分离黄酮类化合物最为常用的方法

1. 怎样把植物中的黄酮分离出来

用乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂先把总黄酮提取出来，然后石油醚，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取；再将各个萃取相上聚乙酰胺柱，结合薄层色谱进行分离。当然柱层析要多次。

2. 分离黄酮类化合物的洗脱条件是如何确定的

分离黄酮类化合物的洗脱条件确定方式：极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构，其中常用的洗脱剂：碱性水溶液、含盐水溶液、醇及含水醇。

主要是利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，则吸附力越强，越难洗脱。化合物靠分子筛，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。

分离原理分析

1、吸附原理：一般认为是通过分子中的酰胺羰基与酚类、黄酮类化学物的酚羟基，或酰胺键上的游离氨基与醌类、脂肪羧酸形成氢键缔合而产生吸附。

2、吸附强弱的规律：形成氢键的基团数目越多，则吸附能力越强。成键位置对吸附力也有影响。形成分子内氢键者，其在聚酰胺上的吸附即相应减弱。

3. 黄酮类化合物的分离

较常用的分离方法有： （一）柱层析法 分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。此外，也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。 1.硅胶柱层析： 此法应用范围最广，主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。 2. 聚酰胺柱层析： 对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。 聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括苷及苷元、查耳酮与二氢黄酮等 3.葡聚糖凝胶(Sephadex gel)柱层析： 对于，主要用两种型号的凝胶：Sephadex-G型及Sephadex-LH-20型。 葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是： 分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。但分离黄酮苷时，则分子筛的属性起主导作用。在洗脱时，黄酮苷类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体。 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小到大顺序洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大到小顺序洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷到糖少的苷到游离苷元（极性小到大） 葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有： 碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH），含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等)。 醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例）、t-丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等。 其它溶剂：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。 二）梯度pH萃取法 梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2% NaOH及4%NaOH水溶液萃取，来达到分离的目的。 酸性:7，4-二OH溶于5%NaHCO3液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液） 具黄酮类化合物与铅盐生成的沉淀，滤集后按常法悬浮在乙醇中，通入H2S进行复分解，滤除硫化铅沉淀，滤液中可得到黄酮类化合物。但初生态的PbS沉淀具有较高的吸附性，因此现多不主张用H2S脱铅，而用硫酸盐或磷酸盐，或用阳离子交换树脂脱铅。 有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，可与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离。

4. 植物中如何对黄酮类进行细提取

传统的萃取芝法有有机溶剂萃取，热水萃取，碱性水或碱性稀醇萃取体系溶剂萃取法。

乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物最常用的溶剂，糖原的提取宜采用浓度较高的酒精(如9% ~ 9%)，糖原的提取宜采用浓度约为%的乙醇或甲醇溶液，乙酸乙酯和丙酮也常用来提取黄酮类化合物，萃取过程包括冷浸、渗滤和回流。

超声提取是一种新的提取黄酮类化合物的方法，其原理是，超声空化对细胞膜的损伤有利于黄酮类化合物的释放和溶出，超声波使萃取液不断振荡，促进了溶质的扩同时，超声波的热效应使水温基本在7℃，原料可以用于水溶，超声波法大大缩短了提取时间，提高了有效成分的提取率和原料的利用率。

微波提取技术对黄酮类化合物的提取也取得了良好的效果，具有反应效率高、选择性强、操作简单、副产物少、提取率高、纯化方便等优点。该植物细粉在浸出过程中不凝结、不结胶，克服了热水法的不足。

酶解法可用于提取细胞壁包裹的黄酮类化合物原料，例如在山楂中，由于黄酮类化合物被细胞基细胞壁包围，而这些细胞壁之间又有果胶结合，所以酶法(酶提取)的提取率比一般方法要高。

将预干燥碾碎的山楂浸泡在蒸馏水中，加热至℃，加入%果胶酶溶液，调节pH值~用mol/LNaH，在℃下酶解然后酶解溶液回流纯化。

该方法可使萃取率提高，提取原理是果胶酶充分破坏连接细胞壁的果胶物质，将山楂中的果胶完全解压为小分子物质，降低了提取物质的抗性，使果肉中的黄酮类化合物充分释放。

(4)分离黄酮类化合物最为常用的方法扩展阅读：

我国对超临界萃取黄酮类化合物的研究始于9世纪，1999年陈树来等利用超临界CO从苦参米中提取芦丁，并以乙醚为夹带剂直接从苦参米中提取芦丁，结果表明，以醚作夹带剂，从苦参米中直接提取芦丁较为困难，提取效果好，纯度高，收率高。

半仿生提取法(SBE)是由孙秀梅和张昭旺首先提出的一种新的中药提取方法，如陈hsiao-chuan∽通过正交试验优化半仿生提取叫摘要杜仲中绿原酸和类黄酮工艺条件，杜仲叶为原料，有一块扭曲的柠檬酸性磷酸氢二钠缓冲溶液提取。

m(提取)m(液体)提到=分别提取pH值和787℃浸提H，每次浸提次数，在此条件下，得到了绿原酸的产率，黄酮类化合物得率达。