❶ 基因表达的方式有哪些
基因表达概念:就是基因转录和翻译的过程。
基因表达的方式有(1)组成性表达也称基本表达:有些基因产物对生命全过程都是必需或不可少的。这类基因在一个生物个体的几乎所有细胞中持续表达,不易受环境条件的影响,称基本表达,更简单来说,管家基因的表达称为基本表达。
(2)诱导:有一些基因对环境信号应答时被激活基因表达产物增加,这种基因表达方式称为诱导。
(3)阻遏:有一些基因对环境信号应答时被抑制,基因表达产物水平降低,这种基因表达方式称为阻遏。
❷ 常用于研究基因表达的分子生物学技术
首先,基因表达是基因转录和翻译的过程,大多数基因表达都经历“转录→翻译→蛋白质”的过程,因此研究基因表达就是检测mRNA和蛋白质。DNA印迹,是通过杂交检测DNA的缺失、插入的方法;RNA印迹和反转录PCR分别通过杂交、逆转录和PCR检测mRNA的方法;Weasten印迹,是通过杂交蛋白质的方法。
所以常用的基因表达分子生物学技术有:RNA印迹和反转录PCR,Weasten印迹。
❸ 列举两种研究基因表达模式的方法并简述其原理
1、经典的半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR。提取总RNA,通过光度计和电泳法检测质量并定量,采用反转录试剂盒进行反转录。对于半定量RT-PCR,采用内标基因(如25SRNA)引物对各样品进行普通PCR扩增和电泳,证明反转录成功,并通过调整加入的总cDNA第一链的量,使各样品间内标扩增条带亮度达到一致。然后以此总cDNA第一链的模板量进行目标基因的普通PCR扩增,电泳后通过条带有无和亮度强弱来比较各样品间(器官组织间、发育阶段间、诱导时间间等)目标基因表达的水平的差异性或变化动态。对于实时荧光定量RT-PCR,反转录完成后,通过内标基因或其它基因的扩增证明反转录成功,然后直接对内标基因和目标基因进行实时荧光定量PCR扩增,通过仪器自动检测Ct值来比较各样品间目标基因表达水平的差异性或动态变化。
2、芯片杂交法和SAGE法。将各样品的总RNA反转录得到的总cDNA进一步合成为双链总cDNA,用适当的酶切处理,得到小片段,然后与芯片杂交,电脑对不同样品间相同基因的杂交信号强度进行叠加处理,自动分析出各样品间各基因表达水平的表达差异性或变化动态。SAGE (serial analysis of gene expression)是基因表达系列分析,将各样品总cDNA采用适当酶切,得到短片段,然后互相连接成800bp左右的串联体,然后测序,然后采用电脑自动统计各基因被测序到的次数,以此表示各样品内各基因表达的丰度,然后比较各样品间各基因表达水平的差异性或动态变化。
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