产孢子的微生物常用保藏方法

A. 经常使用的细菌菌株用哪种保藏方法比较好

1．斜面低温保藏法

将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。

此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。（北纳生物www.bnbio.com）

2．液体石蜡保藏法

（1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。

（2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。

（3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。

（4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。

此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏3个月之久。此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。

3．滤纸保藏法

（1）将滤纸剪成0．5×1．2cm的小条，装入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2张，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟。

（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。

（3）取灭菌脱脂牛乳1—2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。

（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。

（6）将棉花塞入管内，用火焰按图Ⅶ-13熔封，保存于低温下。

（7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。

细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14—17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。

4．沙土保藏法

（1）取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。

（2）倒去酸水，用自来水冲洗至中性。

（3）烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。

（4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。

（5）烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。

（6）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。

（7）抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。

（8）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好）优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。

（9）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。

（10）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。

（11）每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。

（12）若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。

（13）需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。

此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2年左右，但应用于营养细胞效果不佳。

5．液氮冷冻保藏法

（1）准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1．2mm液体的。

（2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安瓿管塞上棉塞，1．05kg/cm2，121．3℃灭菌15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10％的甘油蒸馏水溶液或10％二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌15分钟。

（3）接入菌种将菌种用10％的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安瓿管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安瓿管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。

（4）冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。

（5）保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮内为-196℃。

（6）恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养。

此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。缺点是需要特殊设备。

6．冷冻干燥保藏法

（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6—7．5mm，长105mm，球部直径9—11mm，壁厚0．6—1．2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟，备用。

（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7—10天。

（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0．2ml。

（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。

将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2>）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。

（5）真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰块与食盐，混合均匀，可冷至-15℃。

抽气一般若在30分钟内能达到93．3Pa（0．7mmHg）真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物已趋干燥，一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg），保持压力6—8小时即可。

（6）封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管继续抽气，约10分钟即可达到26．7Pa（0．2mmHg）。于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口。封口以后，保存于冰箱或室温暗处。

B. 保藏菌种的方法有哪些

1、传代培养保藏法：包括又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等，培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法：液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间。

3、载体保藏法：载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物。

5、冷冻干燥保藏法：先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥），其中真空冷冻干燥法最常见。

(2)产孢子的微生物常用保藏方法扩展阅读

菌种保藏的原理：

菌种保藏有多种方法，其原理大多大同小异，主要是运用一些方式尽量降低生物体内的代谢，达到延长生命，减少变异的目的。通常采用的方法为低温、缺氧、干燥。

低温主要对菌种产生两方面的影响，首先，较低的温度可以减缓机体细胞的酶活，降低新陈代谢，达到保藏菌种的目的。其次，低温同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制，如果降温过程失误，同样会造成机体的机械损伤和溶质损伤。

C. 微生物菌种的微生物菌种保藏方法

有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。 即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有：
① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。 将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种：
①土壤保存法
主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。再将需保存的微生物进行大量接种，培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止，移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封，冷藏或室温保存。
②砂土保存法
取清洁的砂，过60目筛去掉大砂粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用NaOH溶液、10% HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持2～3cm深，再经干热灭菌后，加入1ml菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂(经HCl预处理)和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后灭菌，再进行菌种保藏。
③硅胶保存法
以6～16目的无色硅胶代替砂子，干热灭菌后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。
④磁珠保存法
将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4)，上铺玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。
⑤麸皮保存法
在麸皮内加入60%的水，经灭菌后接种培养，最后干燥保藏。
⑥纸片(滤纸)保存法
将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。
寄主保存法
微生物侵入其寄主后加以保存的方法。 ① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。
③ 液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。 它的原理是首先将微生物冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。从菌体中除去大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。该方法适用于绝大多数微生物菌种(包括噬菌体和立克次氏体等)的保存。

D. 常用的蛹虫草菌种保藏方法有哪些

在实践中，人们尝试了许多保藏方法，如继代培养保藏法、液体石蜡保藏法、蒸馏水保藏法、冷冻干燥保藏法。这些方法各有利弊，在实践中要根据保藏的目的、资金及设备状况等因素，选择最佳保藏方法。

1.斜面培养基冰箱保藏法这是最常用的菌种保藏方法。因为它简单易行，不需特殊设备，并能随时观察保藏菌种的情况。因此，短时间保藏菌种，一般都采用此法。

将需要保藏的菌种接种在斜面培养基上，在适宜的温度下培养，当菌丝健壮地长满斜面时，即可将此试管菌种取出，放在4℃的冰箱中保藏。用于保藏菌种的棉塞，要用硫酸纸包扎，防止霉菌污染。冰箱保藏蛹虫草菌种，一般1个月转管一次。

冰箱保藏，虽然简单易行，但温度不够低，只有4℃左右，蛹虫草的新陈代谢活动并未停止，而试管斜面也易失水变干。因此，保藏时间较短，1个月就需转管一次，转管次数多了，变异的可能性也就增大，不适宜长期保藏菌种。若保藏时间超过1月，菌种的转色与出草能力明显下降。

2.大米培养基冰箱保藏蛹虫草在大米培养基上培养后在冰箱内能保藏较长的时间，根据试验，保藏5个月菌种质量无明显变化。

3.蚕蛹基质保藏法以家蚕蛹为培养基保藏蛹虫草，在冰箱保藏4个月或在室温下保藏1个月，均未发现明显的变化，生产上多采用此种方法。

采用大米及家蚕蛹培养基在三角瓶保藏菌种，保藏的菌丝体相对较多，基质不易干燥，生产上使用方便。

4.矿油保藏法矿油（主要是液体石蜡）保藏，也称液体石蜡保藏。此法简单易行，无需另添设备，各生产单位均可应用。矿油能隔绝气体交流，防止培养基水分蒸发，抑制微生物代谢，推迟细胞衰老，能延长微生物的生命。

（1）培养基常用的培养基配方为20%的马铃薯汁500ml，5%的蚕蛹汁500ml，蛋白胨5g，磷酸二氢钾（KH2PO4）3g，硫酸镁（MgSO4H2O）1.5g，葡萄糖20g，维生素B1微量，琼脂15g，pH6.5，1kg/cm2灭菌30min。

（2）矿油处理选用化学纯的液体石蜡（要求不含水、不霉变、比重为0.865～0.890），分装于三角瓶中，装至瓶体的1/3处，塞好棉塞；另配一套具有虹吸管的橡皮塞，用纸包好，与三角瓶一起于1kg/cm2灭菌30min。灭菌后，将液体石蜡放在40℃的温箱中，使液体石蜡中的水分蒸发干净，至石蜡液呈完全透明为止。

（3）接种培养将需保藏的菌种，接入斜面培养基上，在20℃左右下培养，待斜面长满健壮菌丝后，取出装入矿油。

（4）矿油灌注将上述菌种和无菌矿油放入无菌室（箱），把有虹吸管的橡皮塞装上矿油三角瓶，无菌操作使矿油注入斜面试管内（少量菌种也可用无菌吸管灌注），使液面高出斜面顶部1cm。

（5）菌种保藏将灌注矿油的试管直立放在试管架上，于室温或冰箱中保藏均可。室温保藏的环境应注意通风干燥，以免棉塞发霉，并要定期检查。如矿油覆盖的斜面明显变浅，应及时补充无菌矿油，切忌培养基露出液面。

液体石蜡易燃，使用时需加注意。从覆盖矿油斜面中移植菌种时，应尽量少带矿油。因矿油在火焰灭菌时，会爆炸飞溅。

以后用作菌种时，可从斜面上挑取少许培养基，接种在新鲜的培养基上，经过培养，即可使用。

5.双重橡皮栓法用普通的斜面培养基先培养菌丝，用双重橡皮栓取代棉塞。这种双重橡皮栓要预先用氧化丙烯灭菌，方法是按1L容器注入1ml氧化丙烯，原封放置待用。采用蒸汽容易使橡皮变软，而用氧化丙烯等灭菌方法可以避免此弊，利用双重橡皮栓能防止空气进入试管，从而达到与液体石蜡同样的效果。

6.水箱中保藏法把蛹虫草菌种悬浮在不含有机营养成分的水管中保存，一般用的悬浮液有蒸馏水、食盐水、用蒸馏水时，在接有蛹虫草菌种的琼脂培养物中加入6～7ml蒸馏水，使细胞、孢子或蛹虫草菌丝充分悬浮，尔后转入试管内，密封后室温下保藏。用食盐水时，把在琼脂培养基斜面上长好的菌丝悬浮在1%的食盐水中，密封后在室温条件下保存。

7.液氮超低温保藏法此法是将菌种密封在含保护剂的安瓿管内，经控制速度冻结后，在－150～－196℃液态氮超低温罐中保藏。

（1）菌种制备保藏孢子时，取孢子制成悬液，加入保护剂，装入无菌安瓿管内。保藏菌丝体时，用液体振荡法培养菌丝球，或用平板培养菌丝体，也可用麦粒菌种。取适量放入无菌的装有保护剂的安瓿管内。

（2）安瓿管制作安瓿管的玻璃，要能经受温度突变而不破裂，容易用火焰封管口，恢复培养时容易打开。一般采用硼硅玻璃，管的大小根据需要而定，通常是75mm0mm或能容1.2ml液体的安瓿瓶比较合适。选好安瓿管后，每管加进0.8ml保护剂，塞上棉塞，1kg/cm2灭菌15min，作冻结琼脂菌丝片或麦粒菌种用。如冻结孢子悬液时，则空管灭菌。

（3）保护剂用10%（体积比）甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜（dimethylsulfoxide）蒸馏水溶液作保护剂。

（4）冻结保藏将上述准备好的菌种无菌操作移入加有保护剂的安瓿管中，用火焰将安瓿管上部熔封，浸在水中检查有无漏气。然后将封口的安瓿管放在慢速冻结器内，控制冻结速度（每分钟下降1℃），使样品逐步均匀地冻结到－35℃。－35℃以下的冻结速度，可不用控制而迅速下降。安瓿管冻结后，立即放入液氮罐中。罐内的气相温度为－150℃，液体温度－196℃。

（5）恢复培养保藏菌种时，将安瓿管从液氮罐中取出，立即放入38～40℃的水中摇荡至管内冻结物全部融解，开启安瓿管，将管内菌种接入适宜培养基培养即可。

液氮超低温保藏，是目前长期保藏菌种的最好的一种方法。用它进行保藏各类微生物和活细胞的试验，都获得了满意的结果。对那些难以保藏的或只产生菌丝的真菌，用此法保藏也很成功。

现在，普遍对液氮保藏的效果都持乐观态度，认为液氮保种很少或不会引起细胞中遗传物质的变化。而且液氮保藏后菌株出现的问题却很少报道。然而，Fritss首先在荷兰Horst发现杂交菌株U1经液氮保藏3年后出现退化，部分培养物产量下降，出现硬开伞，经组织分离培养后，产量质量又恢复正常。据她认为，经原生质体重新融合产生的杂交菌株，其本身对不利因素（如超低温的刺激）适应性差，故在液氮保藏中必须考虑到这一影响。而且反复的冷冻和解冻也会使菌株受到不同程度的损伤。

另一方面，液氮保藏本身也有不足之处，问题在于液氮保藏系统成本高，有些地方液氮不足，使一般保藏中心不能单独依靠这一保藏技术。而且液氮保藏的菌种，首先必须培养在琼脂培养基或液体培养基中，对邮寄交流造成一定麻烦。

一般认为，在未经有效可靠检测之前，从液氮保藏中取出的菌种尤其是杂交菌株，不宜作当年产季的生产用种，必须经过出菇试验，以确保无退化或无变异才能投入生产。

干燥保藏的作用原理在于除去蛹虫草菌丝细胞的游离水，以达到除去细胞代谢的液相环境，从而使代谢活动停滞并进入休眠状态，有利于长期保存。

E. 菌种保藏的常用方法及特点

（1）斜面低温保藏。是一种最常用、最简便的菌种保藏方法。首先将需要保藏的菌种接到斜面培养基上，在适宜的温度条下培养，当菌丝健壮地长满斜面时，即将此试管菌种取出，放置于4 ℃的冰箱中保藏。特点：
①简单易行，适用于各类菇类菌种保藏，是目前生产及科研普遍采用的一种方法；②保藏时间短，需6个月转接一次，转管次数多菌丝变异的可能性大；③如改用橡皮塞并用石蜡扣，可保藏1年～3年。
（2）液体石蜡保藏。液体石蜡保藏也称为矿油保藏，即用矿油覆盖试管斜面试管保藏的方法。矿油是指无色、透明、黏稠、性质稳定、不易被微生物分解的石蜡油和液体石蜡，将其覆盖在斜面菌种之上，可以隔绝空气，防治培养基水分蒸发，抑制微生物的代谢活动，推迟细胞老化，从而达到长期保藏菌种的目的。特点：
①方法简便易行，保藏条件不严格，保藏时间长，可作为长期保藏菌种的方法；②菌种必须垂直放，放置不方便。
（3）滤纸保藏。滤纸保藏是一种以无菌滤纸作为食用菌孢子吸附载体长期保藏菌种的方法，又称滤纸孢子保藏法。特点：技术要求高，设备费用大，菌种不易衰老退化，菌种保藏时间长很少变异。
（4）自然基质保藏。自然基质保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含营养的自然生长的基质作培养基来保藏菌种的方法。自然基质很多，食用菌常用的自然基质有发酵的粪草、木屑及枝条基质等，取材方便，制作方法简便，保藏时间也较长。使用时，只需取一块、一粒或一条培养物放在新鲜的培养基上，并在适温下培养即可。特点：方法简便易行，保藏时间长。

F. 微生物菌种保藏的方法有哪些

菌种的优劣是食用菌生产成败的关键。菌种是国家重要的生物资源，也是微生物工厂首要的生产资料。由于微生物繁殖快、易变异，因此微生物菌种特别需要妥善保藏。世界各国对微生物菌种都很重视。中国科学院微生物研究所专门设立了菌种的保藏机构，为各生产单位收藏和供应各种优良菌种。当然就具体的生产单位而言，大量的生产用菌种还得靠自己来生产和保藏。
菌种保藏的目的：是使优良菌种经过较长时间后，仍能保持菌种的优良性状、生活能力及纯度，降低菌种的衰亡速度，确保菌种的纯一，防止杂菌污染及绝种。
保藏菌种的方法：人们在长期的生产实践中，积累了不少保藏菌种的经验，常用的保藏方法有：斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、砂土管保藏法、滤纸片保藏法、谷粒保藏法等。常用保藏菌种的方法有以下几种：
（1）斜面低温保藏法这是最简单最普通的保藏方法。首先将菌种在适宜的斜面培养基（一般PDA）上培养成熟后，选择菌丝生长粗壮，边缘保存。一般保存温度4～6℃，除草菇和银耳菌种外（10～15℃），此方法对其他食用菌都适宜，一般菌种可保藏2～4个月，所以需定时移接。此法保藏虽然方便，但是保藏时间短，需经常转管，也很容易发生衰退变异现象。因此，不能用作长期保藏，最好与其他方法结合起来保藏。
另外，为了减少保藏期间培养基水分蒸发，琼脂最好加到2.5%。为防止菌种在保藏过程中产酸分的积累，应加入0.2%的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等缓冲盐类，同时，培养成熟后，最好将棉塞管口外剪平，并用矿蜡封或换以无菌木塞，这样做也可以减少培养基水分的散失，延长保存时间。
在农村如果没有冰箱，可采用土法保藏。即把保藏用的斜面菌种换上无菌橡皮塞，并用矿烛蜡封后密闭的广口瓶中，悬入井底保藏。（2）贮藏室保藏法原种和栽培种一般只在贮藏室短期保藏，贮藏室温度0～10℃为好。室内应清洁、干燥、无光，应经常检查温度和湿度，以降低其生活力，减少变异退化，防止杂菌污染，避免过早出菇。温度越高，保存的时间越短。