① 简述dna重组体导入动植物细胞的方法
1.dna重组体导入植物细胞的方法主要有:农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;
2.dna重组体导入动物细胞的方法:显微注射技术。
② 目前,将目的基因导入动物细胞最常用和最有效的方法是
我觉得这四个答案里A最合适了。请先看四种方法的定义:
A:显微注射法(microinjection)是利用管尖极细(0.1至0.5μm)的玻璃微量注射针,将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中,然后借由宿主基因组序列可能发生的重组(rearrangement)、缺失(deletion)、复制(plication)或易位(translocation)等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体内。
B:农杆菌转化法是将目的基因插入到经过改造的T-DNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合,然后通过细胞和组织培养技术,再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,近年来,农杆菌介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用。
C:基因枪法又称粒子轰击(particle
bombardment),高速粒子喷射技术(High-velocity
particle
microprojection)或基因枪轰击技术(gene
gun
bombardment),是由美国Cornell大学生物化学系John.C.Sanford等于1983年研究成功。主要适用于单子叶植物。[1]
但转化效率较低。
D:花粉管通道法:在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液,利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并进一步地被整合到受体细胞的基因组中,随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。
所以,BCD都是专门针对比较难于转入外源基因的植物细胞的,排除法就可以选A。
另外,我觉得还有一种方法更为可靠,那就是转染。
③ 目前,将目的基因导入动物细胞最常用的有效方法是()A.显微注射法B.农杆菌转化法C.基因枪法D.花
A、显微注射法是将目的基因导入动物细胞最常用的方法,A正确;
B、农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法,B错误;
C、基因枪法是将目的基因导入植物细胞的方法,C错误;
D、花粉管通道法是将目的基因导入植物细胞的方法,D错误.
故选:A.
(1)将重组质粒导入原核细胞称转化,通常用氯化钙法使大肠杆菌细胞处于感受态,从而将外源DNA导入细胞。另一个常用方法是用脉冲高压电瞬间处理,使外源DNA高效导入细胞,称为电穿孔法。
(2)将重组体DNA包装成噬菌体,使外源基因导入宿主细胞称转导,在适宜条件下使转化率提高。
(3)将外源基因导入动物细胞常用方法有磷酸钙转染技术,电穿孔转染技术,脂质体载体法,DEAE-葡聚糖转染技术,显微注射法等。将外源基因导入植物细胞常用方法是用Ti质粒将外源基因导入植物的外植体,也可将植物细胞的细胞壁消化,再用将外源基因导入动物细胞常用方法将外源基因导入原生质体,再诱导产生细胞壁。还有一个方法,是用基因枪将外源DNA射入植物组织或细胞。
⑤ 目的基因导入动物细胞的方法是什么
目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法。导入的介质可以是质粒,也可以是动物病毒侵染。显微注射法是利用管尖极细(0.1至0.5μm)的玻璃微量注射针,将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中,然后借由宿主基因组序列可能发生的重组、缺失、复制或易位等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体内。
(5)基因载体导入动物细胞的常用方法扩展阅读
显微注射法转基因的方式
直接把重组过的DNA注入受精卵的原核中,也就是将从胚胎提供者的输卵管中取得的受精卵移到倒置显微镜上的微量注射台上,然后利用固定吸量管固定住,之后注射针则依序穿过zonapellucida,ocytemembrane及malepronuleusmembrane后,将DNA注入,注入时可以见到原核膨大。
以小鼠受精卵雄原核的显微注射为例,显微注射所使用的受精卵固定吸管(holdingpipette)及注射针制备很困难,除影响操作时间外,也是影响转基因效率及基因注入后之胚胎存活及转基因成功与否极其重要的因子。