Ⅰ 组织学最常用的制片方法是
石蜡切片。石蜡切片操作要点。
切片前,把切片机上相关锁杆或螺旋拧紧,否则可能出现跳片、切片厚薄不均现象。
刮净包埋盒周边的余蜡,否则样品夹持可能松动,影响切片质量。
正确修块,先粗修,厚度大约在15-30微米,质地较硬的组织或较小的组织应再薄一些。粗修至组织全部暴露后,再进行细修。
选择蜡块握雀冷冻方式,冰盒优于冷冻台。使用冰盒能加水润湿蜡块,冷冻速度快,体积小,使用成本低,无须外接电源。
切片时轻握手轮,用力均匀轻柔,摇速不宜过快或过慢。过快会导致切片厚薄不均,切片难以展开;过慢会使切片增厚。切片要求完整、薄、均匀。
正确固定
组织离体后,必须在1小时内固定。固定液须是组织体积的4-10倍,浓度准确,过稀或过浓都会影响组织中扮形态和固定效果。如发现固定液变质,如甲醛液体产生白色沉淀,应立即更段培早换。
固定温度宜室温或放于35-37℃的全封闭组织处理机内,温度过高,会加快组织自溶和过度收缩,破坏细胞内的抗原和DNA。固定时间不超过40小时,根据室温和标本不同而调整。