常用菌种保藏方法

⑴ 常用的菌种保存方法有哪些

菌种保藏是食用菌产业的一项基础工作，是确保野生种质资源基因留存和现有生产用种遗传性能相对稳定的必要手段。菌种保藏的方法多种多样，有的虽然保藏效果好，但投资高或操作繁杂。在生产实践中，更需要设备投入少，能保障菌种不死亡、不污染、最大限度地保持优良种性的简便方法，如斜面低温短期保藏和自然基质较长期保藏相结合的方法。

一般而言，对母种进行长期保存，对原种进行短期保存。须保证优良菌种的性状和活力不发生变异，不死亡，不被污染，确保其纯度。因此，保存方法应具备取材容易、操作方便、菌种不易退化、长期保存不污染杂菌等优点。常用的菌种保存方法如下：

（一）斜面低温保藏 该法的优点是保藏方便且所占空间较小。具体做法是：菌丝长满斜面后，放在0～5℃保存。以后每隔一定时间（2～3个月）转管一次。转管保存不能长期用PDA培养基，否则种性易退化，灰树花降解木质纤维素的能力减弱。因此隔一定时间（1年左右）须把菌种转接到木屑培养基上复壮，之后挑选健壮无污染的菌丝再转回PDA培养基保存。在长期保存过程中，要防棉塞受潮滋生杂菌。菌种试管口最好用蜡烫封，以防培养基内水分过快蒸发。增加琼脂用量（2.5%～3%）可减缓水分蒸发。还要防止菌种管上的标签脱落而造成种系混杂。

斜面低温保藏方法简便易行，能随时观察保藏菌株的活力和纯度，一旦染杂，肉眼能及时发现。

（二）自然基质保藏 此法是根据灰树花的特性，利用自然基质保藏其菌种的方法。灰树花是木腐菌，可以采用以木屑为主料的培养基。自然基质营养全面，且大部为缓释养分，不易产生营养过剩或饥饿；其次，培养基理化性状好，可吸收或缓冲菌丝代谢出的有害物质，水分与通气协调平衡，部分菌丝扎入基质内生长，不裸露于空气中，菌丝呼吸强度低，生命力强。

1.原料与配方 粗、细木屑比例适当，采用板栗树木屑最佳，粗木屑粒径为2毫米左右，细木屑为一般圆盘锯屑，粗、细的比例为1∶2，添加干木屑重量20%的麸皮和1%的糖，含水率为60%左右。这样的基质通气性好，营养丰富且供菌丝分解利用的时间长，长到基质内部的菌丝比包裹在基质外部暴露于空气中的菌丝耐受性强。不同粒径的基质比例适当，还能协调气与水的矛盾。粗粒过多，架空菌丝多；细粒过多，透气性差，菌丝生长慢。应用配方如下：

栗木屑78%，麸皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，装入较粗大的试管中，装料量为试管的1/3～1/2，1.5千克/厘米2灭菌1.5小时。冷却后，接入需保藏的菌种，在28℃下培养，待菌丝长满木屑培养基时取出换上无菌橡皮塞，在0～5℃冰箱内保藏1～2年转管一次。

2.容器与装量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗洁净，装量一般不超过玻璃瓶容量的3/5，填料不能过满，瓶壁所残留的颗粒须擦拭干净，否则保藏的菌种易引起污染。

3.灭菌和冷藏 灭菌时若采用棉塞封口，基质表层易失水，接种成活率低，即使菌丝复活，生长也很缓慢，所以最好采用聚丙烯膜封口，接种后换用无菌棉塞培养，待菌丝长满后再换成有孔灭菌胶塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌种经3年贮放后，接出成活率均达90%以上，出菇验证产量及子实体形态特征均无明显变化。因此，自然基质保藏法具有保存期长，菌种遗传性能相对稳定的特点。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰树花在自然状态下易发生于栗树根部，这说明其营养需求较为特殊。根据灰树花这种习性，在PDA基础上添加适量的栗树木粒制成母种培养基。在多年的使用中发现，用该培养基培养的母种生长势好，在转接原种时，适应能力强，萌发定植快；用作菌种保藏基质时，保藏时间长，并能很好保持菌种的优良性状。

1.木粒PDA的制作 选取栗树边材，加工成0.3～0.5厘米的颗粒，及时烘干或晒干备用。称取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成营养液。将营养液倒入盛有木粒的小铝锅中，营养液以完全浸没木粒为准。煮沸10分钟，以加快木粒对营养液的吸收速度，起锅静置30分钟让木粒吸足营养液。捞出木粒，沥掉表面的水，装入试管，装量为试管长的1/6，最多不得超过试管长的1/5，否则在摆制斜面时，不易使木粒均匀分散于斜面的表面上。

选取新鲜的马铃薯，去皮并切成薄片，称取200克放入小铝锅中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁热过滤取汁，并补足1升的体积。称取琼脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。先将琼脂剪碎，加入到马铃薯滤液中，继续用文火加热，使琼脂溶化。待琼脂完全溶化后，加入称好的其他3种营养成分，搅拌使这些物质溶解均匀，趁热装入已装有木粒的试管中，装至试管长的1/3处，塞上棉塞。

在0.8～1千克/厘米2蒸气压下灭菌40分，待气压降至0时，开盖取出，趁热轻轻抖拍试管，使木粒分散后即可摆制斜面，并使木粒呈半裸状分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培养基。

2.生长及保藏效果 木粒PDA斜面上培养的灰树花母种，菌丝生长迅速、良好，12天即可长满试管，但菌丝的后期生长势更为粗壮、浓密，后劲足。转接原种时，菌种适应力强，定植快。这表明，灰树花菌丝的生长速度、生长势不仅取决于本身的遗传性，而且很大程度上取决于培养基的营养。常规PDA的营养成分，主要是可溶性的速效性营养，前期营养丰富，营养利用直接，因而前期菌丝生长迅速、良好，后期营养则不足，菌丝生长不良，长势欠佳。木粒PDA由于在增添了木粒这一缓效性营养，就木腐性的灰树花而言，营养配伍合理，补充了菌丝生长后期所需的营养，因此后劲足。

菌丝体对基质的分解利用是通过菌丝细胞分泌的胞外酶，将基质中的大分子营养分解成小分子营养后才被吸收利用的，而这些胞外酶大多为诱导酶，其合成与分泌受基质的诱导和分解产物阻遏机制调节。就纤维素酶而论，许多易代谢碳源（如葡萄糖等）具有引起酶合成阻遏作用，同时伴随着菌丝体的旺盛生长，酶的大量合成则出现在易代谢碳源基本耗尽之后，且受到基质纤维素的诱导，常规PDA基质，到葡萄糖等易代谢碳源基本耗尽的后期，由于营养的缺乏，菌丝生理机能下降，酶的合成量减少。而木粒PDA不仅含有易代谢碳源——葡萄糖，又含有木粒这一缓效性营养，前期葡萄糖促进了菌丝体旺盛生长，获取了大量的菌丝体，表现为菌丝粗壮、浓密。到了易代谢碳源耗尽的后期，木粒一方面补充了后期所需的营养，使菌丝的生埋机能维持在一定的水平；另一方面木粒的纤维素激活菌丝细胞纤维素酶的诱导机制，合成了大量的酶，保持了木腐生性灰树花较强的分解木材的能力，因此，用该培养基培养的母种在转接原种时适应力强，萌发定植快。因部分菌丝长入木粒内部，抵抗不良环境的生存能力增强，种质不易退化。木粒PDA灰树花菌种，在0～5℃保藏2～3年再转管活化，成活率仍达到90%左右。此外，木粒PDA应用于木腐性灰树花种的提纯复壮，效果也较理想。

（四）石蜡隔氧封藏 具体做法是将液态石蜡分装入三角瓶内，装量达瓶空间的1/3，塞好棉塞，于121℃灭菌2小时，然后置40℃温箱中，使其水分蒸发，或置于干燥器内数日以除去水分，石蜡呈透明状为宜。在无菌条件下，用无菌吸管装入已长好菌丝的斜面试管，使液面高出斜面顶部1厘米左右。塞上无菌橡皮塞，竖直保存。此法可使菌种存活3年以上，但以1～2年移植一次为好。移植时不必倒出石蜡，用接种钩取一块菌丝即可。因转移时带有石蜡，菌丝生长弱，需要再转管1～2次，方能复壮。

⑵ 微生物菌种保藏的方法有哪些

菌种的优劣是食用菌生产成败的关键。菌种是国家重要的生物资源，也是微生物工厂首要的生产资料。由于微生物繁殖快、易变异，因此微生物菌种特别需要妥善保藏。世界各国对微生物菌种都很重视。中国科学院微生物研究所专门设立了菌种的保藏机构，为各生产单位收藏和供应各种优良菌种。当然就具体的生产单位而言，大量的生产用菌种还得靠自己来生产和保藏。
菌种保藏的目的：是使优良菌种经过较长时间后，仍能保持菌种的优良性状、生活能力及纯度，降低菌种的衰亡速度，确保菌种的纯一，防止杂菌污染及绝种。
保藏菌种的方法：人们在长期的生产实践中，积累了不少保藏菌种的经验，常用的保藏方法有：斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、砂土管保藏法、滤纸片保藏法、谷粒保藏法等。常用保藏菌种的方法有以下几种：
（1）斜面低温保藏法这是最简单最普通的保藏方法。首先将菌种在适宜的斜面培养基（一般PDA）上培养成熟后，选择菌丝生长粗壮，边缘保存。一般保存温度4～6℃，除草菇和银耳菌种外（10～15℃），此方法对其他食用菌都适宜，一般菌种可保藏2～4个月，所以需定时移接。此法保藏虽然方便，但是保藏时间短，需经常转管，也很容易发生衰退变异现象。因此，不能用作长期保藏，最好与其他方法结合起来保藏。
另外，为了减少保藏期间培养基水分蒸发，琼脂最好加到2.5%。为防止菌种在保藏过程中产酸分的积累，应加入0.2%的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等缓冲盐类，同时，培养成熟后，最好将棉塞管口外剪平，并用矿蜡封或换以无菌木塞，这样做也可以减少培养基水分的散失，延长保存时间。
在农村如果没有冰箱，可采用土法保藏。即把保藏用的斜面菌种换上无菌橡皮塞，并用矿烛蜡封后密闭的广口瓶中，悬入井底保藏。（2）贮藏室保藏法原种和栽培种一般只在贮藏室短期保藏，贮藏室温度0～10℃为好。室内应清洁、干燥、无光，应经常检查温度和湿度，以降低其生活力，减少变异退化，防止杂菌污染，避免过早出菇。温度越高，保存的时间越短。

⑶ 香菇菌种的实用保藏方法有哪些

（1）斜面低温保藏 常用的方法是采用PDA培养基试管，在1～4℃的稳定低温容器中保藏，每3～4个月繁殖一次；也有采用同样的低温条件，但培养基是木屑麦皮培养基，一年更换一次。
（2）液氮保藏 在从-196℃的温度下取出或进入-196℃温度保藏的过程中，严格按照液氮保藏的有关条件和程序处理受保藏或将取出使用的香菇菌株，防止在保藏或取出的处理过程中使菌株受伤害。

⑷ 保藏菌种的方法有哪些

1、传代培养保藏法：包括又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等，培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法：液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间。

3、载体保藏法：载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物。

5、冷冻干燥保藏法：先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥），其中真空冷冻干燥法最常见。

(4)常用菌种保藏方法扩展阅读

菌种保藏的原理：

菌种保藏有多种方法，其原理大多大同小异，主要是运用一些方式尽量降低生物体内的代谢，达到延长生命，减少变异的目的。通常采用的方法为低温、缺氧、干燥。

低温主要对菌种产生两方面的影响，首先，较低的温度可以减缓机体细胞的酶活，降低新陈代谢，达到保藏菌种的目的。其次，低温同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制，如果降温过程失误，同样会造成机体的机械损伤和溶质损伤。

⑸ 真菌分离培养、传代和保存菌种最常用的方法是

正确答案:A
解析：真菌的培养方法主要有三种：试管培养是真菌分离培养、传代和保存菌种最常用的方法；玻片培养可用于真菌菌种鉴定；平皿培养只能用于生长繁殖较快的真菌
。

⑹ 菌种保藏的常用方法及特点

摘要 1、斜面低温保藏法

⑺ 菌种保藏的常用方法及特点

（1）斜面低温保藏。是一种最常用、最简便的菌种保藏方法。首先将需要保藏的菌种接到斜面培养基上，在适宜的温度条下培养，当菌丝健壮地长满斜面时，即将此试管菌种取出，放置于4 ℃的冰箱中保藏。特点：
①简单易行，适用于各类菇类菌种保藏，是目前生产及科研普遍采用的一种方法；②保藏时间短，需6个月转接一次，转管次数多菌丝变异的可能性大；③如改用橡皮塞并用石蜡扣，可保藏1年～3年。
（2）液体石蜡保藏。液体石蜡保藏也称为矿油保藏，即用矿油覆盖试管斜面试管保藏的方法。矿油是指无色、透明、黏稠、性质稳定、不易被微生物分解的石蜡油和液体石蜡，将其覆盖在斜面菌种之上，可以隔绝空气，防治培养基水分蒸发，抑制微生物的代谢活动，推迟细胞老化，从而达到长期保藏菌种的目的。特点：
①方法简便易行，保藏条件不严格，保藏时间长，可作为长期保藏菌种的方法；②菌种必须垂直放，放置不方便。
（3）滤纸保藏。滤纸保藏是一种以无菌滤纸作为食用菌孢子吸附载体长期保藏菌种的方法，又称滤纸孢子保藏法。特点：技术要求高，设备费用大，菌种不易衰老退化，菌种保藏时间长很少变异。
（4）自然基质保藏。自然基质保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含营养的自然生长的基质作培养基来保藏菌种的方法。自然基质很多，食用菌常用的自然基质有发酵的粪草、木屑及枝条基质等，取材方便，制作方法简便，保藏时间也较长。使用时，只需取一块、一粒或一条培养物放在新鲜的培养基上，并在适温下培养即可。特点：方法简便易行，保藏时间长。

⑻ 微生物的保藏技术各自特点

1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物
质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存。

、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如
①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。②砂土保存法。③硅胶保存法。④磁珠保存法。⑤麸皮保存法。⑥纸片(滤纸)保存法

4、悬液保存法：即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有①蒸馏水保存法：本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法

5、寄主保存法：即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。

6、冷冻保存法：适用于抗冻力强的微生物。这些微生物可在其菌体细胞外遭受冻结的情况下而不受损伤，而对其它大多数微生物而言，无论在细胞外冻结还是在细胞内冻结，都会对菌体造成损伤，

7、冷冻干燥保存法：其原理是首先将微生物冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。事实上，从菌体中除去大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。该方法适用于绝大多数微生物菌种(包括噬菌体和立克次氏体等)的保存。

8、甘油管保藏法

⑼ 简述微生物菌种保藏的常用方法。

小甘度复合硝化反硝化，应密封贮存于阴凉、干燥处，远离火源，同时不要与有毒物品一起存放。接触产品后，应用热肥皂水将手洗净，以避免吸入或接触眼部。

⑽ 常用的蛹虫草菌种保藏方法有哪些

在实践中，人们尝试了许多保藏方法，如继代培养保藏法、液体石蜡保藏法、蒸馏水保藏法、冷冻干燥保藏法。这些方法各有利弊，在实践中要根据保藏的目的、资金及设备状况等因素，选择最佳保藏方法。

1.斜面培养基冰箱保藏法这是最常用的菌种保藏方法。因为它简单易行，不需特殊设备，并能随时观察保藏菌种的情况。因此，短时间保藏菌种，一般都采用此法。

将需要保藏的菌种接种在斜面培养基上，在适宜的温度下培养，当菌丝健壮地长满斜面时，即可将此试管菌种取出，放在4℃的冰箱中保藏。用于保藏菌种的棉塞，要用硫酸纸包扎，防止霉菌污染。冰箱保藏蛹虫草菌种，一般1个月转管一次。

冰箱保藏，虽然简单易行，但温度不够低，只有4℃左右，蛹虫草的新陈代谢活动并未停止，而试管斜面也易失水变干。因此，保藏时间较短，1个月就需转管一次，转管次数多了，变异的可能性也就增大，不适宜长期保藏菌种。若保藏时间超过1月，菌种的转色与出草能力明显下降。

2.大米培养基冰箱保藏蛹虫草在大米培养基上培养后在冰箱内能保藏较长的时间，根据试验，保藏5个月菌种质量无明显变化。

3.蚕蛹基质保藏法以家蚕蛹为培养基保藏蛹虫草，在冰箱保藏4个月或在室温下保藏1个月，均未发现明显的变化，生产上多采用此种方法。

采用大米及家蚕蛹培养基在三角瓶保藏菌种，保藏的菌丝体相对较多，基质不易干燥，生产上使用方便。

4.矿油保藏法矿油（主要是液体石蜡）保藏，也称液体石蜡保藏。此法简单易行，无需另添设备，各生产单位均可应用。矿油能隔绝气体交流，防止培养基水分蒸发，抑制微生物代谢，推迟细胞衰老，能延长微生物的生命。

（1）培养基常用的培养基配方为20%的马铃薯汁500ml，5%的蚕蛹汁500ml，蛋白胨5g，磷酸二氢钾（KH2PO4）3g，硫酸镁（MgSO4H2O）1.5g，葡萄糖20g，维生素B1微量，琼脂15g，pH6.5，1kg/cm2灭菌30min。

（2）矿油处理选用化学纯的液体石蜡（要求不含水、不霉变、比重为0.865～0.890），分装于三角瓶中，装至瓶体的1/3处，塞好棉塞；另配一套具有虹吸管的橡皮塞，用纸包好，与三角瓶一起于1kg/cm2灭菌30min。灭菌后，将液体石蜡放在40℃的温箱中，使液体石蜡中的水分蒸发干净，至石蜡液呈完全透明为止。

（3）接种培养将需保藏的菌种，接入斜面培养基上，在20℃左右下培养，待斜面长满健壮菌丝后，取出装入矿油。

（4）矿油灌注将上述菌种和无菌矿油放入无菌室（箱），把有虹吸管的橡皮塞装上矿油三角瓶，无菌操作使矿油注入斜面试管内（少量菌种也可用无菌吸管灌注），使液面高出斜面顶部1cm。

（5）菌种保藏将灌注矿油的试管直立放在试管架上，于室温或冰箱中保藏均可。室温保藏的环境应注意通风干燥，以免棉塞发霉，并要定期检查。如矿油覆盖的斜面明显变浅，应及时补充无菌矿油，切忌培养基露出液面。

液体石蜡易燃，使用时需加注意。从覆盖矿油斜面中移植菌种时，应尽量少带矿油。因矿油在火焰灭菌时，会爆炸飞溅。

以后用作菌种时，可从斜面上挑取少许培养基，接种在新鲜的培养基上，经过培养，即可使用。

5.双重橡皮栓法用普通的斜面培养基先培养菌丝，用双重橡皮栓取代棉塞。这种双重橡皮栓要预先用氧化丙烯灭菌，方法是按1L容器注入1ml氧化丙烯，原封放置待用。采用蒸汽容易使橡皮变软，而用氧化丙烯等灭菌方法可以避免此弊，利用双重橡皮栓能防止空气进入试管，从而达到与液体石蜡同样的效果。

6.水箱中保藏法把蛹虫草菌种悬浮在不含有机营养成分的水管中保存，一般用的悬浮液有蒸馏水、食盐水、用蒸馏水时，在接有蛹虫草菌种的琼脂培养物中加入6～7ml蒸馏水，使细胞、孢子或蛹虫草菌丝充分悬浮，尔后转入试管内，密封后室温下保藏。用食盐水时，把在琼脂培养基斜面上长好的菌丝悬浮在1%的食盐水中，密封后在室温条件下保存。

7.液氮超低温保藏法此法是将菌种密封在含保护剂的安瓿管内，经控制速度冻结后，在－150～－196℃液态氮超低温罐中保藏。

（1）菌种制备保藏孢子时，取孢子制成悬液，加入保护剂，装入无菌安瓿管内。保藏菌丝体时，用液体振荡法培养菌丝球，或用平板培养菌丝体，也可用麦粒菌种。取适量放入无菌的装有保护剂的安瓿管内。

（2）安瓿管制作安瓿管的玻璃，要能经受温度突变而不破裂，容易用火焰封管口，恢复培养时容易打开。一般采用硼硅玻璃，管的大小根据需要而定，通常是75mm0mm或能容1.2ml液体的安瓿瓶比较合适。选好安瓿管后，每管加进0.8ml保护剂，塞上棉塞，1kg/cm2灭菌15min，作冻结琼脂菌丝片或麦粒菌种用。如冻结孢子悬液时，则空管灭菌。

（3）保护剂用10%（体积比）甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜（dimethylsulfoxide）蒸馏水溶液作保护剂。

（4）冻结保藏将上述准备好的菌种无菌操作移入加有保护剂的安瓿管中，用火焰将安瓿管上部熔封，浸在水中检查有无漏气。然后将封口的安瓿管放在慢速冻结器内，控制冻结速度（每分钟下降1℃），使样品逐步均匀地冻结到－35℃。－35℃以下的冻结速度，可不用控制而迅速下降。安瓿管冻结后，立即放入液氮罐中。罐内的气相温度为－150℃，液体温度－196℃。

（5）恢复培养保藏菌种时，将安瓿管从液氮罐中取出，立即放入38～40℃的水中摇荡至管内冻结物全部融解，开启安瓿管，将管内菌种接入适宜培养基培养即可。

液氮超低温保藏，是目前长期保藏菌种的最好的一种方法。用它进行保藏各类微生物和活细胞的试验，都获得了满意的结果。对那些难以保藏的或只产生菌丝的真菌，用此法保藏也很成功。

现在，普遍对液氮保藏的效果都持乐观态度，认为液氮保种很少或不会引起细胞中遗传物质的变化。而且液氮保藏后菌株出现的问题却很少报道。然而，Fritss首先在荷兰Horst发现杂交菌株U1经液氮保藏3年后出现退化，部分培养物产量下降，出现硬开伞，经组织分离培养后，产量质量又恢复正常。据她认为，经原生质体重新融合产生的杂交菌株，其本身对不利因素（如超低温的刺激）适应性差，故在液氮保藏中必须考虑到这一影响。而且反复的冷冻和解冻也会使菌株受到不同程度的损伤。

另一方面，液氮保藏本身也有不足之处，问题在于液氮保藏系统成本高，有些地方液氮不足，使一般保藏中心不能单独依靠这一保藏技术。而且液氮保藏的菌种，首先必须培养在琼脂培养基或液体培养基中，对邮寄交流造成一定麻烦。

一般认为，在未经有效可靠检测之前，从液氮保藏中取出的菌种尤其是杂交菌株，不宜作当年产季的生产用种，必须经过出菇试验，以确保无退化或无变异才能投入生产。

干燥保藏的作用原理在于除去蛹虫草菌丝细胞的游离水，以达到除去细胞代谢的液相环境，从而使代谢活动停滞并进入休眠状态，有利于长期保存。