基因工程水稻最常用的转化方法

‘壹’ 基因工程中转化的方法有哪些

转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表现型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。

化学法(化学药物如氯化钙等)转化
氯化钙法转化细胞 细菌处于0℃及CaCl2低渗溶液中时,菌细胞膨胀成球形.转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物。

直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”

具体做法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别载人不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫扩增）,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。但这种方法工作量大,具有一定的盲目性。20世纪80年代以后,随着DNA核苷酸序列分析技术的发展,人们已经可以通过DNA序列自动测序仪对提取出的基因进行核苷酸序列分析,并且通过一种扩增DNA的新技术（也叫PCR技术）,使目的基因片段在短时间内成百万倍地扩增。上述新技术的出现大大简化了基因工程的操作技术。

‘贰’ 植物转基因工程的基本过程是怎样的

您这题目太大了.
几种常用的植物转基因方法
BIOX.CN 2005-5-19 16:54:41 来源：生命经纬
遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养再生植株可分成两大类,第一类据要通过组织培养再生植株,常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类不需要通过组织培养,目前比较成熟的主要有帆悄花粉管通道法.
1农杆菌介导转化法
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双于叶植氏昌物的受伤部位,并诱导产生冠痪瘤或发状根.根想农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T—DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T—DNA插入到植物基因组中.因此,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系.人们将目的基因插入到经过改造的T—DNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合,然后通过细胞和组织培养技术,再生出转基因植株.农杆菌介导法态核渣起初只被用于双于叶植物中,近年来,农杆菌介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用.
2基因枪介导转化法
利用火药爆炸或高压气体加速(这一加速设备被称为基因枪),将包裹了带目的基因的
DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中,然后通过细脑和组织培养技术,再生出植株,选出其中转基因阳性植株即为转基因植株.与农杆菌转化相比,基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制.而且其载体质粒的构建也相对简单,因此也是目前转基因研究中应用较为广泛的一种方法.
3花粉管通道法
在授粉后向于房注射含目的基因的DNA溶液,利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并进一步地被整合到受体细胞的基因组中,随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体.该方法于印年代初期由我国学者周光字提出,我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的.该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株,技术简单,不需要装备精良的实验室,常规育种工作者易于掌握.

‘叁’ 可以在水稻原生质体里转化的载体需要满足什么条件

水稻原生质体分离与转化方法

（储成才 课题组 2014-01-20）

【概述】原生质体是一种非常好的瞬时表达系统，现在已被广泛应用于植物生理生化和分子机制的研究，包括细胞信号转导过程，离子转运，细胞壁合成，蛋白质分泌以及细胞程序化死亡等生物学过程。现在已有的基于原生质体的实验技术包括亚细胞定位，基因瞬时表达分析，启动子活性分析，离子吸收实验以及蛋白质相互作用验证（如BiFC和蛋白质免疫共沉淀）等。本文主要阐述如何利用原生质体进行亚细胞定位，包括原生质体的制备与转化，定位载体的选择，共定位蛋白参照的游链介绍，荧光蛋白的性质和波长选择等问题。

一、实验的前期准备：

1. 水稻材料：将露白的水稻种子(中花11或者日本晴均可)整齐的播种在营养土（最好混有蛭石，营养土与蛭石的比例为1:1）中，放在温室生长14-21天。或者放在96孔PCR板上，萌发两天后，换成1×木村营养液培养7-10天。注意如果采用水培苗必须每天更换营养液，否则水培苗纤维化程度较高，叶鞘部分不够肥厚，且不容易被酶液消化。制备一次原生质体需要50-60棵水稻幼苗，可供转化质粒5-8个。

2. 质粒制备：转化原生质体对质粒的质量要求比较高，需要使用试剂盒大量提取。通常大量提取一次需要100 mL菌液，使用Qiagen中量提取试剂盒可获得100-150 μg的高纯度无内毒素的质粒。质粒提取完毕后需要定量，通常将质粒稀释到 2 μg/μL，一次原生质体转化需要5-10μg质粒。

二、试剂和耗材：

1. 耗材：耗材准备如下表所示。

50 mL 蓝口瓶 1 否 用于配制酶液

250 mL 三角瓶 2 是 用于盛放酶液和过滤原生质体

A4打印纸 4-10 否 暂时盛放刀片切下的叶鞘薄片

玻璃板 1 否 避免刀片划伤实验台

50 mL Nalgen圆底有机玻璃管 2 是 用于离心收集原生质体

2 mL离心管 6-10 是 用于原生质体转化

双面刀片 8 否 用于切水稻茎和叶鞘

0.22 μm滤膜 2-3 否 用于过滤酶液

细胞培养板 1 否 用于培养转化的原生质体

2. 试剂准备：

(1) Enzyme solution

0.6 M D-Mannitol (M=182.17) 2.74 g 5.47 g 10.93 g

10 mM MES (M=195.24, pH=5.7) 0.0487 g 0.0975 g 0.195 g

1.5% Cellulase R-10（w/v, Yakult）0.375 g 0.75 g 1.5 g

0.75% Macerozyme（w/v, Yakult）0.1875 g 0.375 g 0.75 g

D-Mannitol 和MES 在常温储存，Cellulase R-10和Macerozyme R-10在4度冰箱储存。用1M KOH 调pH 至5.7，然后65℃水浴10min ，过0.22μM 滤膜除菌至宏磨首无菌三角瓶中（注意pH 值一定要准确，否则将极大的影响原生质体的制备效率。Cellulase R-10可以用Cellulase RS 代替，但是Cellulase RS 的最适pH 大约为6.0左右）。待酶液冷却至室温后，加入如下试剂： 0.1% BSA

0.025 g 0.05 g 0.1 g 3.4 mM CaCl 2 (M=110.99) 0.0095 g 0.019 g 0.038 g 50 mM β-ME (14.3 M) 8.75 μL 17.5 μL 35 μL

50 μg/ml Carbenicillin

1.25 mg

2.5 mg

5 mg

(CaCl 2可配制1M CaCl 2，然后加入85 μL/ 25 mL ，Carbenicillin 配制50 mg/ mL 的母液)。 (2) W5 Solution 154 mM NaCl (M=58.44) 0.9 g 1.8 g 3.6 g 125 mM CaCl 2 (M=110.99) 1.39 g 2.78 5.56g 5 mM KCl (M=74.55)

0.037 g 0.074 g 0.148 g 2 mM MES (M=195.24, pH=5.7)

0.039 g

0.078 g

0.156 g

用1M KOH 调pH 至5.7 , 121℃灭蔽数菌20 min 。 (3) MMg Solution 0.6 M D-Mannitol (M=182.17) 10.93 g 15 mM MgCl 2 (M=95.22) 0.143 g 4 mM MES (M=195.24, pH=5.7)

0.078 g

用1M KOH 调pH 至5.7 , 121℃灭菌20 min 。 (4) 40% PEG Solution 0.6 M D-Mannitol 0.546 g

10.93 g 100 mM CaCl 2

0.5 mL (1M CaCl 2) 1.11

g 40% (v/v) PEG 4000 (Fluka, Sigma-Aldrich )

2 g (体积约等于1.75 mL)

40 g

Tips ：由于PEG 吸水后体积会膨胀，所以必须在定容前给PEG 留出一部分体积。配制该

溶液时先溶解D-Mannitol 和CaCl 2后，再加入PEG ，65℃水浴加热10min 至完全溶解后，再定容到最终体积。

三、实验步骤

1. 原生质体制备：

(1) 预先配制0.6 M D-Mannitol 溶液100 mL 。

(2) 将培养的水稻苗从茎基部截断后，用刀片切成0.5 mm 薄片，每次4-5颗苗/1个刀片(茎部比较好，叶片的细胞比较小，去除衰老的叶鞘)。将切好的水稻细条迅速转移入0.6 M D-Mannitol 溶液中，在常温下60-80 rpm 培养30 min 。

(3) 用神奇滤布（Miracloth）过滤后，再药匙将滤布上的水稻薄片转移入含有酶液的250 mL 三角瓶中（三角瓶需用锡箔纸包住，避免见光）。放入28℃摇床，在黑暗条件下60-80 rpm酶解4-5 h。

Tips：以上步骤为节省时间，也可以直接将切好的水稻薄片转移入酶液中进行酶解。如果不经过0.6 M Mannitol质壁分离预处理的，则需抽真空半小时（15 mmHg）。

(4) 取10 μL在光学显微镜下观察原生体的完整性，健康的原生质体为边缘清晰的圆形游离态。

(5) 加入与酶液等体积的W5 Solution，用力摇晃15 s，充分释放原生质体。

(6) 用W5 Solution润洗灭菌过的网筛(35 μm, 100目), 将酶解的原生质体通过网筛，过滤到新的250 mL三角瓶中。再用少量W5 Solution冲洗网筛，充分洗脱网筛上的原生质体，并将其全部转入250 mL三角瓶中。

(7) 将三角瓶中的原生质体分装到两个50 mL透明离心管中，水平转子450 g（大约1500 rpm）离心3 min（注意调整升降速为3），小心去除上清。

(8) 加入15 mL W5 Solution重悬原生质体，并于450 g 离心3 min。小心去除上清后，重悬原生质体于1 mL MMg Solution中，使细胞的终浓度为1-5×106 cell/mL。

2. 原生质体转化：

(1) 在2 mL离心管中加入5-10 μg 质粒，再加入100 μL制备好的原生质体，并轻柔地吸打混匀。

(2) 加入110 μL 40% PEG，并迅速轻柔混匀，勿使原生质体成团。

(3) 置于28 ℃水浴15 min，加入1.8 mL W5 Solution重悬，并终止反应。

(4) 将2 mL离心管套在10 mL离心管中，水平转子450 g离心3 min。

(5) 用移液器小心吸除上清后，重悬原生质体于750 μL W5 Solution中。

(6) 转移原生质体到12孔细胞培养板里，用封口膜包好后，于28℃避光培养12-16h。Tips：原生质体的转化体系一定要按比例放大，否则PEG浓度的改变会导致转化效率的降低。用于Co-localization和BiFC等共转化实验需要的质粒要更多更纯。

四、亚细胞定位以及BiFC的载体信息

1. 用于亚细胞定位的载体有：

pCAMBIA2300-35S-EGFP(N)：EGFP融合于目的蛋白N端。可用来做瞬时表达和稳定表达。pCAMBIA2300-35S-EGFP(C)：EGFP 融合于目的蛋白C端。可用来做瞬时表达和稳定表达。(这两个载体可用于稳定转化水稻、拟南芥和烟草，注意农杆菌分别对应AGL1和GV3101。) pUC-35S-EGFP(Modified): eGFP融合于目的蛋白N端。仅可用来瞬时表达。

pSAT6-EYFP-C1(35S,CD3-1103)：eGYP融合于目的蛋白N端。仅可用来瞬时表达。

pSAT6-EYFP-N1(35S,CD3-1104)：eGYP融合于目的蛋白C端。仅可用来瞬时表达。

2. 用于BiFC的载体有（双分子荧光互补的载体是成对的）：

pSPYNE173和pSPYCE（M）：分离的EYFP融合于目的蛋白的C端，用于瞬时表达。pSCYNE和pSCYCE：分离的CFP融合于目的蛋白的C端，用于瞬时表达。

pVYNE和pVYCE：分离的Venus融合于目的蛋白的C端，用于瞬时表达和稳定表达。pVYNE(R)和pVYCE(R)：分离的Venus融合于目的蛋白的N端，用于瞬时表达和稳定表达。Tips：在转化原生质体时，应当尽量采用 ~4.5 kb的质粒。越小的质粒转化效率越高，蛋白荧光越强。

五、共定位蛋白参照

我们实验室现有的共定位蛋白参照如下：

Endoplasmic reticulum ER-RFP（RFP-HDEL） Unknown Golgi Golgi-RFP（SialT-RFP） Unknown

Tonoplast Alpha-TIP-RFP

Gamma-TIP-RFP

Delta-TIP-RFP At1g73190 At2g36830 At3g16240

Chloroplast RbcS-EGFP Os12g0291100 Nuclear OsbZIP52-mRFP Os06g0662200

此外，还有一些共定位蛋白参照可以参考：

Chloroplast OsRbcS Os12g0292400 Chloroplast OsRbcA Os11g0707000 Mitochondrion OsRpl6-2 Os08g0484301 Mitochondrion OsAtpC Os07g0513000 Nuclear OsSRT1 Os04g0271000 Golgi Golgi-mCherry（Man49-mCherry）Unknown

Golgi OsNST1 Os02g0614100 Endoplasmic reticulum DEP2 Os07g0616000

六、荧光蛋白的基本特性

目前，常用的一些荧光蛋白的基本性质总结如下：

Aequorea FP derivatives (水

母来源的荧光蛋白)

Cyan (CFP) 433/452 475/505 Monomer/weak

dimer

Cerulean 433 475 Monomer/weak

dimer Enhanced green (eGFP) 488 506 Monomer/weak

dimer Enhanced yellow (eYFP) 514 527 Monomer/weak dimer

Venus 515 528 Monomer/weak

dimer Citrine 516 529 Monomer/weak

dimer Anthozoa FP derivatives (珊

瑚来源的荧光蛋白)

mOrange 548 562 Monomer

Red (RFP) 555 584 M

‘肆’ 什么是转基因水稻

将一段仿伍凳目标基因用载体连接，通过农橘清杆菌或者花备旅粉管导入法（这两种最常用）导入水稻中，使其获得目标性状。转入的这段基因可以是水稻的，也可以是其他植物的，甚至可以是微生物的。比如，转基因抗虫棉就是将苏云金芽孢杆菌中一段编码杀虫晶体蛋白的基因导入棉花中，使棉花获得了产生这种对棉铃虫有毒的蛋白的功能，于是就成为抗棉铃虫的优秀品种了。所有的转基因作物大都是这样了。

‘伍’ 基因工程中单子叶植物不是不能用农杆菌转化法的吗为什么水稻都能用呢

由于单子塌塌卜叶植物不是农杆菌的天然宿主，曾经认为农杆菌介导法不适合禾谷类植物等单子叶植物的遗传转化
但是随着农杆菌侵染机理研究的深入，采用相应的技术措施，农杆菌介导禾谷类等单子叶植物基因转化已经获得成功。其实早在1990年水稻的农杆菌介导法转化就获得过转基因植株（见Raineri的论文）。1997年小麦的农杆菌介导法成功。除了禾谷类作物外，其他衫颤单子叶植物也获得了成功。如吊兰，水仙等
到目前为止，已有约7科20多种单子叶植物利用农杆菌介导法转化成功
但是与双子叶植物相比，农杆菌侵染单子叶植物能力较差，转化率低，转化的外源基因表达水平低。因此人们还在不断改进Vir区的基因表达，感受态细胞选择等方面改进农杆菌介导法。
我们实验室一直在进行的百合转基因至今没有成功。所以说并不是说农杆菌介团穗导法无法转化单子叶植物。

‘陆’ 根据基因工程的原理构建转基因水稻

1.克隆植酸酶基因，构建到植物表达载体上，转入农杆菌，侵染水稻愈伤组织；愈伤组织会长成第一链塌代阳性水稻苗，再收集第二代种子或者第三代种子，根据形状分离比，得到最终的纯合的阳性苗。
2.把大豆塌租铁蛋白基因用Glu-B1启动子来启动表达。
3.方法1：直接把柚苷酶的基因转入柑橘植株里，从而得到具有柚苷酶的柑橘；方法2：利用蛋白表达载体，在体外表达柚苷酶蛋白，通过分离纯化得到高浓度的柚苷酶，在加工果汁的时候棚衫圆，按比例加入即可。

‘柒’ 转基因怎么转

转基因植物是基因组中含有外源基因的植物。通过原生质体融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程技术获得，改变植物的某些遗传特性。
人工转基因动物就是基因组中含有外源基因的动段孝消物。它是按照预先的设计，融合重组细胞、遗传物质转移、染色体工程和基因工程技术将外源基因导入精子、卵细胞或受精卵，再以生殖工程技术，有可能育成转基因动物。

遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养、再生植株通常可分成两大类，第一类需要通过组织培养再生植株，常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类方法不需要通过组织培养，比较成熟的主要有花粉管通道法，花粉管通道法是中国科学家提出的。
农杆菌介导转化
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿握知瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。
因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。
农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，自从技术瓶颈被打破之后，农杆菌介导转化在单子叶植物中也得到了广泛应用，其中水稻已经被当作模式植物进行研究。
花粉管通道法
在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由中国学者周光宇提出，中国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人慎搭工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。
核显微注射法
核显微注射法是动物转基因技术中最常用的方法。它是在显微镜下将外源基因注射到受精卵细胞的原核内，注射的外源基因与胚胎基因组融合，然后进行体外培养，最后移植到受体母畜子宫内发育，这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段。-这种方法的缺点是效率低、位置效应(外源基因插入位点随机性)造成的表达结果的不确定性、动物利用率低等，在反刍动物还存在着繁殖周期长，有较强的时间限制、需要大量的供体和受体动物等特点。
详细步骤：在显微镜下，用一根极细的玻璃针（直径1-2微米）直接将DNA注射到胚胎的细胞核内，再把注射过DNA的胚胎移植到动物体内，使之发育成正常的幼仔。用这种方法生产的动物约有十分之一是整合外源基因的转基因动物。
基因枪法
利用火药爆炸或高压气体加速（这一加速设备被称为基因枪），将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与农杆菌转化相比，基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制。而且其载体质粒的构建也相对简单，因此也是转基因研究中应用较为广泛的一种方法。
精子介导法
精子介导的基因转移是把精子作适当处理后，使其具有携带外源基因的能力。然后，用携带有外源基因的精子给发情母畜授精。在母畜所生的后代中，就有一定比例的动物是整合外源基因的转基因动物。
同显微注射方法相比，精子介导的基因转移有两个优点：首先是它的成本很低，只有显微注射法成本的1/10。其次，由于它不涉及对动物进行处理，因此，可以用生产牛群或羊群进行实验，以保证每次实验都能够获得成功。
核移植转基因法
体细胞核移植是一种转基因技术。该方法是先把外源基因与供体细胞在培养基中培养，使外源基因整合到供体细胞上，然后将供体细胞细胞核移植到受体细胞——去核卵母细胞，构成重建胚，再把其移植到假孕母体，待其妊娠、分娩，便可得到转基因的克隆动物。
体细胞核移植法
先在体外培养的体细胞中进行基因导入，筛选获得带转基因的细胞。然后，将带转基因体细胞核移植到去掉细胞核的卵细胞中，生产重构胚胎。重构胚胎经移植到母体中，产生的仔畜百分之百是转基因动物。

‘捌’ 转基因抗病水稻能用大肠杆菌作运载体吗

一般来说，植物的基因工程用农杆菌转化法，经济，方便。但农杆菌只侵染漏搭双子叶植物，而水稻是单子叶植物。所以以应该用基因枪法或花粉管通道返歼拿法改稿。没有用大肠杆菌的。这是我第一次答题。就给我分吧

‘玖’ 国际水稻研究所人员从产量低的耐淹水稻中找到一种耐淹的基因，将其移入到高产热带水稻中，终于培育出耐水

（颂并磨1）转基因过程中构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，然后需要用DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒．
（2）质粒是基因工程中最常用的运载体，其本质是双链环状DNA分子，因此质粒的基本组成单位是脱氧核苷酸．
（3）将目的基因（耐淹基因）导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法．
（4）在基因工程中使用标记基因的目的是筛选出含有目的基因的受体细胞；鉴定培育出的高产耐水淹水稻植株，最直接的方法是从个体水平上检测其是否抗水淹．
（5）在植物组织培养的再分化过程中，为防止感染，器皿、培养基与植物组织等必须进行灭菌、消毒处理．决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组蔽橡织培养过程中非常重要．生长素浓度大于细胞分裂素浓度时，将诱导愈伤组织出根．
（6）蛋白质工程是在分子水平上通过改造基因来实现对蛋白质的改造的，因为改造基因易于操作且改造后能够遗传．
故答案：（1）限制性内切酶、DNA连接酶（2）运载体脱氧核苷酸
（3）农杆菌转化法
（4）筛野斗选出含有目的基因（或重组DNA分子）的受体细胞检测是否抗水淹
（5）灭菌、消毒大于（6）改造基因易于操作且改造后能够遗传

‘拾’ 转基因水稻的发展历程

水稻转基因技术在20世纪80年代才有所突破，人们通过原生质体体系将外源基因导入到水稻中，并发展了直接转化法、PEG介导法、电激法和脂质体介导法等水稻转化方法。
20世纪90年代初，根癌农杆菌(Agrobacte— rium tumo咖ciens)转化水稻技术的建立使水稻转化成为一项常规的实用技术，目前绝大多数的水稻转基因事件都是通过此法获得的。
国际水稻所将抗虫基因导入水稻，育成抗二化螟、纵卷叶螟的转基因水稻。
1995年，中国农科院开始Bt抗虫转基因水稻拍羡的研发工作。1999年成果通过了农业部的成果鉴定，同年开始中间实验。
2001年，美国批准一种药用型转基因水稻商业化种植。
2002年，中国农科院Bt抗虫转基因水稻完成环境释放，2003年到2004年进行生产性试验。
2004年，伊朗批准Bt抗虫转基因水稻的商业化种植。
2004年，绿色和平组织曾在湖北展开了对转基因水稻种植的四次调查，并于2005年4月13日发布了《非法转基因水稻污染中国大米》调查报告。该报告认为，转基因种植在湖北等地的种植已经非常广泛。该组织同时将调查报告送往农业部。
2005年4月14日，农业部农业转基因生物安全管理办公室公布了《关于“转基因水稻污染我国大米”的书面答复材料》，对绿色和平的检测结果“无法认同”，关于报告中所提转基因水稻的种植面积、允许范围、是否违规等问题，农业部将依据《农业转基因生物安全管理条例》和湖北农业厅对此事的执法检查结果进行判断和处理。
2005年8月11日，湖北省政府委托省农业厅就“转基因水稻事件”首次发表申明，武汉科尼植物基因有限公司、武汉禾盛种衣剂有限责任公司和华中农大新技术研发公司在承担转基因水稻生产性实验过程中，“擅自扩大制种”，并责成有关单位对其进行处罚。
湖北省农业厅随即对已种植的上万亩转基因水稻进行铲除，并对农民进行每亩约四五百块钱的补助。随后，农业部下发通知，要求全国各地加强转基因安全监管工作。
2006年美国批准一种抗除草剂转基因水稻的商业化种植。
2007年5月16日，一种能够表达人类乳汁中常见蛋白的转基因水稻通过美国农业部的批准，开始大规模种植。
2009年12月初，中国生物安全网上公布的“2009年第二批农业转基因生物安全证书批准清单”上，出现了一直备受争议的转基因水稻，两个由华中农业大学研发的抗虫转基因水稻“华恢1号”和“Bt汕优63”首吵困次获得农业部为转基因水稻颁发的安全证书，并准予在湖北升贺念省进行种植。