基因转化的常用方法

❶ 基因转化的常用方法有哪些

农杆菌转化法，用于单子叶植物或者裸子植物
显微注射法，用于动物，一般是注射到受精卵中
花粉管通道法，用于植物

❷ 植物的转基因有哪些方法

目前已发展了许多用于植物基因转化的方法，这些方法可分为三大类：一类是载体介导的转化方法，即将目的基因插入到农杆菌的质粒或病毒的DNA等载体分子上，随着载体DNA的转移而将目的基因导入到植物基因组中，农杆菌介导和病毒介导法就属于这种方法；

第二类为基因直接导入法，是指通过物理或化学的方法直接将外源目的基因导入植物的基因组中，物理方法包括基因枪转化法、电激转化法、超声波法、显微注射法和激光微束法等；化学方法有PEG介导转化方法和脂质体法等；

第三类为种质系统法，这包括花粉管通道法、生殖细胞侵染法、胚囊和子房注射法等。

❸ 可以通过什么方法转基因

直接注射法 将含有DNA的溶液直接注射到肌肉，以引起邻近的细胞摄入DNA燕进行表达，在肌细胞中，基因表达可持续数月。

磷酸钙共沉淀法 将氯化钙、DNA和磷酸盐缓冲液混合，形成磷酸钙微沉淀 ，附着于细胞膜并经过细胞内吞作用耐是入细胞质。该方法的转化效率通常很低。

脂质体染法 指质体能在体内或体外提供运载外源性遗传物质进入细胞的载体。脂质体介导的基因转移的最大优势在于能在活体内应用。

受体介导的基因转移 依靠受体介导的细胞内吞途径以转移外源基因。受体介导的基因转移方法是在质粒DNA和某种特异的多肽（配体）之间形成复合体，而这种多肽能为细胞表面的肥体所识别。如若将DNA在体内运送至肝内，可以选将DNA和能与肝细胞受体特异结合的去唾液酸糖蛋白质偶联，以便通过细胞内吞过程而被摄入，这种DNA大部分被肝脏所摄取。应用该方法转移的外源基因在活体内的表达持续时间较短，在评估实际应用前影上还在一些问题。

显微注射法 在显微镜下，将DNA经同细胞玻璃针地接注入细胞，该法适合于各种培养生长的细胞，但需要一定的设备和操作用支巧。

电穿孔法 利用脉冲场将DNA导入培养细胞。

微粒子轰击法（基因枪）近几年发展较快的转移方法。使用高能微粒子轰击将DNA导入培胞或活的哺乳动物组织内。亚微粒的钨和金能自发地吸附DNA，将这些微弹加强速到很的速度轰击细胞。实验结果表明，用这种方法靶基因可在皮肤、肌肉、肝、胰、胃和乳腺等细胞中表达。

胚胎干细胞法 胚胎干细胞是从受精卵开始分裂至4个国胞阶段未分化和具有多种潜能的生殖细胞，能在体外培养，可作为正面细胞，制备转基因动物，以研究基因定向整合或基因剔险及基因及能。

精子载体法 最近发现用精子和NDA-剂孵育，可捕获得DNA。通过受精过程，将外源性基因导入受精卵，可捕获得物物，大大间化了转基因动物的制备过程。

❹ 在细菌中水平基因转移的方式主要有哪些

1、接合作用：当细菌与细菌相互接触时，质粒DNA就可从一个细菌转移到另一个细菌。

2、转化作用：由外源性DNA导入宿主细胞，并引起生物类型改变或使宿主细胞获得新的遗传表型的过程，称为转化作用。

3、转导作用：当病毒从被感染的细胞释放出来，再次感染另一细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组称为转导作用。

4、转座（转位）：转座是指一个或一组基因从一个位置转到基因组的另一个位置。可分为插入序列转座和转座子转座。

5、基因重组：不同DNA分子间发生的共价连接称基因重组。有两种类型：位点特异的重组和同源重组。

(4)基因转化的常用方法扩展阅读：

基因水平转移的形成因素：

1、由质粒或病毒等介导的水平基因转移质粒和病毒是在各生物间进行遗传物质传递的重要媒介。

2、基因的“直接”水平转移水平基因转移除了通过质粒和病毒为媒介以外，大量发现的是不需要媒介的“直接”转移。

3、基因组序列分析和水平基因转移随着基因工程的深入开展，人类及其它生物基因组测序工作相继完成，人们发现不同物种之间，甚至亲缘关系很远的生物之间基因组上有大量同源基因存在。

4、水平基因转移与进化由前可知，水平基因转移实际上已被引入了分子进化及宏观进化领域，被认为是推动进化的重要动力。

❺ 什么是DNA直接转化法

通过生物学、物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称为转化。如果外源DNA分子是病毒（噬菌体）的DNA或cDNA，那么把此过程也称为转染。（1）直接转化法：有的微生物细胞在不加任何处理的情况下就能直接摄取外源DNA，只要外源DNA与这样的细胞混合，在适宜的条件下悬浮培养，就能完成外源DNA的转化。

（2）化合物诱导转化法：用二价阳离子（如Mgsuperscript2+superscript、Casuperscript2+superscript、Mnsuperscript2+superscript）处理某些受体细胞，可以使其成为感受态细胞，即处于能摄取外源DNA分子的生理状态的细胞。采用这种转化方法，1μg质粒DNA可以获得5×10superscript6superscript7×10superscript7superscript个被转化的菌落（转化子），这是实验室中常用于微生物的一种转化方法。

（3）接合转化法：接合转化是通过供体细胞同受体细胞间的直接接触而传递外源DNA的方法。该转化系统一般需要三种不同类型的质粒，即接合质粒、辅助质粒和运载质粒（载体）。这三种质粒共存于同一宿主细胞，与受体细胞混合，通过宿主细胞与受体细胞的直接接触，使运载质粒进入受体细胞，并在其中能稳定维持。现在常把接合质粒和辅助质粒同处于一宿主细胞（辅助细胞），再与单独含有运载质粒的宿主细胞（供体细胞）和被转化的受体细胞混合，使运载质粒进入受体细胞，并在其中能稳定维持。也有把接合质粒和运载质粒同处于一宿主细胞，再与单独含有辅助质粒的宿主细胞和被转化的受体细胞混合进行转化的。由于整个接合转化过程涉及到3种有关的细菌菌株，因此称为三亲本接合转化法，此方法主要用于微生物细胞的基因转化。

（4）激光微束穿孔转化法：此方法是利用直径很小、能量很高的激光微束（laser：microbeam）聚焦成微米级的微束照射受体细胞，利用其热损伤效应可导致细胞膜的可逆性穿孔。根据这一原理，在荧光显微镜下找出合适的细胞，然后用激光光源替代荧光光源进行照射，导致细胞膜穿孔，处于细胞周围的外源DNA分子随之进入细胞。这种方法操作简便快捷，基因转移效率高，无宿主限制，可适用于各种植物细胞、组织、器官的转化操作，并且由于激光微束直径小于细胞器，可对线粒体和叶绿体等细胞器进行基因操作，但该方法因仪器昂贵，转化率较低，故有待于进一步研究和完善。

（5）超声波处理转化法：由于超声波频率高、波长短，因而在传播过程中具有定向性好、能量大、穿透力强等特征。超声波法转化（ultrasonic：transformation）法就是利用低声强脉冲超声波的生物学效应击穿细胞膜造成通道，从而使外源DNA进入细胞。此转化途径可以避免脉冲高压对细胞的损伤作用，有利于原生质体的存活。超声波处理转化法的转化率较高，并且利用超声波处理可以避免使用电穿孔转化时高电压脉冲对细胞的损伤，有利于细胞存活，目前主要用于微生物细胞的基因转化。此外，该法具有操作简便、设备便宜、不受宿主范围限制等优点。

（6）脂质体介导转化法：脂质体（liposome）法是根据生物膜的结构和功能特征，用磷脂等脂类化学物质合成的双层膜囊将DNA或RNA包裹成球状，导入原生质体或细胞，以实现遗传转化的目的。脂质体法有两种具体方法：其一是脂质体融合法（liposome：fusion），先将脂质体与原生质体共培养，使脂质体与原生质体膜融合，而后通过原生质体的吞噬作用把脂质体内的外源DNA或RNA分子高效地转入到植物的原生质体内，最后通过原生质体培养技术，再生出新的植株；其二是脂质体注射法（liposome：injection），通过显微注射把含有外源遗传完整的脂质体注射到植物细胞以获得转化。

（7）电击法：电击法（eletroporation）也称电穿孔法，其原理是利用高压电脉冲作用在原生质体上“电激穿孔”，形成可逆的瞬间通道，从而促进外源目的基因的摄入。随着技术的改进，并与化学法结合，目前该法的转化率可高达1.2%。

（8）磷酸钙转染法：磷酸钙转染法的依据是有的动物细胞能捕获黏附在细胞表面的DNA—磷酸钙沉淀物，使DNA转入细胞。基本操作过程为：将待转染的外源DNA同CaClsubscript2subscript混合制成CaClsubscript2subscript·DNA溶液，逐滴加入到不断搅拌的Hepers—磷酸钙溶液中，形成DNA—磷酸钙共沉淀复合物，然后用吸管将沉淀复合物黏附在哺乳动物单层培养细胞的表面上，保温几小时后，用新鲜培养液洗净细胞，再用新鲜培养基继续培养，直至外源基因表达。

❻ （转基因）基因传递的方法有几种

几种常用的植物转基因方法

遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养、再生植株可分成两大类，第一类需要通过组织培养再生植株，常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类方法不需要通过组织培养，目前比较成熟的主要有花粉管通道法。

1．农杆菌介导转化法

农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。

农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。

2．基因枪介导转化法

利用火药爆炸或高压气体加速（这一加速设备被称为基因枪），将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与农杆菌转化相比，基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制。而且其载体质粒的构建也相对简单，因此也是目前转基因研究中应用较为广泛的一种方法。

3．花粉管通道法

在授粉后向子房注射合目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。

常用的动物转基因技术

1．显微注射法

在显微镜下，用一根极细的玻璃针（直径1-2微米）直接将DNA注射到胚胎的细胞核内，再把注射过DNA的胚胎移植到动物体内，使之发育成正常的幼仔。用这种方法生产的动物约有十分之一是整合外源基因的转基因动物。

2．体细胞核移植方法

先在体外培养的体细胞中进行基因导入，筛选获得带转基因的细胞。然后，将带转基因体细胞移植到去掉细胞核的卵细胞中，生产重构胚胎。重构胚胎经移植到母体中，产生的仔畜百分之百是转基因动物。

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❼ dna转化有哪些方式合有何优点

DNA转化的范围较广，但以植物细胞中的转化为主，现将其方式及优点阐述如下：

1、农杆菌介导基因转化：

• 转化原理:农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减速分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。

• 特点：操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物的遗传转化。

2、基因枪转化：

• 转化原理：利用火药爆炸或高压气体加速，将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。

• 特点：基因枪转化率差异很大，相对于农杆菌介导的转化率要低得多，而且基因枪转化成本高，嵌合体比率大，遗传稳定性差。它的一个主要优点是不受受体植物范围的限制，而且其载体质粒的构建也相对简单。

3、花粉管通道法：

• 转化原理：在授粉后向子房注射合目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。

• 特点：不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。

❽ 基因工程中转化的方法有哪些

转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表现型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。

化学法(化学药物如氯化钙等)转化
氯化钙法转化细胞 细菌处于0℃及CaCl2低渗溶液中时,菌细胞膨胀成球形.转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物。

直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”

具体做法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别载人不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫扩增）,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。但这种方法工作量大,具有一定的盲目性。20世纪80年代以后,随着DNA核苷酸序列分析技术的发展,人们已经可以通过DNA序列自动测序仪对提取出的基因进行核苷酸序列分析,并且通过一种扩增DNA的新技术（也叫PCR技术）,使目的基因片段在短时间内成百万倍地扩增。上述新技术的出现大大简化了基因工程的操作技术。