1. 封闭抗体包括哪些检查项目
封闭抗体在检查的时候要注意需要空腹仿缓,因为封闭抗体检查是需要抽血的,而且封闭抗体检查阳性的话就没有什么问题,这就是正常的。那么封闭抗体包括哪些检查项目?
因为很多朋友对于封闭抗体并不是特别了解,而且还有很多朋友应该都没有听说过,所以在进行检查的时候不知道要进行哪些项目的检查也是一件特别正常的事情,那么你知道封闭抗体检查包括什么项目吗?下面我们就带着这个疑问跟着我一起来看看问题的正确答案吧。
由于缺乏某种抗体,母体对胎儿的产生排斥,坦迹导致经常反复性地流产。流产的次数越多,医生基本会考虑是封闭抗体缺乏的原因。因此需要进行APLA的封闭抗体检测。我们可以通过细胞毒指数的数值来判断封闭抗体是阳性还是阴性。如果是封闭抗体阳性,数值会大于20%;如果是封闭抗体阴性,数值会小于20%。封闭抗体阴性代表患者是缺乏封闭抗体,需要考虑封闭抗体的治疗。这些都是医院通过抽血检验,采用不同的分析方法,分别是CDC和ELISA。CDC方法即淋巴细胞毒交叉试验。ELISA方法即酶联免疫法。ELISA检测结果可用眼睛直接观察,或者医院采用酶标仪自动分析。
目前封闭抗体的检查项目不是特别多,主要有5种,包括抗温B细胞抗体、抗冷B细胞抗体、抗TLX抗体、抗FC受体抗体,抗父体依赖性抗体。这是女性体内的特异性IGG抗体,主要的目的是为了阻止女性在怀孕以后,母亲的免疫系统对胚胎产生攻击。如果女性出现封闭抗体阴性,这时就会引起免疫性不孕,而且多见于反复多次流产,以及有过妊娠期高血压的女性。如果您已经进行了常规的孕前检测,阻断抗体应主要包括CD3、CD4、CD25、CD127、抗CD3-BE0、抗CD4-BE、抗CD25-BE、阻断效率41.4和阻断抗体抗独特型3.7。
很多的女性流产之后,医生都会建议她做封闭抗体治疗。但是很多女性关心的一个问题是,做封闭抗体花费大量的钱,那么封闭抗体成功率高吗?
首先,封闭抗体成功率相当高。使用合作伙伴的白细胞进行免疫治疗也可以有效地增加自然流产患者阻断抗体的水平。不仅如此,女性还有抗体阳性测试,怀孕条件和成功的怀孕。
其次,如果女性阻断抗体阴性且未接受任何免疫治疗,则出生成功率仅为10%至15%。然而,用封闭抗体治疗的妇女的成功率在75%到80%之间,尽管他们不能保证100%成功。
大家如果在几次流产之后,就要去做一下封闭抗体检查,这是必须要进行的一个步骤,否则生出的宝宝有可能就是不健康的,同时还要了解一下封闭抗体治疗方法。
对于这些患者,治疗的目标是诱导母体产生阻断性抗体。目前,白细胞免疫疗法用于从丈夫或健康第三方中提取50毫升静脉血。抗凝后,将白细胞悬浮并注入患者体内。如果在患者关闭抗体后发现治疗阶段为阳性,则可以安排妊娠并在怀孕期间的不同时间增强妊娠直至妊娠20周。另外,中医药具有悠久历史,疗效显着。苍术,当归,黄芪,黄芪等也可备信模诱导抗体介导的母体免疫耐受,并发挥保护轮胎的作用。
具体的做法是从丈夫的身体抽出一定量的外周血用于离心。将淋巴细胞分离并注射到妻子的前臂。每4周循环一次,怀孕前3-4次注射,检查阻断的抗体,如果阳性,可以计划怀孕,如果阻断抗体仍然阴性,则需要继续治疗,直到阻断抗体变为阳性为止,怀孕注射治疗3次。
2. HIV的检测步骤有哪些
艾滋病检测种类:血液试纸和唾液试纸两大类。
目前市场上的艾滋病试纸种类主要分为两大类,其中血液试纸主要包括雅培hiv试纸、爱康hiv试纸等。而唾液艾滋病试纸的种类就显得比较单调,其中使用最广泛的就是美国艾卫艾滋病检测试纸,深受很多的高危人群及恐艾症患者的青睐。
专家指出,自从第一例艾滋病毒被确诊以后,全球对于艾滋病毒的研究已经有30多年的历史,而在这些年中也确实取得了十分重大的突破,其中艾滋病试纸研发问世,其所提倡的艾滋病自测就为艾滋病毒的预防奠定了崭新的里程碑。据本站笔者了解得知,艾滋病试纸是一种使用胶体金免疫层析科技研发的新一代检测试剂,可检测血清或血浆标本中的HIV-1/2特有性抗体,从而准确的判断出患者体内是否含有艾滋病毒,进而了解该患者是否是艾滋病毒感染者。
艾滋病检测试纸优势多,不同艾滋病试纸准确率达99.99%
不同的艾滋病试纸在不同的情况下使用起来具有更高的准确性和方便性。但是这几种常见的HIV检测试纸使用起来主要有以下几个方面的优势:所有操作时间15分钟,所有的检测操作过程简便、出检测结果十分迅速又准确、而且全部都是自带质控对照,检测过程中还不需要使用附加药剂。值得一提的是,自己在家就能够独立完成所有的检测过程,并不再像过去那样一定要到专业的疾控中心检测,这样不但减轻了疑似感染者的心理折磨,而且还出检测结果快速高效,为感染者及时治疗争取了更多有利的时间。
据悉,要想准确知道检测结果,还需要注意的一个问题就是艾滋病检测的最佳时间,而国际上规定以高危发生的日期开始计算,2周后即可检测艾滋病病毒,以6周以后为准。而且如果在检测过程中要想更加准确了解结果,最好是一次性使用多种不同品牌的艾滋病试纸,注意准确率更高,几乎是100%。
3. 如果婴儿在感染病毒时,是需要到医院进行检查,那么病毒感染的检查方法有哪些
这取决于流行病学史、典型临床表现和实验室检查。 注意当地病毒性疾病的流行、接触史和疫苗接种史 病毒感染可由多种病毒引起,但临床表现包括全身中毒症状,如寒冷、发热、全身倦怠、厌食以及受影响组织和器官的炎症。 不同的受影响组织和器官可能会导致不同的症状。 此外,还应注意一些具有诊断意义的特殊体征,如麻疹患者的麻疹粘膜斑块(Koplik 's plaque),狂犬病患者的狂犬病体征等。 常规实验室试验表明,外周血白细胞一般减少到约3000~4000/l(微升),淋巴细胞增多 特异性IgM抗体的检测有助于早期和现阶段患者的诊断。 近年来,分子杂交和聚丙烯酰胺凝胶电泳在病毒疾病诊断中的应用不仅具有高灵敏度和特异性,而且可以诊断不同类型和菌株的病毒感染。 此外,单克隆抗体检测病毒抗原的应用也大大提高了诊断病毒疾病的敏感性和特异性,用于研究病毒抗原的结构。
4. 免疫性不孕要做哪些检查
免疫性不孕是怎么回事?这是不少女性朋友都很关心的问题。专家指出,免疫性不孕是女性不孕的原因之一,主要是由生殖系统抗原的自身免疫或同种免疫引起的不孕症。那么,免疫性不孕该怎么检查?下面,小编将为你详细介绍免疫性不孕要做哪些检查。专家指出,免疫性不孕也是女性比较常见的不孕种类之一,影响着不少女性的正常生活和生育,给不少女性造成了严重的困扰。很多女性朋友不明原因的不孕正是免疫性不孕,不少女性朋友也正在为免疫性不孕感到十分苦恼。专家指出,免疫性不孕的治疗,检查很重要。 一、免疫性不孕要做免疫学检查专家介绍说,女性免疫性不孕,要做免疫学检查,主要包括: 1、抗精子抗体的测定; 2、血型及抗血型抗体测定; 3、原发性与继发性流产的鉴别。 二、免疫性不孕要做特殊检查免疫性不孕要做特殊检查,主要包括以下几个方面:1、对于流产后妊娠物的病理解剖及细胞遗传学的研究;2、怀疑患自身免疫性疾病者要检测APA;3、激素的测定,主要包括雌激素和孕激素、绒毛膜促性腺激素等的定量检测; 4、对疑有遗传性疾病者,夫妇双方均应做染色体核型检查,或进一步做夫妇的家系遗传学调查和系谱绘制。
5. 免疫学的检测方法
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。
6. 临床医学免疫检验
临床医学免疫检验
【摘 要】本文主要对临床医学免疫检验做了细致的研究与探讨;文章开头首先介绍了临川免疫医学发展的历史以及现代临床检验免疫医学的进展银山情况。
其次,作者根据自身多年的临床免疫检验工作经验针对现阶段我国临床医学免疫检验环节存在的一些问题提出了自己的一些意见和解决方法。
最后对文章进行了总结。
【关键词】临床医学;免疫检验;历史;解决方法
1 引言
伴随着世界经济与学技术的蓬勃发展,医疗技术的发展在现当代取得了一系列举世瞩目的成就,就临床免疫学检验工作而言,已成为现代医院诊疗工中不可或缺的重要组成部分。
随着现代医疗诊断技术的不断发展,如何有效地对临床免疫检验的质量进行控制已直接影响到临床的诊断结果的准确性,同时也间接影响到最终地临床治疗效果。
由于在整个标本采集的过程中免疫检验标本从采集到结果的检验需经历的环节较多,这就对临床医师对患者的生理、病理情况以及争端方法的熟悉程度及综合技能提出了很高的要求;
2 临床免疫学检验的建立与发展
临床医学免疫检验自建立至今已经历了一百个春秋。
自从19世纪80年代后期开始,随着很多学者专家开始从免疫动物或者携带有传染病病毒的患者血清中发现有能够治愈患者疾病的特异性结合病原体或其一系列的衍生产物的`物质,而这些物质及为我们现在所熟识的抗体。
就现代医学理念来讲,将能够引起人体体内产生抗体的物质统称为抗原。
正是由于抗原以及抗体的发现,才促使现代医学专家学者开始对人类或动物体外抗原刺激体内反应产生抗体这一现象进行系统深入的研究。
随着免疫学理论以及分子生物学还有其它以现代科学技术为依托的新兴临床免疫学检验继能够有日新月异的发展。
3 提高临床免疫检验质量的方法
3.1标本采集与设备管理的优化
作为检验分析前对质量控制的要求来说,检验人员首先需要做到对标本的采集和保存工作;密切注意整个样本采集过程中的样本采集的时间、止血带的使用时间和方法、采血的姿势、抗凝剂和稳定剂的选用情况。
免疫检验工作,首先要求检验人员注意对整个标本的采集和处理工作。
不同的采样试验对所采集的标本的要求有所不同。
对于大多数以病人血清为标本的免疫检验而言,采集血清的时间应在清晨被采集者未进食前为宜,保持针筒锋巧中的干燥性,抽血完成后需要马上除去针头并将所采集到的血液注入到干燥的试管内,注意在整个注血过程中采样人员的注血速度不宜过快,不能对所采样本进行振摇等一系列不允许的动作,以防溶血。
在将整个血清分离完成后,应及时送往检测,如需要求对所采试样进行保存的话,可将试样置于冰箱内冷藏,不宜速冻,以防止因为反复冻融而对整个检验结果产生不良的影响。
作为对测定的血清标本的收集过程来说,激素类和治疗药物的使用要特别注意收集时间的变化以及检验人员体位的变化对整个测定结果的影响;其次,在采购人员对于相关仪器设备及试剂的选择方面也同样对整个测量结果有着十分大的影响;作为整个检验的执行者来说仪器设备性能的好坏将直接对检验结果的精确度造成非常大的影响。
在整个检测结束后要注意地成套仪器的保养和维护工作,工作人员要经常对温度计、水浴箱、酶标仪、稀释棒、恒温箱、吸量管、分光光度计等临床免疫检验的仪器设备进行核定、校正以及检查等工作,从而确保仪器设备的使用性能,减少实验过程中因为仪器所引起的误差,继而来保证检验结果准确性的目的,最终为意识的治疗及患者的康复提供最有用的保障。
宽神对于当今品鱼龙混杂,质量不一的试剂市场来说,慎重选择且经常对试剂性能进行有关试剂的检定工作是保证检验成功的重要因素。
3.2 提高技术人员的素质
人是整个免疫检验过程中的主体,是整个免疫检验过程中最积极、表现最为活跃的因素。
在免疫检验过程工作的所有环节,都需要靠人来对整个试验进行操作和把握,最终实现对整个临床免疫检验质量控制的目标。
因此,在整个临床免疫检测过程中检验技术人员的综合素质与业务能力会对整个免疫检验的质量和结果产生重大的影响。
因此,就要求临床免疫检验的工作人员要每天按时对相关检测设备进行消毒、搞好实验室的卫生;做好相关实验仪器的定期检查工作:如冰箱、恒温箱、水浴箱、酶标仪、荧光显微镜等,做好对整个实验仪器的记录使用情况,并如实填写实验报告,按规定进行免疫检验的质控工作,并分析情况做好记录,签字等工作。
4 临床免疫学检验与生物技术
以现代新型科学技术为依托的临床医学免疫检验技术的广泛应用,对现代免疫学研究的发展起了非常大的推动作用飞,其结果又在更深的层次以及更为广范的领域内促进了现代高新生物医疗技术产业的发展,能够使诸如细胞工程技术以及基因工程技术为代表的现代高科技技术得到更广泛应用。
近年来伴随着疫苗、基因工程抗体治疗以及重组细胞因子研制为主的生物工程制品产业有了蓬勃的发展,极大地推动了现代免疫学防治的开展,对许多传染性疾病的传播起到了强有力的遏制作用,从而为挽救更多的生命做出了巨大的贡献。
5 小结
因此,对于整个临床免疫检验的过程而言,对免疫检验做好全面的质量管理是确保整个临床免疫检验结果准确性的重要保证。
由于在对免疫检验标本进行采集到对标本进行检验的这个过程需经历很繁琐且比较复杂的一系列环节,因此,就要求临床医师必须要熟悉患者的生理、病理情况,同时,也要求护理人员及检验人员对临床免疫检验的各种影响因素要有全面系统的了解和认识,每一个环节的操作须做到规范化,完全按照标准进行,以确保免疫检验的可靠性和准确性,并提高临床治疗效果。
参考文献
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7. 细胞免疫功能检测常用有哪几种方法
细胞免疫(CMⅠ)是由多种细胞相互作用的结果。免疫细胞间相互作用导致多种细胞因子的释放。因此细胞功能测定不仅涉及T细胞的数量和功能与包括各类因子活性测定,因此评价机体的细胞免疫功能不仅程序复杂,且很难标准化。
一、迟发型过敏反应的体外检测方法
皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应(DTH)的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答,而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。
1.皮肤试验 用皮肤试验诊断DTH,常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物(PPD)、腮腺炎病毒、念珠菌素等,在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原,24~48小后,测量红肿硬结的大小,硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力,若皮试无反应,可用更高浓度的抗原重复试验,若仍无反应即为阴性,需排除皮试技术误差,也可能受试者从未接触过此抗原,也可能由于细胞免疫功能缺损,或由于细胞免疫功能缺损,或由于严重感染(麻疹、慢性播散性结核)造成的无反应性。
2.接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯(DNCB)诱生接触性过敏。化合物与皮肤蛋白质结合而导至DTH反应。在动物试验时,初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7~10天再激发刺激,则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。
二、细胞免疫的体外检测方法
体外检测淋巴细胞的数量和功能,最易采集的是血标本,首先需分离或纯化淋巴细胞,一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液,当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时,由于红细胞(1.092)、多形核白细胞(1.090)、淋巴细胞(1.070)的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞,其中淋巴细胞占80%,单核细胞占20%,淋巴细胞中T细胞占80%,B细胞占4%~10%,其作为非DT、非B细胞。
1.T细胞计数
(1)E花环法:人类T细胞表面有SRBC受体(CD2)能与SRBC结合形成玫瑰花环样结构,将经分层液分离现的RBM悬液与SRBC在含有血清的平衡盐水中混合,经37℃培养5~10分钟放4℃过夜,取细胞悬计数,外周血淋巴细胞中约70%~80%淋巴细胞结成花环即为T细胞。目前此方法已用来分离T细胞,而不用做T细胞计数。
(2)用单克隆抗体计数T细胞:将人的PBM分成三等份,分别用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的单克隆抗体作第一抗体与细胞结合,再用FITC标记的兔抗小鼠IgG抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色,在荧光显微镜下或流式细胞仪检测结果,在PBM中被CD3抗体染上荧光的细胞称为CD3 细胞即总T细胞。正常人在PBM中T细胞占70%~80%。正常人的CD4 细胞和CD8 细胞之和应与CD3 细胞数一致。CD4 细胞与CD8 细胞的比值正常人约为2/1而艾滋病患者则比值小于1.7。
2.T细胞活化试验 T细胞能被非特异的物质称为有丝分裂原所激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加,最图导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴细胞数,也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3HTdR)掺入正在分裂的淋巴细胞,用液闪测定仪检查掺入正在分裂的淋巴细胞,用液测量仪检查掺入的3H-TdR的多少确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用同位素,又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法,称为MTT检测法,MTT是一种甲氮唑盐,它是细胞线粒体脱氢酶的底物,细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色甲(fromazan)产物。该产物的多少与活性细胞数正相关。结果可用酶标检测仪(595mm)测量汇丰银行密度,做为MTT法的检查指标。此法的结果与3H-TdR掺入法平行,并能反应试验中的活细胞数。
3.细胞毒试验 TC细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞对其靶细胞有直接的细胞毒(杀伤)作用。常用的栓测细胞毒效应的方法是51Cr-Na2Cro4盐水溶液与靶细胞胞混合,于37℃培养1小时左右,51Cr即可进入靶细胞,与胞浆蛋白结合,洗去游离的51Cr后,即可得到51Cr标记的靶细胞,将待检细胞毒性的细胞与51Cr标记的靶细胞混合(比例约为50:1或100:1)靶细胞被杀伤越多,释放到上清液中的液游离的51Cr越多,且不能被其他细胞吸收。用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值,即可计算出待检细胞杀伤活性的高低。
细胞毒试验检测Tc细胞效应功能是否健全,及经IgG介导的ADCC效应,或NK细胞在抗肿瘤免疫中的作用是有意义的。
4.混合淋巴细胞的反应(MIR) 是体外研究T细胞的较好的方法,双向MLR常被用来筛选骨髓移植的供体。来自不同供体的淋巴细胞分别与病人的淋巴细胞混合培养4~5天,在最后8小时掺入51TdR掺入法测T细胞的反应性。或用细胞毒法观察受刺激的T细胞与活的靶细胞混合(靶细胞来自与刺激细胞相同的个体)如果T细胞受刺激后产生了细胞毒T细胞,可杀死活的细胞,根据靶细胞释放51Cr的多少算出T细胞移动抑制因子)和LIF(白细胞移动抑制因子)来评估细胞免疫功能。近年来应用测定IL-2的免疫酶技术,操作简单,并能定量以取代了MIF和LIF的测定。单个核细胞与分裂原一起培养24小时,然后测定清液中的IL-2活性。在细胞免疫功能缺损时,特别是AIDS病人,IL-2分泌明显降低。而有些疾病,如多发性硬化、类风湿关节炎、移植排斥反应等病人体内血清中IL-2水平升高,表明病人T细胞活性增高。发生移植排斥反应的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶联免疫吸附试验测定各种体液中活化的T细胞脱落的IL-2受体(CD25),一般来说IL-2的水平和IL-2受体水平是平行的,IL-2和IL-2受体的检测可用于对某些疾病的监测,如移杆排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治疗的病人。
对体外培养的细胞进行细胞因子产生能力检测是检查细胞培养上清液中细胞因子的生物活性或抗原性。现已可用核酸杂交技术,即从组织中或细胞中提取RNA,与同位素或酶标记的该种细胞因子的cDNA探针作分子杂交试验,即印迹(dot blotting)或Northern印迹,若查出有某种因子的mRNA存在,即说明该细胞在所处培养条件下有产生某种细胞因子的能力。
8. 山东省胸科医院的医疗设施
该院拥有德国产车载式数字化DR摄片系统、美国彩色多普勒超声诊断仪、德国移动式C型臂X线机、美国原装CT扫描系统、原装进口数字化胃肠机、美国进口数字化DR摄片系统、Abbott AxSYM plus全自动化学发光免疫分析仪、DR 、洁净手术室 、美国GE公司生产的高档8层螺旋CT机、Innova2000平板式全数字减影X光机、运动平板系统、动态血压监测仪、动态心电图、数字胃肠、腹部彩超、心脏彩超 、NIOX可移动式呼出一氧化氮测定系统(肺功能)、纤支镜、Stat Profile pHOx系列全自动血气分析仪等大型高端医疗设备,为提高临床诊断治疗水平创造了有利条件。
DR 介绍
DR即直接数字化X射线摄影系统(Digital Radiography)的英文简称,是由电子暗盒、扫描控制器、系统控制器、影像监示器等组成,是直接将X线光子通过电子暗盒转换为数字化图像,是一种广义上的直接数字化X线摄影。而狭义上的直接数字化摄影即DDR(DirectDigit Radiography),通常指采用平板探测器的影像直接转换技术的数字放射摄影,是真正意义上的直接数字化X射线摄影系统。
DR与CR的共同点都是将X线影像信息转化悉档嫌为数字影像信息,其曝光宽容度相对于普通的增感屏-胶片系统体现出某些优势:CR和DR由于采用数字技术,动态范围广,都有很宽的曝光宽容度,因而允许照相中的技术误差,即使在一些曝光条件难以掌握的部位,也能获得很好的图像;CR和DR可以根据临床需要进行各种图像后处理,如各种图像滤波,窗宽窗位调节、放大漫游、图像拼接以及距离、面积、密度测量等丰富的功能,为影像诊断中的细节观察、前后对比、定量分析提供技术支持。
通用Innova2000平板式全数字减影X光机介绍
Innova2000采用人类工业上第一个心脏数字化平板、不定型硅探测器,提供了一个全数字化影像链。通过在采集点将X光转变成数字信号。数字化探测器在典型的曝光整个过程中,用最小的丢失捕捉信息。它还能去除由传统的影像链产生的伪影和失真。Innova2000兼容任何DICOM(医学影像统一的信息标准),与任何DICOM网络图片无缝连接。
另外,Innova2000具有比传统设备大10倍的动态范围,使心脏专家能够看到难以看到的血管、导丝、导管和支架,另外它的数码技术可以使心脏专家看到异常清晰的血管。心脏病专家在介入治疗过程中,可以使用Innova2000更方便地观察和治疗冠状动脉的阻塞。
自2002年1月以来,Innova在全世界范围的心导管实验室里进行了近140万例诊断性介入手术。法国雅克.卡尔捷(JacquesCartier)入心脏病学会的心脏病学家,南巴黎心血管学会奠基人玛里-克劳德.莫里斯(MarieClaudeMorice)医生说:“GE的Innova2000使手术步骤加快,要求的曝光剂量明显减少,使我们能对细节看得更好。结果是更好的图象产生了,病人也得到了更好的照顾。”
通用电气医疗系统中国区总裁陈治说:“Innova2000采用GE最新的技睁手术结晶数字化探测器,不需要胶片、不需要影像增强器,它将为未来3-5年的X射线带来革命性的技术改革,并将增强心脏病专家诊断和介入治疗的蠢余信心。”
运动平板系统
运动平板系统是做心电图负荷试验的主要方式。心电图负荷试验是指通过运动或其他方法(如药物等)增加心脏的负荷,使心肌耗氧量增加,当负荷达到一定量时,冠状动脉狭窄病人的心肌供血不能相应增加,以诱发心肌缺血,并通过心电图检查结果显示出来,从而辅助冠心病、心肌缺血的诊断。
平板运动是一种分级运动,其运动量自小而大逐级增加,每级运动时间根据方案不同而不同,直至达到运动终点。
平板运动试验心电图的改变主要是ST段的变化,其检出率与所选用导联有关,常用的导联有:
(1)常规十二导联可获得较为完整的资料,心肌缺血的检出率较高.
(2)5导联监测法 只用标二、avf、V3-V6几个导联,主要检测下壁、前壁的心肌缺血。
运动平板的适应症:
(1)作为明确冠心病的辅助诊断检查方法。
(2)对已确诊的冠心病者,可以评估病情的的严重性与预后,即可筛选出高危患者,以便进行介入性治疗。
(3)对心肌梗塞患者出院前做平板运动检测可以预后诊断。
(4)平板运动试验可作为冠心病各种治疗的疗效判断的一个客观指标。
(5)可作为心功能的评定标准,作为客观地安排心脏病患者劳动力和心脏病患者体疗运动方案的依据。
另外,平板运动检测系统使受检者的运动进程及运动负荷量均受到人为控制,且重复性好,因而得到国内外医疗机构的广泛应用。运动平板试验达到的最大耗氧能力较高,且容易达到预计最大心率。另外在平板运动试验中同时进行心肺功能的监测,更能客观的反映心肺储备能力。
由于心电信息变化的多样性和复杂性,单纯的的体表心电图已不可能完整的、准确的反映心肌每个部位的病理生理变化。进一步开展运动试验与冠状动脉病变的相关性的研究,是非常必要的。
ABBOTTAXSYMPlus全自动化学发光免疫分析仪
ABBOTTAXSYMPlus全自动化学发光免疫分析仪是当今国内外最新最先进的临床免疫技术的集中体现,该设备同时采用四种专利测试原理和多项雅培独创的专利技术,根据待测物的不同灵活选择不同的分析技术、分析步骤和分析过程,以达到最佳的检测效果、最高的检测精度、最快的检测速度,是继放免、酶免、普通的化学发光技术之后的新一代标记免疫分析技术。检测的灵敏度高,可达pg(皮克)水平;检测速度快,从上机到出第一个结果的时间最快仅需10分钟,大大节省病人等结果时间;检测范围宽,可达6个数量级;其全部项目的试剂均通过美国FDA认证,结果准确可靠。无论是在速度、精度、灵敏度,还是在检测范围和特异性等方面,放免(RIA,核医学/同位素)等落后的方法都无法与化学发光免疫相比。
9. 免疫检测方法
免疫检测方法大全2017
免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测,对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对各种免疫学现象的研究,而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。本章仅介绍常用免疫学检测方法的原理,简要过程和实用意义。下面是我为大家带来的关于免疫学检测法的知识,欢迎阅读。
第一节抗原或抗体的检测
一、检测的原理
借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象,对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。
1.抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合,激素与其受体的结合一样不是化学的反应,而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型,造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同,抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高,则亲和力强。此外,反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响,抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强,即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。
2.抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点,对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单,即用已知的抗体和待检样品混合,经过一段时间,若有免疫复合物形成的现象发生,就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生,则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
对抗原或抗体进行定量检测时,以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。
(1)根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原(或抗体)的含量:在一定的反应条件下,加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定,反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。也就是抗体浓度一定时,免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体)的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。
(2)抗原或抗体效价滴定的原理:当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时,就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中,把浓度低的反应成分(抗原或抗体)的浓度固定,把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔,比较3只家兔产生抗体的多少,即滴定3只兔血清抗体效价,可用双向琼脂扩散法来滴定,例如将抗体浓度固定,将抗原作不同的稀释度,分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中,观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/2000,而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高)。也就是表示效价的稀释度越高,样品中所含待检成分越多。因人血清(抗原)和抗体(免疫兔血清)相比,浓度高,故应稀释抗原。
二、抗原或抗体检测的实用意义
1.抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体,对有关疾病的诊断有重要意义。
2.抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类:
(1)各种微生物及其大分子产物:用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。
(2)生物体内各种大分子物质:包括各种血清蛋白(如各类免疫球蛋白、补体的各种成分)、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。
(3)人和动物细胞的表面分子:包括细胞表面各种分化抗原(如CD抗原)、同种异型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究,均有重要意义。
(4)各种半抗原物质:某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原,可以分别将它们偶联到大分子的载体上,组成人工结合的完全抗原。用其免疫动物,制备出各种半抗原的抗体,应用于各种半抗原物质的检测,例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。对运动员进行服用违禁药品的检测,都是应用半抗原检测的方法。
三、抗原或抗体检测的方法
由于各种检测方法中所用的抗原性状不同,出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种:
(一)沉淀反应
可溶性抗原与抗体结合,在两者比例合适时,可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物,这种抗原抗体反应称为沉淀反应(precipitation neaction)。
1.环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0.5cm的小试管底部。将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上,让抗原与抗体在两液体的界面相遇,形成白色免疫复合物沉淀环,故名为环状沉淀试验(ring precipitationtest),此法简便易行,需用材料较多是其缺点。
2.单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验(single immunodiffusion)是在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中,倾注于玻片上,制成含有抗体的琼脂板,在适当位置打孔,将抗原材料加入琼脂板的小孔内,让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散,与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散,出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便,易于观察结果,可测定抗原的灵敏度(最低浓度)约为10~20μg/ml,常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA和C3等,其缺点是需1~2天才能看结果
3.免疫比浊法 当抗体浓度高,加入少量可溶性抗原,即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物,它可使通过液体的光束发生散射,随着加入抗原增多,形成的免疫复合物也增多,光散射现象也相应加强。免疫比浊法(immunonephelomytry)就是在一定的抗体浓度下,加入一定体积的样品,经过一段时间,用光散射浊度计(nephelometry)测量反应液体的浊度,来推算样品中的抗原含量。本法敏感、快速简便,可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。
4,双向免疫扩散试验 双免疫扩散试验(double immunodiffusion)是在琼脂板上按一定距离打数个小孔,在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散,在两孔间可出现2~3条沉淀线,本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测,或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。
5.对流免疫电泳对流电泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的检测方法,即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内,使琼脂板的两孔沿着电场的方向,于负极侧的孔内加入抗原,于正极侧的孔内加入抗体,通电后,抗原带负电荷向正极泳动,抗体分子虽也带负电荷,但因分子量大,向正极的位移小,而受琼脂中电渗作用向负极移动,抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。
6.免疫电泳 免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤,即先进行电泳,再进行琼脂扩散。先将样品加入琼脂中电泳,将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽,于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液,让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散,可形成多答卷沉淀线。常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义
7.免疫印迹法免疫印迹法(immunoblotting)又称为Western印迹法,用于AIDS的血清抗体检测。第一步,为电泳分离HIV抗原,在电场中根据分子量大小不同病毒抗原各成分散开。第二步,将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上(电印迹),然后将印迹有病毒抗原的硝酸纤维膜浸湿于病人血清中。如果病人血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话,则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗体后,在膜上加标记的抗人免疫球蛋白的抗体,此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应,最后加入显色底物(如果抗人Ig是用酶标记的)或做放射自显影(抗人Ig用125Ⅰ标记)以显示结果
第一步:经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离;
第二步:将已分离的抗原经电印迹转移到硝酸纤维膜上;
第三步:将待检病人血清加入覆盖于硝酸纤维膜上;
第四步:加入标记的第二抗体使之覆盖膜上;
第五步:加入显色底物(或放射自显影)显现第二抗体
(二)凝集反应
细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原,当与相应抗体结合,抗原与抗体结合形成凝集团块,即称为凝集反应(agglutination)。
1.直接凝集 直接凝集(direct agglutination)是将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。可用于传染病诊断如肥达氏反应(Widal reaction)诊断伤寒病。或利用血细胞凝集现象检查血型。
2.间接凝集 间接凝集(indirect agglutination)是用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面,与相应抗体混合出现的凝集现象。如用γ球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子,用甲状腺球蛋白包被乳胶颗粒用于检测甲状腺球蛋的抗体。也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床标本中的抗原,如细菌或真菌性脑膜炎抗体包被的乳颗粒,一旦与含有相应抗原的脑脊液混合,便可发生凝集,可进行快速诊断。故凝集反应即可测定抗原,也可测抗体,方法简便、敏感。
3.抗球蛋白试验 抗球蛋白试验(antiglobulin test,coombs test)的原理为间接凝集试验。例如应用于诊断自身免疫溶血性贫血症时,Rh+红细胞与抗Rh血清间的反应。因抗Rh抗体是IgG只有两个结合价,分子较小(不如IgM结合价多,分子大)很难直接引起Rh+红细胞凝集。如果加入抗IgG的抗体,就可帮助抗Rh的IgG的抗体凝集红细胞。也就是经抗Ig的作用提高凝集反应的'灵敏度。
(三)补体参与抗原抗体反应
这一类反应主要包括溶血反应(hemolytic assay)、补体介导的细胞毒试验(complement mediated cytotoxicuty test)及补体结合试验(complement fixation test)。
1.溶血反应 抗体与红细胞表面抗原相遇,形成红细胞-抗体复合物即可使加入反应中的补体活化,导致红细胞溶解,此方法可用于红细胞的各种抗原或相应抗体的检测,此法比凝集反应敏感。溶血反应也是用于抗体分泌细胞即空斑形成细胞(PFC)检测的原理。
2.补体介导的细胞毒试验各种有核细胞与针对其表面抗原的抗体相遇,所形成的免疫复合物能活化反应中的补体,引起细胞膜穿孔,在一定时间内,细胞仍能维持一定的形态不破碎,加入水溶性染如伊红Y(eosin Y)或台盼蓝(trypan blue)后,染料即可进入被活化补体穿孔的细胞,不带相应抗原细胞膜保持完整的活细胞不着色。此方法可用于带各种抗原的细胞的检测,如进行细胞MHC抗原的鉴定,和进行淋巴细胞中T细胞总数或其亚类的计数。在一些免疫学实验中也可用这种方法,根据需要特异地消除带某种抗原的细胞。
3.补体结合试验当抗原(可溶性或颗粒性)与相应抗体结合,由于浓度低不出现可见反应时,应用补体结合试验可检出此抗原抗体反应,它比凝集反应或沉淀反应灵敏度高。本法包括两个抗原抗体系统。一为检测系统由待检样品与已知抗原(或抗体)组成;另一为指示系统,由绵羊红细胞(SRBC)和抗SRBC组成。另加入作为补体的新鲜豚鼠血清。试验时试管中先加入检测系统和补体,混合经37℃30分钟使抗原、抗体、补体形成复合物,再加入指示系统,如出现溶血现象,说明检测系统中没有相对应的抗原抗体,补体是游离的指示系统的SRBC和抗体结合而出现溶血,即为反应阴性。如不出现溶血,表明检测系统中有抗原抗体复合物并结合补体,则指示系统无多余的补体作用而没有溶血现象,即为阳性。
在敏感的抗原、抗体检测方法(如酶标方法)出现之前补体结合试验曾广泛用于检测各种细菌、病毒或螺旋体(如梅毒)的抗原或抗体,由于本试验影响因素多,结果不稳定现已被新检测方法所代替。
四、用标记抗体或抗原进行的抗原、抗体反应
用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原,用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的标记物与抗原或抗体化学连接之后不改变后者的免疫特性。本方法可用于定性、定量或定位检测。
1.免疫荧光技术免疫荧光技术(immunofluorescence techni)是用化学方法使荧光素标记的抗体(或抗原)与组织或细胞中的相应抗原(或抗体)结合,进行定性定位检查抗原或抗体的方法。
(1)直接荧光法:把荧光抗体加到待检的细胞悬液,细胞涂片或组织切片上进行染色,经抗原抗体反应后,洗去未结合的荧光抗体,将待检标本在荧光显微镜下观察,有荧光的部位即有相应抗原存在,此法可用于病毒感染细胞、带某种特异抗原的细胞(如T细胞和B细胞)或病原菌的检查,也可用于组织中沉着的免疫复合物的检查。本法的缺点是检查多种抗原,就需分别制备相应的多种标记抗体。
(2)间接荧光法:可克服直接法需制备多种荧光抗体的复杂操作。将组织或细胞上的抗原直接与相应抗体(不标记荧光)结合,此为第一抗体,再把能与第一抗体特异结合的荧光标记的抗免疫球蛋白抗体加入,此为荧光标记的第二抗体,观察结果与直接法相同。间接法比直接法敏感性高,如果用于检查抗原的第一抗体是人或动物的只需制备一种抗人或动物的免疫球蛋白荧光抗体
免疫荧光技术在传染病诊断上有广泛的用途,如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病,检查抗原或抗体,如查出IgM抗体,可做为近期接触抗原的标志,所以使用荧光标记抗IgM可诊断近期感染。除微生物学方面的应用外,还可利用单克隆抗体鉴定淋巴细胞的亚类。使用流式细胞仪(fluorescene-activated cell sorting,FACS),能自动检测细胞的大小、荧光强度。针对细胞表面不同抗原,可以使用两种不同的荧光染料,如用异硫氰荧光素(FITC)发黄绿荧光,用罗丹明(TMRITC)发红色荧光。由于荧光颜色不同标记两种不同的抗体,对同一细胞进行双标记染色。对淋巴细胞亚类鉴定起着巨大推动作用。应用间接荧光法也用于自身免疫病的抗核抗体检查。
2.放射免疫分析法 放射免疫分析法(radioimmunoassay RIA)应用竞争性结合的原理,应作放射性同素标记抗原(或抗体)与相应抗体(或抗原)结合,通过测定抗原抗体结合物的放射活性判断结果,本方法可进行超微量分析,敏感性高,可用于测定抗原、抗体、抗原抗体复合物。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。
放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种:
(1)液相法:将待检标本(例如含胰岛素抗原)与定时的同位素标记的胰岛素(抗原)和定时的抗胰岛素抗体混合,经一定作用时间后,分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原,测定这两部分的放射活性,计算结合率。在反应系统中,待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争夺战性与胰岛素抗体结合。非标记的抗原越多,标记抗原与抗体形成的复合物越少。非标记抗原含量与标记抗原抗体复合物的量呈一定的函数关系。预先用标准的非标记抗原作成标准曲线后,即可查出待检标本中胰岛素的含量
(2)固相法:将抗原或抗体吸附到固相载体表面,然后加待检标本,最后加标记抗体。测定固相载体的放射活性,常用的固相载体有溴化氰(CNBr)海豹化的纸片或聚苯乙烯小管
放射免疫分析法应用范围广泛,包括多种激素(胰岛素、生长激素、甲状腺素等)维生素、药物、IgE等。
3.酶联免疫分析法 酶联免疫分析法(enzyme immunoassay,EIA)是当前应用最广泛的免疫检测方法。本法将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来,根据酶作用底物后显色,以颜色变化判断试验结果,可经酶标测定仪作定量分析,敏感度可达ng水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)、碱性磷酶(alkaline phosphatase)等。它们与抗体结合不影响抗体活性。这些酶具有一定的稳定性,制成酶标抗体可保存较长时间。目前常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原;后者主要测定可溶性抗原或抗体。本法既没有放射性污染又不需昂贵的测试仪器,所以较放射免疫分析法更易推广。
(1)酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是与上述固相RIA相似的原理,将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行政区。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。
(2)夹心法(sandwich assay):将已知的特异抗体包装在固相载体(塑料板凹孔或纸片上),加入待检标本,标本中的抗原即可与载体上的抗原结合,洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体,洗去未结合的酶标抗体,加底物显色,用酶免疫检测仪测量颜色的光密度,可定量测定抗原。
间接法(indirecr ELISA)常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体,加入待检标本(可能含有相应抗体),再加入酶标抗Ig的抗全(即第二抗体),经加底物显色后,根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。
(3)BAS-ELISA:近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂,组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素(avidin)分子可以结合4个生物素分子(biotin)。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合,而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子,通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统(biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA),它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统,同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。
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