaCL2 (1.175%w/v BaCL2·2H2O)加到99.5mL 0.18mol/L （0.36N）的H2SO4(1%v/v)中并不断搅动以维持混悬状态.
（2） 按每管4-6mL将硫酸钡悬液分装于带悬盖的管子中,管子尺寸应与培养或稀释接种菌所用的管子一致.
（3） 这些管子应密封并贮存于室温避光处.
（4） 每次使用前,应将浊度标准管置于旋转混匀器上剧烈振动,目测其外观浊度应均匀一致.若有大颗粒出现,此标准管应更换.
（5） 使用前核实其正确浓度,每个月都应证实或更换.浊度标准的正确浓度应使用分光光度计测定吸光度核实.该分光光度计光径为1cm,并配有合适的比色杯.0.5号麦氏标准管在625nm处的吸光度值应为0.08-0.10.
你说的仪器分两个量程

7. 冻存管的冻存管的使用步骤

⑴ 从细菌纯培养物中挑取新鲜培养物配成大约为3-4麦氏比浊度的菌悬液接种与菌种保存管中。
⑵ 拧紧保存管，来回颠倒4-5次使细菌乳化，不能旋摇。
⑶ 把保存管放入冰箱保存（-20℃--70℃）

8. 麦氏比浊法

在临床微生物学检验中，麦氏比浊法常用于细菌鉴定、药敏实验前配置菌液时大致判断菌液浓度的一种方法，通常认为，如将配菌液浓度配成0.5麦氏比浊管时，相当于1.5×108细菌数/ml，由于方法本身就是一种估计的方法，所以尽管不同细菌大小差异很大，除了真菌孢子，细菌的差别不大，结果不会有影响。但是，标准比浊管的浓度，是药敏实验结果的影响因素之一。
K-B法药敏试验时接种物配制有两种方法，第一种是肉汤增菌法（对数生长法），是用接环挑取3-5个细菌菌落入肉汤增菌管中进行增菌4-6小时，然后用生理盐水或肉汤对增菌管中的培养物进行稀释校正使其浓度达到0.5麦氏比浊标准（因为经过增菌培养其培养物浓度一般都高于此标准）。第二种方法是直接菌落法：从孵育18-24小时的非选择性培养基上，挑取3-5菌落，直接用肉汤或盐制成悬液作为接种，然后将浊度调整至0.5麦氏比浊标准。此法是检测苛养菌（如嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌）和潜在的对甲氧西林耐药的葡萄球菌的推荐方法。

0.5麦氏比浊管配制方法：
0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml
0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml
将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。
应用时，可目测或使用比浊仪即可。

http://www.cjic.com.cn/bbs/dispbbs.asp?boardid=8&id=84

先弄清原理，再分析就知道了