释放活性抗菌蛋白常用的方法

‘壹’ 对于含有蛋白质或抗生素等物质的液体,需采用的除菌方法是

巴氏消毒法、添加抗生素，或其它可行的方法。

对于含有蛋白质的液体，如果要保持蛋白质的活性，则应当采用温芦脊培和的消毒方式，野指例如巴氏消毒法、加入抗生素、适度辐照等。如果不考虑蛋白质的活性，或者蛋白质本身就应该失活，那么可采用高温高压消毒等。

对于含有抗生素的液体，应该加入其它类型的抑菌物质（例如液体中原本有喹诺酮类抗生素，可以再添加β-内酰胺类、大环内酯类抗生素等），可以让抗菌谱更广。当然也可以采用高温高压等方式。

在液体中加入苯酚、乙醇等方式陪唯消毒一般是不常用的，会极大地破坏液体本身的理化性质。

更多详细内容可参考周德庆编着的《微生物学教程》。

‘贰’ 蛋白药物生物学活性检测方法有哪些

一、MTT比色法检测细胞活性
（一）原理
活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。
（二）试剂准备
1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中,抽滤除菌。
2、L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠，10ml 100X青链霉素，5mlHEPES。
3、MTT液：5mg/ml溶于L15基础培养基。
4、SDS处理液：20gSDS，50μl二甲基甲酰胺，加双蒸水50ml溶解。
5、L-多聚赖氨酸：50μg溶于1ml双蒸水中。
6、L15基础培养基溶解的不同浓度的蛋白液。
（三）操作步骤（以背根神经节细胞培养为例）
1、无菌条件下取新生一天的SD大鼠背根神经节（DRG）。
2、镜下去除神经根和外膜，放入1ml 0.1%胶原酶中37℃消化30min，每5min摇匀一次。
3、洗去胶原酶，吹打分散后，接种于预先涂有L-多聚赖氨酸的96孔培养板中，每孔含100μl无血清L15培养基，细胞约800个。
4、实验组分别加入纯化的表达蛋白（分别以不同的蛋白浓度），阴性对照加入等体积表达蛋白的溶剂。
5、37℃ 5%CO2培养48hr后，每孔加入10μl MTT，37℃ 5%CO2孵育4hr。
6、加入100μl 20%的SDS处理液，37℃孵育20hr。
7、用EL×800微孔酶标仪测定OD570值，数据分析。

‘叁’ 科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。(1)分离该抗

‘肆’ 如果要分离一个抗菌蛋白需要哪些步骤啊

蛋白质的提取
准备试剂：异丙醇含0.3M盐酸胍的95%乙醇无水乙醇1%SDS。
操作步骤：
1.取沉淀DNA后剩余的上清，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml
TRIzol加1.5ml异丙醇，室温放置10分钟，2～8℃12000×g离心10分钟弃上陵敏清。
2.用含0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。每使用1mlTRIzol加2ml洗涤液，室温放置20分钟，2～8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。用2ml无水乙醇同样方尺晌枝法再洗一次。
3.真空抽干蛋白质沉淀5～10分钟，用1%SDS溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其完全溶解，不溶物2～8℃10000×g离心10分钟除去。分离得到的蛋白质样品可用于Western
Blot或-5至-20℃保存备用。
注意事项：
1.蛋白质沉淀可保存在含0.3M盐酸胍的95%乙醇或无水乙醇中2～8℃一个月以上或-5至-20℃一年谨差以上。
2.用0.1%
SDS在2～8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于Western
Blot。
常见问题分析：
得率低：
A.样品裂解或匀浆处理不彻底。
B.最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解。
蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻。
电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分。

‘伍’ 科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视．（1）分离该

（1）抗菌活性蛋白是一种蛋白质，可利用电泳法分离蛋白质的原理进行分离，其原理是根据蛋白质分子的电荷（带电情况）、大小胡羡及伍迅形状不同，在电场中的迁移速度不同而实现分离的，分子量越大，其迁移速度越快．
（2）金黄色葡萄球菌属于细菌，作为培养裤橘拍细菌的培养基，必须有碳源和氮源，牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供碳源和氮源．
（3）确定该蛋白质的抗菌效果，可以通过比较加入和未加入抗菌蛋白的培养基中菌落的数量来检验，若加入抗菌蛋白的培养基中菌落的数量少，说明该蛋白质的抗菌效果好．
（4）在微生物实验室，细菌培养常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法．实验结束后，对使用过的培养基应进行灭菌处理．
故答案：
（1）电荷（带电情况） 迁移速度
（2）碳源 氮源
（3）数量
（4）平板划线法 稀释涂布平板法（稀释混合平板法） 灭菌

‘陆’ 蛋白质活性的快速调节方法有哪些

虽然酶也是一种蛋白质，但是还是说酶的姿如改活性快速调节方法比较准确一些。一般可以通过调节pH和温度来快速调节酶活性。酶活性在最适pH和最适温度时处于最高，将pH和温度在最适值调高或者调低，都可以快速降低酶活性。
调节酶的浓度
酶浓度的调节主要有两种方式，一种是诱导或抑制剂的合成；一种是调节酶的降解。
调节酶的活性
激素通过与细胞膜或细胞内受体相结合而引起一系列生物学效应，以此来调节酶活性。
反馈抑制调节
许多小分子物质的合成是由一连串的反应组成的，催化此物质生成的第一步的酶，往往被它们的终端产物抑制。这种抑制叫反馈抑制(feedback inhibition)。例如由苏氨酸生物合成为异亮氨酸，要经过5步，反应第一步有苏氨酸脱氨酶(threonine deaminase)催化，当终产物异亮氨酸浓度达到足够水平时，该酶就被抑制，异亮氨酸结合到酶的一个调节部位上，通过可逆的别够作用对酶产生抑制。当异亮氨酸的浓度下降到一定程度，苏氨酸脱氨酶又将重新表现活性，从而又重新合成异亮氨酸。
抑制剂可调节
酶受大分子抑制剂或小分子物质抑制，从而影响活性。例如：大分子物质胰蛋白酶抑制剂，可以抑制胰蛋白酶的活性。小分子的抑制剂如一些反应产物：像1，3-二磷酸甘油酸变位酶的活性受到它的产物迹判2，3-二磷酸甘油酸的抑制，从而可对这一反橡亩应进行调节。
此外某些无机离子可对一些酶产生抑制，对另外一些酶产生激活，从而对酶活性起调节作用。酶活性也可受到大分子物质的调节，例如抗血友病因子可增强丝氨酸蛋白酶的活性，因此它可明显地促进血液凝固过程。
其他调节方式
通过别够调控、酶原的激活、酶的可逆共价修饰和同工酶来调节酶活性。

‘柒’ 除蛋白都有哪些方法

啤酒和酒精浓度高的饮料中的泡沫，其苦味成分中能去除脑内积聚的蛋白质“Aβ”。啤酒泡沫本身的苦味成分“异α-酸”能激活脑内的免疫细胞——“小神经胶质细胞”， 有除去Aβ的作用。服食过异α-酸饵料的老鼠和普通的老鼠相比，Aβ约减少5成，认知功能也得到提高。

(7)释放活性抗菌蛋白常用的方法扩展阅读：

引起尿蛋白的原因

肾小球性蛋白尿，无论是原发还是继抓肾小球损害，是临床上最常见的蛋白质。肾小球滤过膜有病变，基底膜增厚，孔隙增大，蛋白漏出增加，甚至分子量更大的球蛋白亦可漏出。

肾小管性蛋白尿 是指肾小球滤过正常，肾小管重吸收障碍，最常见各种原因引起的间质性肾炎，肾静脉血栓形成，肾动脉栓塞，重金属盐类中毒等。此类尿蛋白量较肾小球性蛋白量少。

肾组织性蛋白尿又称分泌性蛋白尿。肾小球滤过功能和肾小管重吸收功能均正常，由于尿液形成过程中，肾小管代谢产生的蛋白质渗入尿液中所致，如肾小管拌和远曲肾小管产生的Tamm-Horsfall蛋白以蛋白(一种大分子糖蛋白)，此种蛋白易形成管型和结石核心。

参考资料：人民网-啤酒苦味能有效预防老年痴呆症 可去除多余蛋白质