紫外分光光度常用方法

① 紫外分光光度计使用方法及原理

可见-紫外分光光度计的工作原理基于朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律，即物质在一定浓度 的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比，其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。
主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标 准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。 实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不 同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂 。

② 紫外分光光度法

分光光度法
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长（λ）为横陵念坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。它们与比色法一样，都以Beer-Lambert定律为基础。 上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。
波长范围
(1)200～400nm的紫外光区，(2)400～760nm的可见光区， (3)2.5～25μm(按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>)的红外光区。
仪器
紫外分光光度计，可见分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。
编辑本段绝汪笑基本原理
当一束强度为I0的单色光垂直照射某物质的溶液后,由于一部分光被体系吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的透光率T为: 根据朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律: A=abc 式中A为吸光度，b为溶液层厚度（cm），c为溶液的浓度（g/dm^3)， a为吸光系数。其中吸光系数 与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。 由上式可知，当固定溶液层厚度l和吸光系数 时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系。在定量分析时，首先需要测定溶液对不同波长光的吸收情况（吸收光谱），从中确定最大吸收波长 ，然后以此波长 的光为光源，测定一系列已知浓度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲线。在分析未知溶液时，根据测量的吸光度A，查工作曲线即可并含确定出相应的浓度。这便是分光光度法测量浓度的基本原理。

③ 简述用紫外分光光度法定性鉴定方法有哪些

1、比对最大吸收峰的方法；
2、摩尔吸光系数的比对法；
3、比对吸收光谱曲线法。

④ 紫外分光光度法常用的鉴别方法有哪些

（一）使用的收池必须洁净，并注意配对使用坦激。量瓶、移液管均应校正、世扒洗净后使用。
（二）取收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/让返袜5
为度，使用挥发性溶
液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。

⑤ 光学分析法的紫外-可见分光光度法

紫外-可见光区一般指波长200nm至760nm范国内的电磁波。根据物质分子对此光区电磁波的吸收特性进行定性和定量分析的方法称为紫外-可见分光光度法。紫外分光光度法使用的辐射波长范围是200~400nm，主要是引起分子中的外层价电子的能级跃迁。分子吸收此区域的紫外线后，在发生价电子能级跃迁的同时，也伴随着分子的振动和转动能级的跃迁，故形成带状紫外吸收光谱。据此可进行某些类型的有机物的定性、定量和结构分析：可见分光光度法使用的辐射波长范围是400~760nm，具有长共轭结构的有机物或有色无机物吸收一定波长的可见光后，发生价电子能级跃迁，并伴随振动和转动能级的跃迁，其吸收光谱也是带状光谱。通常紫外分光先度计都有可见光波段，因此常将两者一起称为紫外-可见分光光度法。

⑥ 紫外可见分光光度计的具体使用方法

1、机器开关在机器的右侧，按一下就会打开，有个小的屏幕，可以按数字键来操作选项，测吸光值操作。

⑦ 紫外-可见分光光度法的使用方法

《中华人民共和国药典》2005年版 第一部 附录VA （P附录28）： （1） 波长 由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、搏游435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的差别，使用时应注意。
（2）吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸辩如溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定 ，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。 波长/nm235（最小）257（最大）313（最小）350（最大）吸收系数
的规定值 124.5 144.0 48.62 106.6 吸收系数
的许可范围 123.0～126.0 142.8～146.2 47.0～50.3 105.5～108.5 （3） 杂散光的检查可按下页表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。 试剂浓度%（g/ml）测定用波长（nm）透光率 %碘化钠 1.00 220 <0.8 亚硝酸钠5.00340<0.8 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增大为准，由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。当溶液的pH值对测定结果有影响时，应将供试品溶液和对照品溶液的pH值调成一致。
（1） 鉴别和检查 分别按各品种项下的方法进行。
（2） 含量测定 一般有以下几种。 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度∶
CX=（AX/AR）CR
式中 CX为供试品溶液的浓度；
AX为供试品溶液的吸光度；
CR为对照品溶液的浓度；
AR为对照品溶液的吸光度。 供试品溶液加入适量显色剂后测定吸光度以测定其含量的方法为比色法。
用比色法测定时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后，以相应试剂为空白，在各品种规定的波长处测定各份溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。
也可取对照品溶液与供试品溶液同时操作，显色后，以相应的试剂为空白，在各品种规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度，按上述（1）法计算供试品溶液的浓度。
除另有规定外，比色法所用空白系指用同体积溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等携银启量的相应试剂，并用同样方法处理制得。

⑧ 紫外可见分光光度法是什么

紫外可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立轮宴起来的一种定性、定量和结构分析方法。

紫外可见分光光度法从问世以来，在应用方面有了很大的发展，尤其是在相关学科发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更腊配银加齐全，使得光度法的应用更拓宽了范围。

分光光度计的主要部件

1、光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度，稳定。可见光区：钨灯，碘钨灯（320-2500nm)，紫外区：氢灯，氛灯（180-375nm)氩灯：紫外、可见光区均可用作光源。

2、单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。

3、棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同，光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕。利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光。

4、吸收池：用于盛待测及参比溶液，可见光区∶光学玻璃池；紫外区卖虚：石英池。

5、检测器：利用光电效应，将光能转换成电流讯号，光电池，光电管，光电倍增管。

6、检流计：刻度显示或数字显示、自动扫描记录。

⑨ 紫外分光光度计的使用步骤是什么

仪器名称：紫外/可见分光光度计系统
使用方法：开机步骤
1 开光谱仪电源
2 开计算机电源
3 在文件管理器中用鼠标指按UV WinLab图标,此时出现UV WinLab的应用窗口,仪器已准备好,可选用适当方法进行分析操作.
2 方法：在分析中必须对分光光度计设定一些必要的参数,这些参数的组合就形成一个“方法”.Lambda系列UV WinLab软件预设四类常用方法.
1）扫描（SCAN）,用以进行光谱扫描.
2）时间驱动（TIME DRIVER）,用以观察一定时间内某种特定波长处纵坐标值的变化,如酶动力学.
3）波长编程（WP）用以在多个波长下测定样品在一定时间内的纵坐标值变化,并可以计算这些纵坐标值的差或比值.
4）浓度（CONC）用以建立标准曲线并测定浓度.
2.1 进入所需方法,在方法窗口中选择所需方法的文件名.
2.2 方法的设定
2.2.1 扫描、波长编程及时间驱动
各项方法可根据显示的参数表,逐项按需要选用或填入,并可参考提示.
2.2.2 浓度
浓度方法窗口下方标签较多,说明做浓度测定时需要参数较多.用鼠标指按每一标签,可翻出下页,其上有一些需要测定的参数.必须逐页设定.
3 工具条
3.1 SETUP
当所需的各项参数都已在参数中设好后,必须用鼠标指按SETUP,才能将仪器调整到所设状态.
3.2 AUTOZERO
用鼠标指按此键,分光光度计即进行调零（在光谱扫描中则进行基线校正）.
3.3 START
用鼠标指按此键,光度计即开始运行所设定的方法.
4 方法运行
4.1 扫描,时间驱动,波长编程
方法选好后,先放入参比溶液,按AUTOZERO键,进行自自动校零或背景校正结束后再放入样品,按START,分光光度计即开始进行,同时屏幕上出现图形窗口,将结果显示出来.
4.2 浓度
4.2.1制订标准曲线
1 方法选好后,确认各项数据正确,特别是REFS页中第一行要选中右上角的“edit mode”.再放入参比溶液,按AUTOZERO键自动校零或背景校正.
2 按setup,待该图标消失后,再按“start”,按提示依次放入标准色列的各管溶液,每次都按提示进行操作.
3 标准色列测定
完毕后,屏幕上出现calibgraphwindow,显示拟合的标准线,并标出各项标准管的位置,屏幕下方还有一条Concentration mode的对话框,可以用来修改拟合的曲线类型（按 change calbration）,或修改标准溶液的任何一管（replace）,或取消某一管（delete）,或增加标准溶液管数（add）.如过已经满意,则按analyse sample键,进入样品测定窗口.
4 标准曲线有关的各项数据,均在calibresultwindow中,可用鼠标将其调出观察.其中包括每个标准溶液的具体数据,标准曲线的回程方程式,相关系数,残差.
4.2.2样品浓度测定
4.2.2.1刚制定好的标准曲线接着进行样品浓度测定时
1 只需在concentration mode对话框按analyse sample键,进入样品测定窗口.
2 按设定的样品顺序放入各样品管,每次按提示进行操作.
3 屏幕上出现结果窗口,结果数据将依次显示在样品表中的相应位置.
4.2.2.2利用原有的标准曲线接着进行样品浓度测定时
4.2.2.2.1 调出所测定样品的浓度方法文件,首先调出refs页,将原设edit mode选项取消,改设左上角的using exiting
calibration.重新将方法存盘,则今后再调用时即不需再作修改.
4.2.2.2.2 在sample页中按要求重设各种样品名称机样品信息.
4.2.2.2.3 按工具条中setup键,将主机设到该方法所设定的条件.
4.2.2.2.4 将参比溶液放入比色室,按autozero键做背景校零.
4.2.2.2.5 按start键,按设定的样品顺序放入各样品管,每次按提示进行操作.
4.2.2.2.6 屏幕上出现结果窗口,结果数据将依次显示在样品表中相应位置.

⑩ 紫外光度法

方法提要

在紫外光谱区，硝酸根有强烈的吸收，其吸光度与硝酸根的浓度呈正比。在波长210～220nm处，可测量其吸光度。水中溶解的有机物在波长220nm及275nm处均有吸收，而硝酸根在275nm处没有吸收。这样，需在275nm处测定硝酸根的吸光度进行校正。

方法适用于地下水中硝酸根的测定。最佳测定范围为0.2～20mg/L。

仪器和装置

紫外分光光度计。

石英比色皿。

试剂

盐酸。

氨基磺酸铵溶液(50g/L)取5g氨基磺酸铵溶于100mL蒸馏水中。

硝酸根标准储备溶液ρ(NO^-₃)=100mg/L称取0.1631g在105～110℃滚梁烘干1h的硝酸钾(KNO₃)溶于蒸馏水中，定容至1000mL。

硝酸根标准溶液ρ(NO^-₃)=10.0mg/L分取10.0mL硝酸根标准储备溶液，以水稀释至l00mL容量瓶中。

校准曲线

分取含硝酸根0μg、10μg、20μg、50μg、100μg、…1000μg的硝酸根标准溶液(10mg/L)于一系列100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至50mL左右，加入1mLlmol/LHCl，摇匀。加入3～5mL氨基磺酸铵溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，于波长210nm处，用1cm石英比色杯，以试剂空白作参比，测量吸光度。歼掘以硝酸根含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。

分析步骤

取水样50.0mL于100mL容量瓶中，按校准曲线操作步骤进行测定。于210nm处测定后，调整波长至275nm，仍以试剂空白作参比，再一次测量吸光度。

按下式计算水样中硝酸根的质量浓度:

岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术

以硝酸盐氮表示的质量浓度:

岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术

式中:ρ(NO^-₃)为水样中硝酸根的质量浓度，mg/L;A_NO-3为减去有机物的吸收值后，从校准曲线(λ=210nm)上查得的硝酸根量，μg;V为所取水氏备核样体积，mL。0.226为硝酸根换算为氮的系数。