鉴定单克隆技术常用的方法

⑴ 单克隆抗体的鉴定实验

1．杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。2．单克隆抗体的类型、亚型的测定：购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清，采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。
ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书 1、首先将试剂盒恢复室温（大约30分），然后用纯水把清洗液配成工作浓度（一份浓缩清洗液加19份纯水）。
2、取出酶标板。每个标本需要6孔，阳性对照6孔。多余的用自封袋保存，记得放入干燥剂。
3、将细胞培养上清（或特异亲和纯化的抗体）50μl加入酶标微孔板，每个标本加6孔，阳性对照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl标本稀释液。贴上封板膜37℃温育30分钟。
4、弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性对照的6孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
5、吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂A和显色剂B各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。
6、本试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶标仪450nm测定波长，630nm参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。阳性对照0D小于0.5实验无效，需要重做。 1、虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。
2、在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的C030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果。
3、手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，最后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。
4、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。
5、拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。
6、出现异常结果请随时咨询我们。
3．单抗的特异性鉴定可以采用各种方法，如免疫荧光法、ELISA法、间接血凝和免疫印迹技术等，同时还需做免疫阻断试验等。
4．单抗的效价测定可采用凝集反应、ELISA或放射免疫测定。不同的测定方法效价不同。培养上清液的效价远不如腹水的效价。采用凝集反应，腹水效价可达5×104。而采用ELISA检查，腹水效价可达1.0×106。单抗的效价以培养上清和腹水的稀释度表示。
5．必要时还可以测定单抗的亲和力和识别抗原表位的能力测定。

⑵ 如何筛选动物单克隆抗体

单克隆抗体制备过程中,总共有两次筛选,第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,两次筛选的原理和方法是不相同的.
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后,杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键.普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）.其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”）,即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,为DNA分子的合成提供原料.在此合成过程中,叶酸作为重要的辅酶参与这一过程,而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物,可以阻断DNA合成的“D途径”.另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”）,它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸,两种酶缺一不可.因此,在HAT培养液中,未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断,虽“S途径”正常,但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般10d左右会死亡.对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言,由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞,因此自身没有“S途径”,且“D途径”又被氨基喋呤阻断,所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡.惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞,既具有效应B细胞的“S途径”,又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性,因此能在HAT培养液中选择性存活下来,并不断增殖.
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的,经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异,所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞.通常采用有限稀释克隆细胞的方法,将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔的细胞培养板上,使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时,才能保证有些孔中是单个细胞）,再由这些单细胞克隆生长,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养.

⑶ 高中生物单克隆抗体实验总结

考试是检测学生学习效果的重要手段和方法，考前需要做好各方面的知识储备。下面是我为大家整理的高中生物单克隆抗体实验总结，希望对大家有所帮助!

高中生物单克隆抗体实验总结

(一)动物的选择

目前应用最广的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广，由于所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。

大白鼠也可，能产生较多量的单抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上，发展了小鼠-大鼠，小鼠-人以及人-人杂交瘤技术。

(二)免疫

一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。

免疫程序、剂量和方法是关系到是否能得到所需要的单抗体的关键之一。

正常小鼠脾脏含有能产生各种不同抗体的B淋巴细胞，一只纯种小白鼠估计能产生1.0×107~5.0×107种不同的抗体。因此一只正常的小白鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤融合，只能有千万分之一的机会获得某一种特定抗体。所以为了进步得到某种杂交瘤的机会，必须加强免疫，使产生特异性抗体的B淋巴细胞大量增加。

B淋巴细胞的不同发育阶段对获得阳性杂交瘤也有很大影响。有人以为处在转化时期的B淋巴细胞可能更易于融合，而免疫以后7~8天，固然是抗体产生的高峰时期，但形成有活力的杂交瘤细胞的可能反而减少。故一般以为加强免疫后的第三天应杀鼠取脾做细胞融合。

1.可溶性抗原(蛋白质) 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗氏完全佐剂乳化，分多点小鼠皮下注射，总量为0.3ml～0.6ml，间隔3～5周再同样注射一次，10天后，断尾取血一滴，测抗体效价，选滴度高的小鼠做融合试验。一个月后可以经静脉(尾静脉)给予无佐剂抗原0.2ml～0.4ml，3～4天后，杀死小鼠取脾做融适用。

2.颗粒性抗原 如抗原来源方便，可以不加佐剂而增加免疫次数，缩短间隔时间。例如用羊红血球免疫小白鼠，以1%浓度每只皮下注射0.2ml，每周2次，共免疫5～8次，取脾前3天，再免疫一次即可。有人以为最后一次免疫剂量要大，大到近于免疫耐受的程度更好。

单抗技术是主要由抗原制备，免疫动物，细胞融合，筛选杂交瘤细胞，克隆化培养，单克隆抗体的大量制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，其核心部分是细胞融合。细胞融合是单克隆抗体技术的中心环节，基本步骤是将脾细胞和骨髓瘤细胞混合后加入PEG使细胞彼此融合。

实验原理:B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂;而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养基(HAT)阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产生抗体，又能无限增殖，并以此生产抗体的技术。

实验方法

材料：Balb/c小鼠，SP2/0骨髓瘤细胞，50%PEG，不完全培养液，HAT培养液，75%酒精，剪刀，镊子，纱布，离心管，网筛，大小瓶 皿，直头滴管，弯头滴管，瓶塞，培养瓶盖，离心管盖，烧杯(加入37℃水)，泡沫板，大头针，96孔培养板，计时器，显微镜，计数板等。

单克隆抗体技术方法：

显微镜下观察血片或骨髓片，找出异常细胞。

(1)饲养细胞的制备

1.常用Balb/c小鼠，拉颈处死，浸泡于75%酒精内，3～5min。

2.用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜，剪一小口，用滴管注入5～6ml不完全培养液(严禁刺破肠管)。

3.反复冲洗，将冲洗液吸入15ml离心管，1000rpm5min离心，用完全培养液混悬，调整细胞密度。

(2)SP2/0骨髓瘤细胞的制备

1.选取状态良好、处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞。

2.弃去原瓶中培养上清，用不完全培养液冲洗三遍。

3.再以不完全培养液对细胞进行充分吹打，得到的细胞悬液移入15ml离心管。

4.细胞计数。

(3)脾细胞的制备

1.3天前加强免疫的小鼠，摘眼球取血后，拉颈处死，75%酒精浸泡3～5min。

2.将小鼠固定于泡沫板上，打开腹腔，取出脾脏，用不完全培养液反复冲洗。

3.在平皿中的网筛中，用镊子夹取脾脏进行反复研磨，边磨边滴加不完全培养液，直到脾细胞单个化，将细胞悬液转入15ml离心管中。

4.细胞计数。根据两种细胞计数结果，调整悬液用量，配平之后(SP2/0细胞与脾细胞数量比值在1：5～1：10之间)，以1000rpm5min离心。

5.弃上清，每管加入5ml不完全培养液，吹打混匀后合并于同一15ml离心管中，再次以1000rpm5min。

6.离心，弃上清，用滴管吸净残留液体。

(4)细胞融合

1.前面步骤所得到的细胞沉淀，轻弹离心管管底，使其呈糊状。

2.在37℃水浴中，轻轻振荡，一边缓缓加入1mlPEG，边加边摇，PEG于1min内加完。

3.加完PEG之后，将悬液在37℃水浴中静置1min。

4.继续在37℃水浴中，边摇边加入不完全培养液2ml，于2min内加完。

5.慢慢加入不完全培养液，800rpm，8min。

6.弃上清，加入含1%HAT、20%FCS的培养液，轻轻混匀。

(5)在96孔细胞培养板中加入饲养细胞上清，1滴/孔;之后加入融合细胞悬液，1滴/孔。

(6)镜下观察96孔板中细胞情况，CO2孵箱中培养。

⑷ 免疫学技术知识总结 第二章

第二章 抗体制备技术

抗体的基本概念：多克隆抗体（多个淋巴细胞克隆所分泌的抗体）和单克隆抗体（单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体）

单克隆抗体的特点：

高度均质（同一亚类），化学组成均一，不含或很少含Ig

特异性强，只针对某一种抗原表位

亲和力强

抗原用量少，无须纯化

无批间差异

来源稳定，可达批生产，容易标准化

不易形成沉淀线

操作比较麻烦

什么条件下需要制备单抗：

目的蛋白有类似的结构

抗原不纯，无法分开

多抗的效果不好（已经排除非特异性反应）

希望将抗体用于治疗，研制成药物

希望将抗体用于诊断，研制成诊断试剂。

第一节   多克隆抗体的之别

一、多克隆抗体制备的原理

抗体制备、动物免疫、抗体纯化

二、多抗的基本条件

1.   免疫原的制备

颗粒性抗原：细胞、病毒、细菌等，一般具有较强的免疫原性，可以不加佐剂，直接进行腹腔注射。

可溶性抗原：可溶性抗原的来源主要是天然纯化，或者用目的基因在原核细胞或者真核细胞中表达，可溶性抗原需要与弗氏佐剂完全或不完全混匀，才可以进行免疫。

（1） 完全抗原的提取：细胞破碎法、抗原提取、抗原的纯化

（2）半抗原与载体的交联：载体的选择、半抗原与载体偶联的方法、偶联复合物的鉴定

（3）合成肽抗原：免疫原性肽的选择、肽的合成和纯化

2. 免疫动物的选择：

3.   佐剂的准备：

佐剂的种类：无机佐剂、有机佐剂、合成佐剂、油剂

三、多克隆抗体制备的基本方法

1.  抗原计量、免疫途径与免疫日程

免疫动物的方法：

免疫原值被：

无佐剂免疫法：适用于颗粒性抗原

弗氏佐剂免疫法：适用于可溶性抗原

铝佐剂免疫法：适用于人的免疫

免疫动物（一般选择雌性动物，温顺并且可以生产）

皮内免疫法

皮下或肌肉免疫法

淋巴结免疫法

混合法

抗体效价满意后静脉注射加强免疫

常见的注射方法；皮下注射、皮内注射、尾静脉注射、静脉注射

2.   小样试血与采血

抗血清的获得：眼眶取血、颈动脉放血、心脏采血

免疫效果评价：取血（兔耳动脉、鼠尾静脉）、检测（双向免疫扩散、ELISA）

3.   抗体的分离和纯化技术

盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析、亲和层析法、电泳分离法

亲和层析法原理：利用蛋白质之间的特异性结合（抗原-抗体、受体-配体）将一种配基与凝胶颗粒结合，捕捉与他相配的物质，洗脱另外一种物质，并且洗脱一般用改变pH的方法。

主要步骤：将蛋白质与活化柱子结合，将腹水或者血清处理后过柱子，用结合缓冲液洗柱子（知道A280为零），永安氨酸缓冲液洗脱抗体，等量收集洗脱液，测定洗脱液的A280值，保留A280值明显升高的样品。

4.   抗体的鉴定

蛋白质浓度的测定：紫外分光比色法、双缩脲法、福林酚法、

免疫效果评价：双向免疫扩散、ELISA

纯度分析：免疫印迹（WB）

抗体类别分析：免疫金试条

亲和力分析：ELISA、荧光偏振

5.  抗体的保存

抗体的浓缩：吸收、蒸发、超滤

抗体的保存：浓缩抗议+甘油+防腐剂

免疫效果不佳的原因可能是：抗原纯度不够、免疫原性低、免疫途径乳化不合格、免疫剂量不合适、动物疾病或者种属差异小。

第二节  单克隆抗体制备技术

一、单克隆抗体制备的原理

1个B细胞只能产生1个抗体。方法是细胞工程杂交技术和B细胞杂交瘤技术

需要将单克隆B细胞和肿瘤细胞相结合才可以永久产生单抗

Barski等发现细胞额自然融合现象，但是频率很低

冈田等发现灭火的仙台禀赋和聚乙二醇能显着提高细胞融合的效率。

二、单抗制备的基本条件

需要培养正常的B细胞以及B细胞融合的肿瘤细胞

1.   动物的免疫抗原与载体、动物的选择、免疫途径

举例：小鼠免疫

第一次免疫：可溶性抗原加弗氏完全佐剂——小鼠背部皮下注射（4周后）

第二次免疫：可溶性抗原加弗氏不完全佐剂——小鼠背部皮下注射（3周后）

第三次免疫：可溶性抗原加生理盐水——小鼠腹腔注射（10天后检测血清效价）

加强免疫：可溶性抗原加生理盐水——小鼠腹腔注射（3天后）

细胞融合

2.  酶缺陷型骨髓瘤细胞的培养

细胞DNA合成途径：

次黄嘌呤（H）通过嘌呤合成跑路途经合成HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）进一步合成鸟嘌呤核苷酸

胸腺嘧啶核苷（T）通过嘧啶合成旁路途经合成TK（胸腺嘧啶核苷激酶），进一步合成胸腺嘧啶脱氧核苷酸

氨基酸、谷氨酰胺、鸟核苷单磷酸通过核酸生物合成主要途径结合上面两步合成的鸟嘌呤核苷酸以及胸腺嘧啶脱氧核苷酸形成DNA

将第三步当中氨基端变为氨基碟呤（A），则无法形成DNA。

因此酶缺陷型细胞的筛选就是HAT筛选

3.   单抗检测方法的建立

免疫酶技术

免疫荧光技术

免疫扩散技术

三、单抗制备的基本方法

1.   酶缺陷型骨髓瘤细胞的培养

组织培养的基本条件：

仪器：包括CO2培养箱、倒置显微镜、超净台、液氮罐、低速低温离心机

试剂：培养液、HAT选择培养液、HT培养液、血清、抗生素

耗材：培养板、培养品、吸管、移液管

骨髓瘤细胞系的选择要点：

（1）  所选的骨髓瘤细胞应与提供免疫脾细胞的动物品系相同

（2）  自身不产生免疫球蛋白的重链和轻链

（3）  对氨基碟呤敏感

（4）  与免疫脾细胞融合后产生稳定分泌的Ig杂交细胞

2.   饲养细胞的制备

饲养细胞的作用：

（1） 增加细胞浓度，满足新生杂交瘤细胞对细胞密度的要求

（2）  吞噬清楚死亡的细胞

（3）  分泌生长刺激因子促进杂交瘤细胞的生长

饲养细胞的种类和制备方法

（1）  小鼠腹腔巨噬细胞

（2）  小鼠脾细胞

（3）  成纤维细胞

3.     脾细胞的分离

（1）  拉颈椎处死小鼠

（2）  无菌操作取出脾脏

（3）  清洗、研磨

（4）  收集细胞

（5）  离心洗涤

（6）  细胞计数

4.     细胞融合：骨髓瘤细胞和脾细胞按照1:10或1:5的比例混合并加入促融剂PEG

细胞融合的方法：PEG融合、仙台病毒、电融合

5.    HAT选择性培养

       HAT选择性培养的原理：细胞的DNA生物合成右主要途径和补偿途径。当A存在是，能够阻断DNA合成的主要途径，须通过补偿途径合成DNA，这时就需要HGPRT利用H合成DNA，或者TK利用T合成DNA。

       由于选用西黄嘌呤鸟嘌呤荷塘转移酶缺陷型（HPRR-）骨髓瘤在细胞或者胸腺嘧啶割肝激酶缺陷型（TK-）细胞作为亲本，该校只能通过群全条件的DNA培养基才可合成，因此杂种细胞通过互补作用获得HGPPT或者TK基因。只有杂种细胞可以活，酶缺乏性细胞完全无法存活，单克隆B细胞一般不能长期生长，就起到了分离杂交细胞的作用。

       细胞生长情况：融合3-4天之后，可以看到刑诉骨髓瘤细胞，混元透亮的克隆。融合后第7-9天去培养上清，检测特异性抗体。

       筛选后存活的细胞就是脾细胞和骨髓瘤细胞融合细胞。

6.     阳性克隆的筛选

分泌单克隆抗体杂交瘤细胞的检测方法

免疫酶技术：简介ELISA法

免疫荧光技术：间接免疫荧光测定法、流式细胞分析技术（阴性对照：骨髓瘤细胞培养上清，阳性对照：免疫鼠血清）

7.     克隆化培养：阳性细胞的单克隆化

克隆是指由单个细胞繁殖、扩增而形成的性状均一的细胞集落的过程。

常见方法有：有限稀释法和软琼脂克隆技术

有限稀释法：从阳性分泌孔收集杂交瘤细胞。

软琼脂克隆技术：从阳性分泌孔中收集杂交瘤细胞，一适当浓度杂交瘤细胞加入到软琼脂培养基中，形成有一个细胞增殖来的细胞集群。

单克隆抗体的鉴定：

（1）  抗体敏感性检测：对腹水和培养基上清进行效价测定

（2）  抗体特异性鉴定：是否与其他抗原右交互反应。

（3） 抗体效价测定

（4）  抗体亚类鉴定：IgG（IgG1、IgG2、IgG3）、IgM

（5）  抗体亲和力鉴定

（6）  识别表位分析

8.    单克隆抗体的扩大生产：细胞培养法、小鼠体内诱生法、生物反应器

细胞培养法：杂交瘤细胞、培养瓶或罐中培养、收集上清液、纯化抗体

动物体内诱生法：Balb/c小鼠、腹腔注射0.5ml液体是啦或降植烷、腹腔内接种杂交瘤细胞、收集腹水

生物反应器：发酵罐培养

单抗培养常见的问题：

（1）  污染：培养环境、操作

（2）  融合细胞不生长：PEG、血清、HAT培养基

（3）  抗体分泌不足：支原体污染、细胞突变、培养体系有问题

（4）  杂交瘤细胞难以克隆化：血清质量、细胞活性

第三节  基因工程抗体制备技术

基因工程抗体：通过基因工程的手段，按照个人意愿进行细胞人工改造的技术。

优点主要有：特异性高、质量稳定、成本低廉、工艺简单、异源性滴低、穿透性好、功能丰富。

一、鼠源抗体人源化

鼠源抗体应用中的障碍：免疫原性、半衰期短、抗体功能片段失活。

1.     嵌合抗体：可变区基因克隆、表达载体的构建、嵌合抗体的表达

2.     改型抗体

二、小分子抗体：Fab抗体、Fv抗体和单链抗体、单域抗体、最小识别单位

小分子抗体的优点：

（1）可在原核体系中表达，降低生产成本。

（2）因为其分子量小，穿透能力强，易进入病灶部位，有利于对肿瘤等疾病的治疗。

（3）不含Fc片段，不与Fc受体结合，可减少因广泛分布的Fc受体而带来的不利影响。

（4）在体内半衰期短，有利于体内毒性物质的消除

（5）易于进一步基因工程分改造。

三、]基于抗体的应用

1.     CAR-T免疫治疗：

       CAR-T免疫疗法：即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是一种新型的过继性细胞疗法，即利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞的细胞疗法，并非药物。

       CAR-T技术：通过整个嵌合抗原受体的经过基因修饰的T细胞抵抗肿瘤细胞的疗法。嵌合抗原受体可以特异性识别肿瘤相关抗原或者肿瘤特异性抗原，识别结合后将激活及增值信号传递到T细胞内，引起T细胞激活，增殖释放细胞因子，从而杀伤肿瘤细胞。

2. 免疫检查点

3.  免疫毒素

4.  ADC

5.  双特异性抗体

第四节  [endif]抗体库技术

抗体库技术：即用基因克隆技术将全套抗体轻重链可变区基因克隆出来，重组到原核表达载体上，通过原核系统直接表达有功能的抗体分子片段，并筛选出特异性的抗体分子和可变区基因。

一、噬菌体展示技术原理：噬菌体展示技术是将外源蛋白质或者DNA序列查到噬菌体外壳上的适当位置，使外源基因随着外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随着噬菌体的重新组装而展现倒是菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已经靠发出单链丝状噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统等。

二、噬菌体抗体制备的基本程序

1.     收集淋巴细胞提取mRNA并转录到cDNA或直接提取斯堡基因组的DNA

2.     扩增DNA的抗体可变区基因

3.     [构建重组噬菌体库

4.     筛选所需特征的重组噬菌体

5.     采用突变或链置换使亲和力成熟

三、噬菌体抗体技术的特点

1.     筛选步骤简单、快速、有效

2.     扩大了筛选流量，一次就可以筛选多于1010个的克隆

3.     抗体基因型与表现性联系密切，基因稳定且容易改造

4.    模拟天然免疫系统亲和力成熟过程

5.     无需人工接种

6.     可替代动物多克隆抗体

7.     构建康体苦时。轻重链可变区基因在体外随机组合，可产生体内部存在的轻重链组合，得到新的特异性抗体。

8.     可以在预案和系统中表达，大规模生产方便，且成本低。

四、抗体库技术的应用

1.     制备全人源抗体

2.     改良基因工程抗体

⑸ 单克隆抗体技术怎样鉴别植物病毒

运用细胞融合技术，将小鼠骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞杂交，产生杂交瘤细胞。其增殖能力很强，可在体外连续培养产生抗体。选择其中能产生某单一抗体的细胞株，所产抗体称“单克隆抗体”。单克隆抗体灵敏度和专一性比多克隆抗体高，而且可以稳定地再繁殖，无需再用免疫动物，因此被广泛应用于植物病毒等病原的检测和鉴定。目前已有多种园艺花卉植物病毒的单克隆抗体应用于病毒的鉴定和检测。