㈠ 基因工程技术中如何把重组基因导入受体细胞
基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌,枯草杆菌,土壤农杆菌,酵母菌和动植物细胞等。
用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞,主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如,如果运载体是质粒,受体细胞是细菌,一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后,就可以随着受体细胞的繁殖而复制,由于细菌的繁殖速度非常快,在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
㈡ DNA重组体是怎样引入受体细胞的
重组体DNA分子只有导入合适的受体细胞,才能进行大量地复制、扩增和表达。
受体细胞有多种,如原核生物的大肠杆菌细胞、低等真核细胞生物如酵母、高等真核生物(如植物细胞、哺乳动物细胞)等都可用于转化的受体。胰岛素基因工程就是将外源DNA导入原核细胞大肠杆菌中进行表达实现的。选定的受体细胞必须具备使外源DNA进行复制的能力,而且还应该能够表达由导入的重组体分子所提供的某种表型特征,这样才有利于转化子细胞的选择与鉴定。把重组载体DNA分子引入受体细胞的方法很多,如常用的重组质粒大肠杆菌热激转化法、病毒DNA感染法、生物介导法等。
在理想情况下,上述重组载体进入受体细胞后,能通过自主复制而得到大量扩增,从而使受体细胞表达出供体基因所提供的部分遗传性状,受体细胞就成了“工程菌”。
物理方法:DNA直接注射法、颗粒轰击技术;
化学方袭亏法:即用化学方法构建非病毒载体系统,借之完成基因转导.主要包括:脂质体载体、受体介导法.
生拍告神物方法:主要通过构建病毒载体来完成.包括:逆转友李录病毒、腺病毒、 单纯疱疹病毒、 腺相关病毒、 其他病毒等.
具体介绍和优缺点等可以参考网络词条基因导入.
㈣ 将重组DNA导入细胞内有哪些方法它们的原理是什么
(1)将重组质粒导入原核细胞称转化,通常用氯化钙法使大肠杆菌细胞处于感受态,从而将外源DNA导入细胞。另一个常用方法是用脉冲高压电瞬间处理,使外源DNA高效导入细胞,称为电穿孔法。
(2)将重组体DNA包装成噬菌体,使外源基因导入宿主细胞称转导,在适宜条件下使转化率提高。
(3)将外源基因导入动物细胞常用方法有磷酸钙转染技术,电穿孔转染技术,脂质体载体法,DEAE-葡聚糖转染技术,显微注射法等。将外源基因导入植物细胞常用方法是用Ti质粒将外源基因导入植物的外植体,也可将植物细胞的细胞壁消化,再用将外源基因导入动物细胞常用方法将外源基因导入原生质体,再诱导产生细胞壁。还有一个方法,是用基因枪将外源DNA射入植物组织或细胞。
㈤ 将目的基因导入受体细胞常用方法
可通过物汪转染的方法将目的基因导入受体细胞;包括化学转染罩猜仔法:1.DEAE-葡聚糖法,兆嫌2.磷酸钙法,3.人工脂质体和物理方法:①显微注射②电穿孔③基因枪等;此外还可通过辅助载体(如病毒)将目的基因导入到宿主细胞。