㈠ 原生质体融合的诱导融合法是怎样做的
诱导融合的方法大体可以分为物理的和化学的两类。前者是利用显微操作、灌流吸管、离心或振动等机械以促使原生质体融合,这种方法目前多与诱导剂结合起来使用,化学融合法是用不同的试剂作诱导剂,促使原生质体融合,形成异核体(heterokaryons)。
目前常用的较有效的是高pH—高钙法、NaNOsubscript3subscript和聚二乙醇法。
图3-1:原生质体融合方法
㈡ 原生质体融合的方法
原生质体融合的方法主要包括化学融合法、电融合法和激光诱导融合法。具体内容如下:
1、化学融合法。最常用的是聚乙二醇(PEG)助融法,通过在无菌条件下混合双亲原生质体并加入PEG溶液来诱导融合,此方法融合效率高,适用范围广。
2、电融合法。这种方法涉及将双亲原生质体悬浮混合后,置于微电极之间,施加交变电场,导致原生质体质膜瞬间被击穿,从而发生融合。
3、激光诱导融合法。这种方法利用激光微束技术对细胞进行照射,诱导细胞发生融合,其优点是毒性小、损伤小,但设备昂贵,操作技术难度大,融合效率相对较低。