A. 求人外周血B、T淋巴细胞的分离方法
目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。
方法:
1.在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。
2.取肝素抗凝静脉血与等量Hank's液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。
3.离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank's液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带(如下图)，单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。此外，还含有血小板。
4.用毛细血管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一短中管中，加入5倍以上体积的Hank's液或RPMI1640，1500rpm×10分钟，洗涤细胞两次。
5.末次离心后，弃上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，重悬细胞。取一滴细胞悬液与一滴0.2％台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。
单个核细胞浓度(细胞数／1毫升细胞悬液)＝
4个大方格内细胞总数
──────────×104×2(稀释倍数)
4
6.细胞活力检测：死的细胞可被染成兰色，活细胞不着色。计数200个淋巴细胞。计算出活细胞百分率。
活细胞数
活细胞百分率＝──────×100％
总细胞数
用本法分离PBMC，纯度在90％以上，收获率可达80～90％，活细胞百分率在95％以上。
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C. 急问：从人血液中分离淋巴细胞
呵呵 我把整个试验给你 很详细的
目的
了解密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理及其操作过程。
原理
淋巴细胞分离掖是由60%的聚蔗糖2份和34%的泛影葡胺1份混合制成。它具有分子量大、无化学活性、20℃时比重为1.077士0.001的特性。血液中各种细胞的比重不同，淋巴细胞与单核细胞的比重约为1.070，而粒细胞和红细胞的比重为1.092左右。将血液加至分离液上，通过离心，可使一定比重的细胞按相应密度梯度进行分布，从而将淋巴细胞与其它血细胞分离开。
材料
1. 淋巴细胞分离液 (比重1.077土0.001)。
2. 肝素。
3. 无Ca2+、Mg2+的Hanks溶液，pH7.2～7.6。
4. RPMI-1640培养液(含10%小牛血清)。
5. 其它:注射器、吸管、滴管（均为无菌）,血球计数板，水平离心机，显微镜等。
方法
1. 无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。
2. 用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中（血液:Hanks液:淋巴细胞分离液的比例为1:1:1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面。
3. 经水平式离心2000r/min×20min，小心取出试管。
4. 用平口吸管小心吸取中层呈白色雾状的淋巴细胞层，用Hanks溶液洗涤两次，每次离心1500r/min×10min。
5. 弃上清，加RPMI-1640培养液1ml混匀，取少许进行细胞计数及活力测定。
（1） 细胞计数: 取1滴细胞悬液置血球计数板上，静置片刻，显微镜下计数四角四个大方格内的细胞数（见图15），按下列公式计算出细胞总数。
四个大方格细胞总数 ×稀释倍数×细胞悬液毫升数×104
细胞总数 = 4
（2）台盼蓝拒染法测定细胞活力: 取4份0.2%台盼蓝与1份4.25%生理盐水混合，将台盼蓝生理盐水溶液与细胞悬液等量混合，在3分钟之内压片，在光学显微镜下计数未染色的细胞（为活细胞）与染色细胞（染成兰色,为死细胞），计算活细胞占细胞总数的百分数。
活细胞数 ×100%。
细胞存活率＝ 活细胞数+死细胞数
6. 最后将淋巴细胞悬液用RPMI-1640培养液配成相应的细胞浓度备用。
结果
在回收细胞分离液上界面的总细胞中单个核细胞应占90%以上（同时细胞存活率应大于90%），其中的粒细胞占0-5%，血小板小于0.5%，红细胞占0-7%。
注意事项
1.抽血后在2小时内使用。
2.注意将稀释后的血轻轻地沿管壁铺在聚蔗糖液面上，避免破坏其界面。
3. 在收集单个核细胞时，将吸管轻轻插入单个核细胞层，沿管壁轻轻旋转吸取细胞。
整个试验给你 有详细步骤的 呵呵
希望我的回答对你有所帮助