病毒的分离培养常用的方法

A. 病毒的分离培养的原理

原理通过组织培养法分离培养HSV。
通过每天观察病毒对敏感细胞的细胞病变作用，初步确定病毒的存庆汪在。CPE通常是HSV感染的特征性改变，但其他疱疹病毒如水痘带状疱疹病毒（VZV）、巨细胞病毒（CMV）感染也可引起类似的CPE，因而需要通过免疫学方法。
病毒必须在易感的活细胞内才能增殖，因此，根据不同病毒选择敏感动物，离体组织细胞和鸡胚进行分离培养。实验方法原理鸡胚培养方法操作简便，适用于余差滑流感竖腊病毒，痘病毒，疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种，即绒毛尿囊膜接种法，羊膜腔（羊水囊）接种法，尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。

B. 细菌和病毒的培养方法

1繁殖方式:前者复制,后者二分裂；生活方式:前者寄生,离开宿主细胞无法生活,且对宿主有害,后者可寄生,腐生或自生,寄生时可能对寄主有益也可能有害；结构:前者无细胞结构,后者有；遗传物质:前者是DNA或RNA,后者只有DNA；变异速度:前者特别是RNA病毒变异速度极快,后者较为缓慢,突变率低.2培养基制作过程较繁琐,自己找相关资料.3病毒利用特异性的宿主,培养基中营养条件取决于宿主,细菌利用特异性的培养基,营养条件取决于自身.4.同2.5.寄主是否有相应的抗原；环境条件是否适宜；是否有一定的群体使大量细胞死亡,从而使器官失去相应功能.6外毒素:由细菌所分泌、能在局部及全身产生毒性效应的蛋白质成分.
内毒素:只在细菌被破坏时才被释放的细菌毒素.
类毒素:由于变性或化学修饰而失去毒性的毒素,但仍保留其抗原性.
7.特异性的培养基分别筛选,不同菌种有不同的鉴定方法

C. 目前最常用的培养病毒的方法是哪种

1.动物接种
这是最原始的病毒培养方法。常用的动物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等，接种的途径有鼻内、皮下、皮内、脑内、腹腔内、静脉等。根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位。
2.鸡胚接种鸡胚对多种病毒敏感。根据病毒种类不同，可将标本接种于鸡胚的羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊或绒毛尿囊膜上。
3.组织培养
将离体活组织块或分散的活细胞加以培养，统称为组织培养。组织培养法有三种基本类型：器官培养、移植培养和细胞培养。细胞培养最常用于培养病毒，根据细胞的来源，染色体特性及传代次数又可分为下列类型：原代和次代细胞培养，二倍体细胞株和传代细胞系。

D. 病毒毒株是怎么分离的

病毒毒株分离就是用含病毒的标本材料接种到漏毁适合的细胞里面。在这过程中要保证绝对的无菌环境操作，排除各种杂菌和其它微生物的污染。所以，一个有资质的、绝对干净，无污染的实验室和保证安全洁净的标准操作是整个流程的关键隐洞点。

成功分离出新型冠状病毒毒株的浙江省疾控中心微生物检验所所长张严峻：我们从病人痰液标本里面给它(新型冠状病毒毒株)处理了以后，接种到相应的细胞里，(让)这个病毒在细胞里能够生长。到了1月24日，我们对培养物进行鉴定，病毒已经在细胞里增殖，说明这个病毒培养分离已经成功了。

不是随便一个实验室都具有分离培养新型冠状病毒的资质，要有这个资质，至少要有生物安全三级实验室，而且实验室人员资质、工作流程、污染物的处理都要通过严格的审核，同时对于每一种高致病性病毒分离培养活动，都要专门向国家卫生健康委员会提出申请，经过审核后才能开展特定的分离和培养活动。

(4)病毒的分离培养常用的方法扩展阅读：

分离病毒毒株的意义

这能知道病毒是通过什么样的途径侵入到人体当中怎样的细胞器官里去的、在人体里面是怎么样繁殖的、哪些部位会产生一些毒粒、这些毒粒怎样作用于人类让人类生病、最后这个病毒怎样排出来再去感染人。通俗说可以知道它是谁、它到底要到哪里去、去的哪个地方它到底要做哪些事情、做完坏事情之后它又怎样逃出来到另外一个地方去干同样的坏事，整个过程都可以给它弄清楚。

了解了整个过程之后，医药专家就可以针对性地去研究相应的药物和疫苗，对病毒的预防、治疗有着重大意义。

E. 病原体的培养和分离

虽较直接检查法为慢,且较为复杂,但更准确,应用范围也更广,几乎可用于所有的病原体。一般除病毒、衣原体和立克次氏体外，都可用无生命的培养基培养和分离。培养基的种类很多，可根据不同的病原体加以选用。培养分离病原体后，还可进行各种试验，如发酵试验、毒力试验等，这对病原体的进一步鉴定非常重要。病毒、衣原体和立克次氏体缺乏维持生命衡闷所必须的各种酶，不能像细菌那样从培养基中摄取营养物质，利用自己的酶来合成自己所需的各种成分，不能用无生命的培养基培养,而必须接种到有生命的机体内,利用机体的酶来合成它们所需的各种成分。这种方法称“病毒分离”、“衣原体分离”或“立克次氏体分离”。
分离的方法一般有三种：
①组织培养。最简单常用；
②动物胚胎（如鸡胚、鸭胚）接种；
③动物接种，神型如接种小白鼠、豚鼠等。不同的病毒、衣原体或立克次氏体常需要不同的分离方法，分离阳性后也常需进行各种试验（如血清学试验等）才能最后判定其种类。病原体的直接检查常与病原体的培养分离同时进行。
除上述两种方法外，还有一些特殊的检查方法。例如对怀疑为的人或动物可取其脑组织检查特异性包涵体（内格里氏小体）确诊；检查乙型肝炎表面抗原可用反向被动血凝法(RPHA)酶联免疫吸附试验(ELISA)及放射免疫试验(RIA)等方法;检查粪便中的甲型肝炎病毒可用免疫电镜等。还可应用分子杂交或核酸分咐瞎弯析的方法来检验病人血液、组织或排泄物中的病原体核酸以协助诊断，如血液中及肝组织中的乙型肝炎病毒核酸，就可用分子杂交的方法检测；粪便中的轮状病毒可用核酸分析的方法来检测等。由于病原体的各种抗原和病原体的核酸都是病原体的特异性成分，因此如果它们出现阳性也就表示病原体阳性，故这些方法也具有很大的确定诊断的意义。

F. 病毒的培养方法有哪些为什么不能用一般培养基来培养病毒

适龄鸡胎接种，传代培养，组织细胞培养，易感动物接种。不可以。病毒是寄生在活体上的生物，而培养基是没有生命的有机物或无机物，病毒在上面不能生存。
病毒的结构是有一个DNA，和蛋白质外壳，和其它功能性的附属结构。
病毒不能自己生产蛋白质，它只有在寄生在活体上之后，把自己的DNA，注入到寄主细胞内，和寄主DNA结合，然后表达，利用寄主的蛋白质、DNA的和成功能，和成自己的蛋白质外壳，DNA，然后这些DNA和外壳在及主细胞破裂之后溢出，重新组合成好多病毒，感染其它细胞或寄主。 可以看出，这个细胞必须有生命（新陈代谢，能合成蛋白质DNA等），培养基是不行的。

G. 病毒学研究的基本方法有哪些

（一）生物学特性测定：在寄住上的反应——症状、传播等；
（二）病毒分离与培养：提纯与纯化，二元培养法；
（三）光镜与电镜观察：病毒粒子和病毒与相应抗血清的特异性免疫吸附情况；
（四）免疫学技术：以血清学和组织免疫化学方法检测材料带毒情况，多克隆抗体，单克隆抗体；
（五）分子生物学技术：核酸分子杂交，PCR等。

H. 病毒鉴定常用方法有哪些

寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。
开展蚊媒寨卡病毒检测时，对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。
开展寨卡病毒实验室检测时，应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。
（一）临床标本检测。
1．病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本，一般认为发病7天内检测阳性率高。
（1）核酸检测：采用荧光定量RT-PCR方法，是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。
（2）病毒分离：将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养，出现病变以后，用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
2．血清学检测
（1）血清特异性IgM抗体：发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体，但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应，易于产生假阳性。
（2）中和抗体：采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染，可以确诊。
（二）媒介标本检测。
1．标本处理
将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理。
2．病毒核酸检测
用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测
3．病毒分离
病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。

I. 流行病毒的分离培养与鉴定实验的原理

RT-PCR。利用Vero细胞进行雹庆病原分离，经RT-PCR鉴定颂简及测序分析。血液、体液、分泌物、粪便等宿主来源并包含野肆裤病毒的物质称病料，病毒分离时，传代细胞系、原代细胞是常用的分离方法。

J. 病毒的培养方法有哪些

病毒的培养方法：
（1）动物接种：病毒镇仿经注射、口服等途径进入易感动物的体内后可大量增殖，并使动物产生特定的反应。优点：操作方面易行。缺点：受机体免疫力的影兄盯响，常需要用无菌动物。运用：分离、增殖病毒，疫苗效力试验，疫苗和抗血清的生产。
（2）鸡胚培养：一般用9-12日龄的鸡胚，分别接种于卵黄囊内，羊膜腔，尿囊腔等部位。病毒生长的标志为鸡胚死亡、畸型和出血。用于病毒分离羡旅和与疫苗生产。
（3）组织培养：在离体活细胞上培养病毒的方法
1）组织块培养：取组织片（如一段胎儿气管或一小块鼻黏膜）进行培养。
2）细胞培养：病毒感染细胞后，大多数引起细胞病变，称为病毒的致细胞病变作用。表现为细胞变形，胞浆内出现颗粒化，核浓缩、核裂解等。