食用菌种分离方法图解

1. 采用组织分离法培育菌种要经过哪些步骤

菌棒分离法，包括耳（菇）木分离法和代料基质分离法，通常称之为“基内菌丝分离法”。菌棒分离法是获得胶质菌的常用方法。菌棒分离法的主要步骤如下：

（1）耳木分离法

耳木的采集，必须在木耳、银耳出耳盛期，在已经长过子实体的耳木上，选择菌丝生长旺盛，周围无杂菌的部分，用锯截取一小段，先把耳木表面的杂物洗净，然后风干或充分晾干，使耳木干燥。在分离之前，先把耳木通过酒精灯火焰，重复燎过多次，烧去表面的杂菌孢子，再用75%酒精表面消毒。组织块必须从耳木中菌丝蔓延生长的部位选取，用无菌解剖刀挑取一小块耳木组织，接入PDA培养基上，挑取的组织块越小越好，可减少杂菌污染，提高分离成功率。培养基高压灭菌后加入广谱抗菌素（每毫升培养基加链霉素或青霉素50～100单位），抑制细菌生长。认真检查组织分离获得的菌丝体，淘汰杂菌。挑取菌落边缘菌丝，接种到新的培养基上，获得纯培养。

（2）代料基质分离法

选择子实体发生早、产量高、无病虫害的栽培瓶或栽培袋，待子实体长至八成熟时，从中筛选出最佳的一瓶（或袋），去掉子实体，然后用75%的酒精消毒整个栽培瓶（或袋），同时将接种工具和待接培养料一起放入接种箱内，用甲醛熏蒸消毒。分离时，去掉料面老菌丝，用接种针挑取小块长有菌丝的培养料，接入试管内，适宜温度下培养。选取菌丝生长良好的试管转管纯化。

2. 食用菌制种技术的分离与培养

食用菌菌种分离方法有四种，即组织分离法、孢子分离法、耳木分离法和土中菌丝分离法。
（一）组织分离法
组织分离法是利用子实体内部组织来获得纯菌种的方法，根据不同的分离材料大体可分为三种。
1、子实体组织分离
①、种菇的选择 从优良的品系中选取优良的个体作种菇，以单生菇、菇形圆整、无病虫害菇作分离材料。
②分离 把种菇带入接种箱内，用75%酒精表面消毒，用解剖刀在菌柄中部纵切一刀，然后撕开，挑取菌盖与菌柄交界处的一小块组织，接种到PDA培养基上，数天后就可看到组织块及培养基上有白色菌丝，即表明分离成功。
2、菌核组织分离 茯苓、猪苓、雷丸等药用菌，常利用菌核分离得到菌种。分离方法是将菌核表面消毒后，用解剖刀切开，取中间组织1小块，接入PDA培养基上，20℃—25℃培养。
3、菌索分离 密环菌，假密环菌常用菌索来分离。方法是将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀剪成小段。移接在PDA培养基上，20℃—25℃培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。
（二）孢子分离法
孢子分离法是利用菌类的成熟孢子能自动弹射的原理，在无菌操作条件下，使孢子在适宜的培养基上萌发长成菌丝体而获得菌种。
1、种菇的选择 孢子分离用的形态不同，孢子分离的方法也不同。
①整菇插种法：是将整只成熟度适当的种菇，经表面消毒后，插入孢子采集器内，放在适当的温度下，让其弹射孢子的方法。蘑菇、香菇、草菇等食用菌常用此法采集孢子。
②钩悬法：将新鲜的成熟度适当的耳片用无菌水冲洗后悬挂在无菌的三角瓶内或有孔钟罩内，在一定温度下让其弹射孢子。木耳、银耳常用此法采收孢子。
（三）、耳木（菇木）分离法
耳木（菇木）分离法是利用耳木或菇木中的菌丝体得到菌种的方法。
1、耳木的采集与选择 一般在该菌的生长季节里，选取生长的子实体大、肉质厚、成熟度适当、无杂菌感染的耳木或菇木进行分离。
2、分离方法 在所选耳棒长有子实体的部位，横断面锯下锯成1cm厚薄的木片，带入已经消毒的接种箱（或接种室）内。将上述木片浸入0.1%升汞溶液中30s—60s，用无菌水冲洗数次，以冲去残留的升汞液，放在无菌纱布上吸干水分，多面手用灭过菌的榔头，解剖刀切去树皮部分，把木片劈成小块，随后用镊子将小木块放入PDA培养基上，每管放一块，放适宜温度下培养。
（四）土中菌丝分离法
它是利用菌类地下的菌丝体来分离得到菌种的一种方法。主要用于腐殖质腐生菌的分离，用前述三种方法能分离得到菌种，一般不采用这一方法。但在野外采集时，菇类子实体已腐烂，而又十分需要该菌种时，就要用此法分离。具体操作如下：
①取菇体下与菇根相连的菌丝体，尽可能取较清洁的菌丝束。
②由于土壤中含有各种微生物，如细菌、放线菌、霉菌等，因此分离时要用无菌水反复冲洗菌丝束，把附着的泥土等杂物冲洗干净，把无菌棉花或纱布吸干水分。
③取菌丝束尖端部分，接入有细菌抑制剂的培养基中，25℃左右培养，无杂菌污染即分离成功。
④菌丝的鉴定。在土中获得的菌丝，其可靠性较小，必须经过出菇鉴定，才能确认是该菌的菌种。 接种后的原种或栽培种全部拿出培养箱或培养室，根据不同食用菌菌丝发育最适温 度进行培养。培养2～3天后，菌丝开始生长时，要每天定期检查，如发现黄、绿、橘红、黑色杂菌时，要及时拣出清理。尤其是塑料袋菌种，检查工作到菌丝长满为止。培养室切忌阳光直射，但也不要完全黑暗；注意通风换气，室内保持清洁，空气相对湿度不要超过65%；同时菌种瓶、袋不要堆叠过高，瓶间要有空隙，以防温度过高造成菌丝衰老，生活力降低。特别是对加温的培养室要注意：一要保持室内温度的稳定，因在温差较大的情况(特别是母种培养)会形成冷凝水，而使菌丝倒伏变黄。有条件的话，可根据菇类的菌丝生长对温度的要求，按品种分开放在不同温度的培养室(箱)内培养。同时要注意经常调换原种、栽培种排放的位置以使同一批菌种菌丝生长一致。二要注意通风换气，以免室内二氧化碳浓度过高而影响菌丝生长。

3. 平菇组织分离的方法和步骤如下

平菇母种没长满能用，平菇母种繁殖技术。一、平菇组织分离技术组织分离是采菇体的部分组织进行繁殖母种的方法。尽管平菇的任何部分都能分离培养出母种，但是多年的实践经验表明，选用菌柄和菌褶交接处的菌肉最好。平菇组织分离的方法和步骤如下： 1、种菇选择：一般选择在适宜出菇期出菇早、出菇整齐、特征典型、无病虫害、产量高的栽培袋，从中选择菌肉肥厚、大小适中、颜色正常、尚未散孢、长至七八分成熟的优质菇作种菇。 2、种菇消毒：用0.1%升汞溶液或75%酒精浸泡或擦拭，无菌水冲洗，吸干表面的水分。 3、切块接种：将分离种菇沿菌柄中心纵向掰成两半，用解剖刀在菌盖和菌柄交界处划成田字形，取黄豆粒大一小块菌肉组织，接在PDA培养基上。 4、培养纯化：温度控制在22℃~25℃之间，培养1~2天，长出白色绒毛状菌丝体，4~5天通过筛选，挑出菌丝洁白、清晰、生长整齐、健壮的试管母种继续培养，将有杂菌、长势纤弱的淘汰。7~10天菌丝长满斜面。 二、平菇孢子简易分离法笔者将多孢子分离与组织分离有机结台，使退化品种的优良特性得以恢复。现简升如下，以供同行参考。制备培养基马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，VB1微量，琼脂18g，水1000mL，pH值自然。按常规方法制试管斜面。选择种菇选取生长健壮，八成熟，无病虫害的平菇一朵，用锋利小刀在其上切取菇形美观的菇肉组织一片待用。收集孢于及培养纯化在无菌条件下，拨出斜面试管口的棉塞，用试管口从菇种菌褶处顶穿菇种片，使一小片菇种陷入管口以内，迅速塞好棉塞。于24－26℃条件下恒温培养6小时后取出。在酒精灯火焰附近去掉棉塞，用消毒小钩钩出管内的小片菇种，将棉塞连同试管口在火焰上灼烧后，迅速塞上棉塞，于24～26℃恒温培养1周，待孢子萌发，井长成成片菌丝后，切取生长迅速、无杂菌污染的菌丝团转管。待菌丝长满管后备用。组织分离将孢子分离所得试管菌种，按常规方法接入棉子壳培养基的原种瓶中(750mL)，待菌丝长满瓶后自然出菇。选取菇体健壮、菇形正常，无病虫害的菇体组织分离后得纯菌种，经栽培出菇试验后便可用于生产。三、平菇菌种的复壮－组织分离使用组织分离复壮平菇菌种，简便易行、效果明显，很适宜一般种植户。其操作技术要点是： 1.在菇床、菌墙或菌袋中选择出菇早、无杂菌病毒侵染、株型紧凑、圆整肉厚、色泽美观、七八成熟的第一潮菇的肥壮菇体作种菇； 2.在种菇中部取最大的3-4张菇片，用70%的酒精轻擦表面后置于接种箱内消毒； 3.将菇片纵向撕开，在菇盖与菇柄交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA培养基上。每只菇片可接数支试管，每次应多分离几支试管，方便选优； 4.将试管置于适温下培养； 5.培养期间每天都要检查发菌情况，从中选择菌丝浓白粗壮、边缘整齐、长速正常、无绿、黄及浆糊状等杂菌斑点的，表现最好的分离种转接于木屑麸皮培养基上，于适温下培养； 6.菌丝发满后，在接种箱内去掉棉塞，用蜡封口，用黑膜包裹后于4-9℃的冰箱内保藏； 7.在下一个生产季节与原始保藏种作对比试验，择优作为生产用种。每季都如此复壮，能逐步提高菌种各方面的性状，使发菌加快，抗逆抗杂性增强，质量明显提高。 8.有条件的可以先采用孢子分离法进行分离培养，并栽培出菇，然后从中选择较好的菇体（种菇选择标准同上），再采用上述方法进行组织分离，其复壮效果更好。注意：孢子分离的母种不能直接应用到生产中。

4. 求细菌分离纯化的详细方法

平板划线分离，在平板培养出单个细菌菌落后可以做镜检观察。

稀释倒平板法：先把微生物悬液作一系列的稀释，分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。

如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

培养基与菌种分离

培养基与菌种分离是从含有多种微生物的样品中获得纯种微生物的操作技术。菌种分离主要在培养皿上进行，常用的方法是稀释法和划线法。使用这两种方法的目的是是微生物的一个个体通过繁殖，在固体培养基上长出肉眼能见的群体，根据培养特征，用接种针调取所需菌种并在显微镜下检查，证明为单一形状的菌体。常用的培养基是选择培养基。

如分离分解纤维素的微生物用的培养基是以纤维素为碳源的培养基，因为从这种培养基上长出来的只能是分解纤维素的微生物。

以上内容参考：网络-菌种分离