❶ 常用的酵母菌转化方法有哪些
几种酵母转化方法;酵母转化原理:;像酿酒酵母,线性化的转化DNA和Pichiapa;电转化注意点:;一、制备感受态的菌液收集时间:;1、准确测定OD值:OD在1.2~1.5之间;1)为了准确测定OD值,建议将菌液稀释不同浓度测;2)OD值是否测准也可以这样估算:OD600为4;2、75ml的菌,经18h左右的培养,最后sor;1.5之间的500ml菌液,收集
几种酵母转化方法
酵母转化原理:
像酿酒酵母,线性化的转化DNA和Pichiapastoris基因组的同源区域发生同源重组,使得线性化DNA产生稳定的转化子(Cregg
et al., 1985; Cregg
etal.,1989).这样的整合方式显示极强的稳定性,即使多拷贝转化子在没有选择压力的情况下也很稳定.单交换事件(插入)比双交换事件(置换)发生几率更大.单插入事件中约发生1-10%概率的多插入事件.
电转化注意点:
一、 制备感受态的菌液收集时间:
1、准确测定OD值:OD在1.2~1.5之间。
1) 为了准确测定OD值,建议将菌液稀释不同浓度测定(1、2、4、8、16倍稀释,看其OD值是否呈线性关系)。每个倍数做3-5个重复,应该可以大致推断OD值是否准确!菌液看上去浑浊,但OD值不高,很可能OD稀释倍数不够!
2) OD值是否测准也可以这样估算:OD600为40左右时,菌体湿重(6000rpm离心5min)约0.95g/10ml。高密度发酵时菌体湿重将相应下降。
2、75ml的菌,经18h左右的培养,最后sorbital洗涤完毕后,50ml离心管里所剩菌体特别浓,需要1mlsorbitol才可溶解为糊状。正常培养的OD在1.2~
1.5之间的500ml菌液,收集的感受态也用1ml稀释的,没那么粘稠。可以看看降低培养温度(27摄氏度)或缩短培养时间(12h)。
3、甚至不用转接,直接挑单克隆在50-100mlYPD中摇过夜,效果也很好