食用菌母种提纯的方法

A. 香菇菌种怎样培养出来的

自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。
(一)母种的分离培养
食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。
1.孢子分离法
孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
(l)单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，
让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。
(2)多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种：
①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面;上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印(平菇极淡紫色，蘑菇、草菇
为褐色，香菇、金针菇孢子印白色)。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入
20℃左右恒温箱培养。
②褶上涂抹法：按无菌操作分离时;应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。
③钩悬法：取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片(黑木耳、毛木耳、白木耳〕，用无菌不锈钢丝(或铁丝、棉线等其他悬挂材料)悬挂于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、转接即可。
④贴附法：按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块，
用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁上。经6～12小时的培养，待孢子落在斜面上，立即把孢子连同部分琼脂培养基移植到新的试管中培养即可。
孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮，当母种定植一星期左右，菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管，进而转管扩大，一般到栽培种，转管不宜超过5次。
孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。
一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等，都可用多孢分离法获得母种。
现就银耳孢子分离略述于下：
按无菌操作获取种耳后，悬挂种耳的三角瓶经12小时培养后，瓶底培养基表面就有"孢子印"。取出种耳，置
20℃—25℃温箱培养2～3天，培养基表面会出现乳白色透明的糊状小菌落，就是银耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝。此时移接入试管斜面培养基上，待长满斜面后，再移接入营养丰富，且表面比较干燥的培养基上。经30天左右，菌落长出白色菌丝。
银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子囊菌(香灰菌丝)混合培养时，由后者帮助分解木材及其他一些纤维物质，提供营养，才能利于银耳孢子萌发，菌丝的定植和子实体的形成。
在两种菌丝交会时，先选出两种纯菌丝。
羽毛状菌丝要纯化选育，一般要选取生长迅速，爬壁力强的试管斜面或种瓶，取先端菌丝，转管移接，置25℃—28℃上培养，重复转管几次即可得到优良纯种。
银耳菌丝的特点，菌丝生长缓慢，担孢子也不易萌发。在进行两菌混合时，先取经8～IO天培养的银耳菌丝斜面，按无菌操作方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接入一
小块羽毛状菌丝。置25℃下培养1周即得到混合好的银耳母种。
2.组织分离培养法
利用子实体内部组织，进行无性繁殖而获得母种的简便方法，即组织分离。该法操作简便，菌丝生长发育快，品种特性易保存下来，特别是杂交育种后，优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来。常采用以下分离方法。
(l)子实体分离：种菇要选朵大盖厚，柄短，八九分成熟的优良品种。切去菇两基部，在无菌箱内以0.1%的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干或用75%酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。接种时，只要将种菇撕开，在萌盖和菌柄交界处或菌褶处，挑取一小块组织;移接
到PDA培养基上。置25℃左右温度下培养3-5天，就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、平菇等可以用此方法。
(2)菌核分离：茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集。而常见的是它贮藏营养的菌核。用菌核分离，同样可以获得菌种。方法是将菌核表面洗净，用酒精或升汞消毒后，切开菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在PDA
培养基斜面上，保温培养。应注意的是，菌核是贮藏器官，大部分是多糖类物质，只含有少量的菌丝，因此挑取的组织块要大一些，如果组织块过小，则不易分出菌种。
(3)菌素分离：有一部分子实体不易找到，也没有菌核，可以用菌素进行分离。如蜜环菌、假蜜环菌。其操作方法是先用酒精或升汞将菌素表面黑色皮层轻轻擦拭2～3次，
然后去掉黑色外皮层(菌鞘)，抽出白色菌髓部分;用无菌剪刀将菌髓剪一小段，接种在培养基上，保温培养，即得该菌菌种。
菌素分离要注意：因菌素比较细小，分离素也比较细小，分离时极易污染杂菌，所以要严格操作。
3.基内菌丝分离培养法
利用食用菌生育的基质作为分离材料，来得到纯菌种的一种方法，叫基内菌丝分离法。
此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现，而且是朝生暮死，不易采得的子实体。基内分离法与组织分离法不同之点是，干燥的菇木或耳木中的菌丝常呈休眠状态。接种后有时并不立刻恢复生长。因此，有必要保留较长的时间(约1个月)，以断定菌丝是否能成活。基内菌丝分离法又可分为，材中菌丝分离(即菇木或耳木分离法)及土中菌丝分离法等。
(1)材中菌丝分离法：就是菇木或耳木分离法，为了减少杂菌的感染，菇(耳)木在分离之前，必须进行无菌处理。可以把菇(耳)水表面用酒精灯火焰轻轻烧过，以烧死霉菌的孢子，或再用0.1%的升汞水浸孢几分钟，然后用无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干。接种块切取时应注意。接种块必须在该菌菌丝分布的范围内切取。所以，菌丝生长缓慢的种类应浅取;菌种生长快的种类可以深取。同时。还应根据菇菌的种类、木材质地、菇(耳)木粗细、发育时间的长短来确定菌丝分布的范围。然后用一把利刀进行切取。接种块应尽量小些，以减少杂菌感染机会，提离菌种的纯度。接种块移到培养基上，就应该放到适合菌丝生长的22℃～26℃
的温室或温箱中培养，使菌丝恢复生长。
(2)土中菌丝分离：食用菌种类很多，许多土生的食用菌;孢子不易萌发。组织分离也不易成功，用土中菌丝分离获得纯种的方法，叫土中菌丝分离。
土中菌丝分离时要注意，由于土中菌丝体的周围生活着多种多样的土壤微生物，因此分离时必须尽可能避开这些微生物的干扰，尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接种，反复用无菌水冲洗，在培养基中加入一些抑制细菌
生长的药物，如
40微克/升的链霉素或金霉素。如发现感染细菌，可以把菌落边缘的菌丝挑出来，接种到木屑培养基中。因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑培养基中不易扩展;只局限于接种处。待菌丝长出感染区后，就可以再进行扩大提纯了。
(3)子实体基部分离：从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分离出新菌丝的方法，叫子实体基部分离，现以袋栽银耳为例说明：
从出耳早、出耳率离、无病虫害的栽培室中;选择生活力最强的幼耳5袋，移到气候温和，有散射光的野外场所进行后期培养，以增强菌丝体的生活力。经培养7～10天后，待子实体直径达4～5厘米时便可取回，作为分离的母体。再从中筛选最理想的一朵，用利刀割掉银耳子实体，放置于
0℃的冰箱或有敌敌畏的容器中过夜，以便杀死瓶中的害虫。然后用75%酒精或升汞擦洗耳基和袋子外边的杂质，连同接种工具、接种培养基等移进无菌室。经灭菌后，用接种刀把袋口上部约15毫米厚的老菌根挖除，并进行培养。待袋口露出白色菌丝时，用接种针挑取一块半粒米大的白色菌结体，迅速移入母种试管培养基的中央，轻轻地脱去接种针，
塞上棉塞。
为了能够获得较多的母种，一次接种量要有100—200支试管，以便从中选择。分离后应及时移入22℃—24℃恒温箱或温室中培养。由于培养基内水分较多，菌丝恢复要比耳木分离得快。经2-3天后，分离物的边缘就可看
到白色菌丝。每天要至少观察两次，以便提纯。观察、提纯方法与耳木分离法担同。经适温培养10-15天后，当接种块扭结团出现红、黄色水珠时，即可扩大原种。
(二)原种和栽培种的接种培养
母种获得以后，为了满足菌种生产的需要。应选出优良、纯度高的母种进一步扩大为原种。
原种培养基一般采用棉籽壳、木屑、草类等培养基。
瓶装或袋装的原种培养基灭菌后，可送入灭过菌的接种箱内，待瓶中的培养基冷至30℃以下，可按照无菌操作程序进行接种。
菌种瓶(袋)放入培养室时，要经常进行检查，一经发现杂菌污染，立即取出。培养成的原种，菌丝体必须健壮有力，紧贴瓶壁而不干缩，颜色纯正，具有一定清香味，生活力强，扩制成栽培种时吃料快。
栽培种就是将原种进一步扩大培养成三级种，它和原种的接种及培养相同。一般香菇、平菇、冬菇、猴头、木耳、银耳的栽培种多用锯木、棉皮作培养基。蘑菇多用粪草做培养料。
栽培种要求料块不脱水干缩。菌丝体健壮有力、颜色纯正，有清香味，无老化现象，无杂菌污染，有的种许可有少量原基，接入栽培料后，发菌快，长势好，生活力强。
原种在接栽培种时，原种瓶口的一层菌丝体应挖去不用。
(三)液体种的简单培养
目前，用液体深层发酵法生产菌种，具有生产量大、周期短、菌龄整齐、成本低廉、接种方便等特点，是实现食用菌工厂化生产的目标。现将液体种培育过程简述于后，供参考。
简言之就是将纯正优良的菌种，接入液体培养基(固体培养基不加凝固剂)，使菌丝繁殖形成大量小菌球，然后将这种培养基拌入木屑或棉籽皮料内，制成菌块、培养其形成子实体。还可用于制原种、栽培种。
培养液体菌种，可将培养液装入三角瓶中，约占空瓶的五分之一重量。用摇瓶机(也称摇床)来培养。摇瓶机有旋转式和往复式两种，一般多用往复式。液体培养基可用马铃薯汁(加糖)，麦芽汁配制，也可用玉米粉、豆饼粉、糖、无机盐等配制。可以混合培养基，因适用于多种食用菌和药用菌的培养，均有好效果。组分：豆饼粉2%，玉米粉1%，
葡萄糖3%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.1%，碳酸钙 0.2%， pH自然， 12℃灭菌半小时。然后接种培养。
如果生产量较大，在三角瓶的基础上，再逐级扩大种子缸，发酵罐中进行液体深层通气发酵，产生大量菌种。但由于生产中要求设备繁多，技术性强，我们还应创造条件;实现食用菌栽培的现代化。
(四)菌种质量的鉴定
菌种质量鉴定最好的方法是，做出菇试验。但是时间比较长。在购置菌种时，或在菌种生产中，如何能知菌丝生长情况，快速判断菌种质量?我们介绍几种方法：
1.肉眼观察：优良菌种菌丝浓白，绒状，粗壮密集，生长整齐，速度快，香味浓厚。
2.优良菌种标准可归纳为："纯、香、正、壮、润"五个字。检查时，打开瓶塞，从菌种瓶中部取出小块菌丝体，观察色泽，闻其气味，手捏料块检查其含水量，看是否符合上述要求标准。
3.显微镜检查：挑取少量菌丝，置显微镜上观察其形态，菌丝分枝，分隔情况，锁状联合，细胞膜的厚薄。
培养观察：从菌种瓶中挑取小块菌丝体，接种斜面试管培养基上，置23℃～25℃恒温中培养，经五周后检查菌种生活力。如果菌丝生长快，旺盛纯一，健壮浓厚，长且整齐，则表示菌种的生活力强。
4.分块法：在桌上放一张白纸，把菌龄相同的菌种从瓶内取出一大块，用手分成2块，再把2块分成4块，4块
分成8块，依次进行。优良菌种整块多，碎渣少。劣次菌整块少，碎渣多。
5.液体菌种鉴别：当三角瓶或发酵缸培养3-7天后，如液面出现气泡，产生"油皮"、混浊等现象，说明菌种本
身带有杂菌。如菌块上浮，或迟迟长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱。白块四周的菌丝生长快、浓白、棉絮状，表明菌种生命力强。
(五)菌种生产过程中的杂茵防治
在生产菌种时，要时刻注意杂菌污染，以防为主，一旦发生，根治很不容易。所以整个制种过程都必须在无菌条件下进行。接种箱及所有分离、接种的用具、器皿，都要进行严格的消毒灭菌。工作人员的双手要用消毒剂清洗，并穿戴消过毒的工作服、帽和口罩，动作要敏捷、准确，尽量不要讲话走动，以防空气中的杂菌感染。
分离母种时，选择出菇早、生活力强，第一潮菇是关键，因它生活力强，接种后迅速占领阵地，无杂菌侵入的机会。
被污染的菌种，原因是多方面的，一般是灭菌不彻底所致，或因接种时无菌操作不严、瓶盖不合适造成的。所以灭菌一定要彻底，最好在接种萌将培养基置25℃左右温箱中做效果检查，经2天不长杂菌，说明彻底，可以使用，接种过程中一定要严格无菌操作。
污染杂菌另一个原因可能是分离母种时感染杂菌，因种菇表面带菌，消毒不彻底，通过组织块将杂菌带入培养基。
总之，污染机会很多，要注意环境消毒，按无菌操作规程彻底灭菌，层层把关，环环抓紧，严加注意;提离菌种质量。

B. 食用菌母种制作技术

在食用菌生产过程中，母种的培养是关键环节。母种的质量直接关系到食用菌的产量和栽培的成功与否。接下来，我将详细介绍食用菌母种的制作技术。
首先，我们需要准备母种培养基。以配制1000毫升的母种培养基为例，需要200克新鲜无病害的马铃薯、20克葡萄糖、20克琼脂粉、10克蛋白胨，以及1000毫升水。将马铃薯去皮后切片，加水煮沸20分钟后过滤，取得马铃薯煮汁。然后，在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮溶后调整pH值至5.5～6，分装到试管中，每管装至1/4处，塞上棉塞，用牛皮纸捆扎，然后进行高压灭菌。
高压灭菌的过程是在0.11兆帕的压力下维持30分钟。在灭菌过程中，要确保充分放汽，以免影响灭菌效果。灭菌完成后，立即将试管摆放成斜面，斜面距离棉塞约3厘米，避免再次摆动。
接下来，进行一级菌种扩管。在无菌条件下，使用扩管工具和菌种，将母种转移到新的培养基上。扩管后的母种需要培育10~15天，然后才能用于生产。
母种的制作步骤包括母种培养基的配制、分装、灭菌，以及母种的接种和培养。在接种过程中，要选择生长势好的蘑菇，并在无菌条件下进行操作，以防止杂菌污染。
此外，还有其他制作母种的方法，如使用半合成培养基进行培养。在生产前，需要计划好所需的生产种数量，以确定母种的生产量。在保存斜面管时，应将其放在摄氏4度的冰箱中，并在一个月内使用。
总之，掌握食用菌母种的制作技术对于提高食用菌的产量和质量至关重要。通过合理准备培养基、进行无菌操作、严格控制灭菌和接种过程，可以有效提高母种的质量，从而保证食用菌的成功栽培。

C. 食用菌制菌种技术是什么

食用菌制菌种技术是：

一、母种制作

1、母种特征。

优质母种一般要求菌丝洁白、浓密、粗壮、生长整齐、气生菌丝少，有菇香味。

2、母种培养基配方。

马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml，ph控制在5.5-6.5之间。

3、培养基制备。

挑选出尚未发芽，无病害，不发青的新鲜马铃薯。在洗净去皮后，称取200g，并将其切成小块，装入烧杯之中。倒入1000ml清水，加热煮沸并保持20-30分钟左右，直至马铃薯酥而不烂（加热过程中略微加以搅拌）。

使用三层纱布进行过滤，然后取出过滤液，并加水补至1000ml。在马铃薯汁液中加入琼脂，并继续加热至琼脂完全融化，最后加入葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾，并加水补至1000ml。

使用试纸检测ph。将其装入试管中，添加高度以试管高度的八分之一至五分之一为宜，然后加棉塞，并进行包扎。

接着将其放入高压锅内进行灭菌处理，等到指针指向0.04MPA时，排放冷空气，然后接着升压至0.105MPA，并保持半个小时左右。自然降温至60℃后出锅，摆放成斜面。

4、接种

按照常规方法进行接种。接种结束后，将其放入培养室内，温度保持在23-25℃，空气相对湿度保持在65%左右。在培养7-10天后，即可用于原种接种。

二、原种制作

1、原种配方

配方一：小麦（玉米）95%，石膏粉2%，过磷酸钙2%，尿素0.5%，白糖0.5%，ph保持在5.5-6.5之间。

配方二：籽壳87%，麸皮10%，蔗糖、白糖0.5%，石膏粉1%，过磷酸钙1%，尿素0.5%，并加水120-130%。

2、培养基制备（配方一）

将小麦（玉米）筛检干净，并称重，然后放置于清水中浸泡2小时左右。浸泡结束后，将其放入开水之中，一边煮一边搅动，并及时检查煮的程度，尤其是煮至15分钟后，需要更加频繁的进行检查。

当小麦粒（玉米）没有白心，熟而不烂时，将其捞出，并放置在尼龙布上进行晾晒。等到小麦粒（玉米）表面无多余水分时，加入过磷酸钙和石膏粉，并搅拌均匀。

将其装入瓶中，并使用高温塑料和橡皮圈将瓶口封好，然后进行灭菌处理。灭菌时，压力保持在0.105MPA左右，并维持2-3小时。灭菌过程中，注意冷空气的排放时间。

3、培养基制备（配方二）

将白糖、石膏粉、尿素、过磷酸钙溶化制成母液，然后加水进行稀释。用稀释液将棉籽壳拌湿，堆放2-3小时左右。

加入麸皮，不断搅拌，等到用手捏紧培养料，指缝中有水外渗而不滴落时为宜。装瓶，然后按照配方一的制备方法进行接下来的操作。

4、接种

等到培养基出锅冷却至室温后进行接种。

接种后，将其放入培养室内，温度保持在23-25℃，空气相对湿度保持在65%左右。在培养20-25天后，即可长满瓶子（培养至10-12天时，需要摇晃瓶体）。

三、栽培种制作

1、培养基配方及制作

培养基配方及制作方法与原种相同。

2、接种

使用75%酒精擦洗手部，并对原种瓶外进行消毒。倒出少量原种于灭菌瓶中（该步骤于酒精灯火焰上方进行），每瓶原种大约可以接种20-25瓶。

将其转移至温度为23-25℃，空气相对湿度为65%的环境下进行培养，20-25天后即可长满。

培养结束后，立即进行播种。如果暂时不用，在低温环境下保存（10-14℃环境下，保存时间不超过10天，2-4℃环境下，保存时间不超过20天）。

经过低温保存的菌种，在使用前需要放置在常温环境下恢复1-2天左右。

制作食用菌菌种的意义：

菌种性状的优劣直接影响到产量的高低和品质的好坏。优良的菌种应具备遗传性状稳定、生命力旺盛、高产、优质、纯度高、抗逆性强等特性。

因此，选用优良菌株，掌握好制种技术，严格菌种质量，做好菌种的保藏工作，是食用菌生产中的重中之重。