细菌接种检验常用的接种方法

A. 微生物学常用的接种技术有哪些各有何特点

细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等，其方法和应用各有不同。
一、划线法：
此法主要用于菌种分纯，获得单菌落.

由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。

优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。

缺点：不能用于菌落计数。

二、涂布法：

此法主要用于菌落总数计数.

先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml 菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌L 型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

优点：可以计数，可以观察菌落特征。

缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。

三、倾倒法：

此法主要用于菌落总数的计数.

吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。
优点：可以计数，较方便。

缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征，不适用于严格好氧菌和热敏感菌。

四、斜面接种法：

此法主要用于保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力.

用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来移种的菌落。伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。

五、液体培养基接种法：
此法主要用于菌液比浊实验

用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。

六、螺旋接种法：
此法主要用于菌落总数计数
可以在无任何全部或中间稀释的情况下快速细菌接种。对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。

优点：螺旋接种法菌液无需稀释（其他接种方法均需经过梯度稀释才能计菌落数），自动化接种，效率高，可节省3/4 的耗材和时间。

缺点：产品成本高，适用于样品量比较大的实验。

B. 微生物检验细菌的接种方法

微生物检验细菌的接种方法

常用的细菌接种方法有平板划线分离法、斜面接种法、穿刺接种法、液体和半固体接种法、涂布接种法等。下面是我为大家带来的关于微生物检验细菌的接种方法的知识，欢迎阅读。

一、平板划线分离法

平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

为方便划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种(如图1， A、B)。

分区划线法是将平板分四区，故又称四分区划线法。划线时每次将平板转动60~70°划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线;

另一种连续划线法是从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。

1)连续划线法

将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水，接种环于酒精灯外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。

轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。

于靠近酒精灯处打开平皿盖约30°，右手将环伸进平皿，将菌种点种在平板边缘一处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘(如图2)，抽出接种环，盖上平皿盖，然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧，打开平皿盖约30°伸入接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖。灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。培养皿倒置于适温的恒温箱内培养(以免培养过程皿盖冷凝水滴下，冲散已分离的菌落)。培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，镜检后再接种斜面。

2)分区划线法

取菌、接种、培养方法与“连续划线法”相似。

分区划线法分离时平板分四个区，故又称四分区划线法。其中第4区是单菌落的主要分布区，故其划线面积应最大。为防止第4区内划线与1、2、3区线条相接触，应使4区线条与1区线条相平行，这样区与区间线条夹角最好保持120°左右。

先将接种环沾取少量菌在平板1区划3~5条平行线，取出接种环，左手关上皿盖，将平板转动60~70°，右手把接种环上多余菌体烧死，将烧红的接种环在平板边缘冷却，再按以上方法以1区划线的菌体为菌源，由1区向2区作第2次平行划线。第2次划线完毕，同时再把平皿转动约60~70°，同样依次在3、4区划线。划线完毕，灼烧接种环，关上皿盖，同上法培养，在划线区观察单菌落。

二、斜面接种法

该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。

(1)左手平托两支试管，拇指按住试管的底部。外侧一支试管是斜面上长有菌苔的'菌种试管，内侧一支是待接的空白斜面，两支试管的斜面同时向上。用右手将试管塞旋松，以便在接种时容易拔出。

(2)右手拿接种环(如握毛笔一样)，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌.

(3)将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将两支试管的试管塞一并夹住拔出，试管塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过火焰。注意不得将试管塞随意丢于桌上受到沾污，试管口切勿烧得过烫以免炸裂。

(4)将已灼烧的接种环伸入外侧的菌种试管内。先把接种环的先端触及无菌苔的培养基上使其冷却(如果操作迅速，此时接种环尚未完全冷却)。再根据需要用接种环沾取一定量的菌苔，注意勿刮破培养基。将沾有菌苔的接种环迅速抽出试管，注意勿使接种环碰到管壁或管口上。

(5)迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部，轻轻向上划线(直线或曲线，根据需要确定)，勿划破培养基表面。

(6)接好种的斜面试管口再次过火焰，试管塞底部过火焰后立即塞入试管内。

(7)将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼，使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，会使菌体爆溅，造成污染。

(8)放下环后，再将试管塞旋紧，在试管外面上方距试管口2～3cm处贴上标签。

(9)28℃～37℃恒温培养。

斜面接种方法及无菌操作过程如下具体操作过程见图3。

三、穿刺接种法

用接种针经火焰灭菌，沾取少量菌种，垂直地穿入试管固体培养基中心至底部，然后将挑起菌落的接种针平行于管壁插入琼脂斜面底部、沿着原接种线将针拔出、烧试管塞和试管口、塞上试管塞，再将接种针上残留的菌体在火焰上烧掉。要做到手稳、动作轻巧快速。见下图4。(a:垂直接种法，b：水平接种法)

四、液体和半固体接种法

1)液体接种法

包括从外面菌种接人培养液，或从液体菌种接入液体培养液，两种情况都可以用接种环接种。但在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种，要求无菌操作。

左手持试管，右手将烧灼过的接种环伸入菌种管，待冷却后，取菌液一环，立即移入培养基管中，在接近液面的管壁上轻轻研磨，然后将试管稍倾斜，并沾取少许液体调和，使菌液混合于培养基中

2)半固体培养基接种法

将烧灼过的接种针插入菌种管冷却后，沾取菌液少许，立即垂直插入半固体培养基的中心至接近于管底处，但不可直刺至管底，然后循原路退出(图5，B)。管口通过火焰，塞上棉塞，接种针烧灼灭菌后放下。

将上述已接种好的培养物， 37℃度恒温箱内培养，24小时后取出观察结果。

五、涂布接种法

将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水，用无菌移液管吸取菌悬液0.1mL，滴加于培养基平板上，右手持无菌玻璃涂棒，左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，在火焰旁右手持玻璃涂棒与培养皿平板表面将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散，切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。接种后，将平板倒置于恒温箱中，培养观察。

C. 接种细菌的三种方法各有什么用途

接种细菌的方法各有什么用途：

1、平面接种法：此方法主要用于鉴定或保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力。

2、菌落分纯法：此方法主要用于分离琼脂平板上的混合菌。

3、液体培养基接种法：此方法可用于比浊试验中。

4、平板划线接种法（又称分离培养法）：平板划线接种法为最常用的分离培养细菌的方法，通过平板划线后，可使细菌分散生长，形成单个菌落，有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。平板分离划线的方法比较多，其中以分区划线发育曲线划线法较为重用。其目的都要时细菌呈现单个菌落生长，便于同杂菌菌落鉴别。

5、纯培养细菌接种法：用于培养保存菌种及其实验用。

6、半固体培养基穿刺培养法：用于保存菌种及间接观察细菌之动力（无动力之细菌仅沿穿刺线生长，清晰可见；有动力的细菌使培养基呈现浑浊样，穿刺线甚至难以看出。）

接种注意事项：

1、在超净工作台上操作，工作台在使用前要紫外消毒，酒精消毒等。

2、应在酒精灯火焰前操作。

3、取菌种前灼烧接种针或接种环（要烧红）。

4、烧红的接种针（环）少使冷却在取菌种，以免烧死菌种。

5、接种后应尽快塞上面塞。

D. 高中微生物常用的接种方法有哪些

微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作，主要用于微生物的分离纯化。具体来说，就是在无菌条件下，用接种环或接种针等专用工具，从一个培养皿（上面可能存在各种杂菌落）挑取所需的微生物，转接到另一个培养基中进行培养，从而实现所需微生物的纯化鉴定，获得没有杂菌污染的单纯菌落等。
接种的方法有很多，按培养基种类可分为利用固体培养基和利用液体培养基，以及居中的半固体培养基。
固体培养分离，有涂布平板法，倒平板法，平板划线法，稀释摇管法等。大部分细菌和真菌用固体培养法即可以得到较满意的分离结果了。
液体培养基常用稀释法，比较繁琐，一般需要重复进行几次。

E. 如何选择细菌接种方法

细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等，其方法和应用各有不同，下面进行解释以帮助实验人员选择操作。

划线法：此法主要用于菌种分纯，获得单菌落

由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。

优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。

缺点：不能用于菌落计数。

涂布法：此法主要用于菌落总数计数

先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml 菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌L 型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

优点：可以计数，可以观察菌落特征。

缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。

倾倒法：此法主要用于菌落总数的计数

吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。

优点：可以计数，较方便。

缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征，不适用于严格好氧菌和热敏感菌。

斜面接种法：此法主要用于保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力

用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来移种的菌落。伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。

液体培养基接种法：此法主要用于菌液比浊实验

用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。

螺旋接种法：此法主要用于菌落总数计数

Spiral plater 可以在无任何全部或中间稀释的情况下快速细菌接种。对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。

优点：螺旋接种法菌液无需稀释（其他接种方法均需经过梯度稀释才能计菌落数），自动化接种，效率高，可节省3/4 的耗材和时间

缺点：产品成本高，适用于样品量比较大的实验

F. 生物细菌培养中常用的接种方法有哪两种

生物细菌培养中常用的接种方法有哪两种
答：稀释涂布平板法平板划线法

G. 微生物接种方法有哪几种

接种常见方法有：平板划线接种法、斜面接种法、倾注培养法、穿刺接种法、液体接种法。

一、平板划线分离法

平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。

二、斜面接种法

该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。

三、穿刺接种法

穿刺培养，是指将带有欲培养微生物的接种针深插至半固体培养基（琼脂含量0.2%〜1.0%）中接种，并进行微生物固体深层培养的一种方法，主要用于厌氧或兼性厌氧微生物的培养。

四、液体接种法

液体培养，是指将微生物直接接种于液体培养基中，并不断振荡或搅拌，使微生物均匀地在液体培养基中生长繁殖的一种培养方法。液体培养适用于好氧微生物和植物组织培养，以迅速得到大量繁殖体为目的。

五、涂布接种法

微生物学实验中的一种操作方法。由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。

(7)细菌接种检验常用的接种方法扩展阅读：

接种注意事项

1、每次接种时间最长不得连续超过2小时。

2、操作时，接种工具尖端和种块不能接触到管口和外部其它物体。工具尖端碰到外面物体要重换工具，种块碰到外面物体则作废。

3、一般用种量：每支试管母种可扩繁一级种100支左右；扩接原种6～8瓶。

H. 微生物接种技术有哪些

七、涂布接种

先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。