临床细菌检验的常用方法与技术

Ⅰ 归纳概括细菌检验方法

10种常用的细菌检测方法

一、[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数：
1、用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期（培养3天）的CTLL-2细胞两次，每次250×g离心10分钟，洗去培养液中残存的IL-2。
2、用台盼蓝（1% Trypan blue）染色法计数细胞并决定细胞的活力，用10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×105/ml。
3、在96孔细胞培养板中每孔加0.1ml倍比稀释的标准IL-2或待测样品，每个稀释度三个复孔，标准IL-2从40 IU/ml稀释到0.019 IU/ml（8～10个稀释度），阴性对照孔不加IL-2。
4、每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养18～24小时。每孔加10μl（0.5μCi或1.85×104Bq）[3H]脱氧胸苷，继续培养4小时。
5、用多头细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，用3%醋酸水溶液滤纸3次，洗去游离的[3H]TdR。将滤纸置液体闪烁瓶中，加入5ml闪烁液。在液体闪烁仪上计数细胞摄入的同位素活性（每分钟放射性计数，cpm），根据仪器效率换算成dpm（每分钟衰变数）。
6、用dpm值对样品稀释倍数作图。在图上，标准IL-2的曲线与待测样品的曲线应当呈平行的S型，说明是同样的分子反应。比较同样dpm处的不同稀释倍数，决定待测样品的相应浓度。
二、MTT检测法：
1、取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10%小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）
2、用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。
3、吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。
4、每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。
5、每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10% SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。
三、XTT检测法：
用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）。代谢产物在OD450处有吸收峰。
四、MTS检测法：
1、培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测IL-3）到对数生长期。
2、取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述细胞之一的DMEM培养液（加10%小牛血清）。
3、每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子（IL-2或IL-3）样品或细胞因子标准品，在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24小时。
4、每孔加20μl MTS/PMS混合液，继续培养3～4小时显色。
5、检测前摇晃培养板10秒钟，混匀颜色。在酶联检测仪上，波长570nm（或490nm，或570nm和690nm）处检测各孔的光吸收值（OD）。用样品稀释度对OD值（OD570、OD490或OD570/OD690）绘制剂量-反应曲线，根据标准品曲线计算样品中细胞因子的量。
五、NAG检测法：
1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。
2、吸去培养液，用PBS洗涤两次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前先离心）。
3、每孔加60μl NAG染液，在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4小时。
4、每孔加90μl终止液，混匀后置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长402nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。
六、AlamarBlueTM摄入法：
1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。
2、在培养结束前24小时加入Alamar Blue染料，96孔细胞培养板每孔20μl。
3、在培养结束后，直接在酶联检测仪上测定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm，用OD570减去OD600即为活细胞还原的Alamar Blue染料，颜色深浅与活细胞数成正比。
七、碱性磷酸酶检测法（AKP法）：
1、按MTT法用细胞因子处理靶细胞适当时间，用PBS洗去死亡细胞，洗两次。
2、向96孔细胞培养板各孔中加0.2ml新鲜配制的底物液（0.2mol/L 硼酸，1mmol/L MgCl2，1.2mmol/L甲伞基磷酸）。在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养3小时。
3、在荧光计数仪上测定荧光的量。根据测定已知不同数目细胞的荧光量作出标准曲线，根据标准曲线可得到各孔中的活细胞数。
八、三磷酸腺苷检测法（ATP法）：
1、ATP反应液（Bio-Orbit）是粉末状混合物，含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1μmol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在－20℃长期保存。
2、在已经完成促增殖或抑生长试验后的96孔细胞培养板中（每孔含100μL细胞培养液），每孔加0.1ml ATP释放因子，室温中反应5分钟。取另一块96孔细胞培养板，从第一块板的各孔中吸0.1ml细胞溶解物到第二块板的相应各孔。
3、在低于25℃中，将第二块板置自动多孔荧光检测仪中。用自动加样器，每孔加入20μl ATP反应液，立即检测10秒钟的荧光强度。温度升高，检测敏感性就下降。
4、用RLU（Y轴）对细胞因子标准品的稀释度（X轴）作标准曲线，根据标准曲线确定待测样品中细胞因子的含量。
九、染料染色法测定细胞数：
1）结晶紫检测法：
1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10%小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。
2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔各加100μl RPMI-1640培养液。继续培养18～24小时。
3、甩去培养液，用PBS小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定细胞30秒钟。
4、吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml结晶紫染液，室温中放置20分钟。
5、轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室温中长期保存。
6、测定前，每孔加0.1ml 33%醋酸脱色，充分振荡后在570nm处测定光吸收度。用光吸收度（OD）值对样品稀释度作图，比较标准品曲线和待检样品曲线即可得到待测样品中的细胞因子活性
2）NBB检测法：
1、在用细胞因子处理靶细胞以后倾去培养液，倒置培养板于吸水纸上吸干培养液。再用100μl磷酸缓冲盐水小心洗去死细胞，用吸水纸吸干培养液。
2、每孔加100μl NBB染液，室温中染色30分钟。轻轻染液。用吸水纸吸干染液。</P< p>
3、每孔加100μl福尔马林固定液固定15分钟。用自来水轻轻洗去固定液，倒置培养板，用吸水纸吸干染液。
4、每孔加150μl 50mmol/L氢氧化钠。轻轻振荡培养板直到染料全部溶解并均匀分布。在分光光度计上读取各孔在620nm处的光密度（OD）值。计算TNF的活性。
3）美蓝染色检测法：
1、用细胞因子处理靶细胞，在含100μL细胞培养液的检测孔中，每孔加0.02ml 25%戊二醛固定活细胞15分钟，用自来水缓缓洗去死细胞和固定液。
2、每孔加0.1ml 0.05%美蓝染液，染色20分钟，用自来水缓缓冲净染液，晾干。
3、每孔加0.2ml 0.33mol/L盐酸溶解美蓝，振荡混匀。在665nm波长处测定光吸收度。计算TNF的活性。
4）中性红染色检测法：
1、用细胞因子处理靶细胞，在含100μL细胞培养液的检测孔中，每孔加50μl 5%中性红染液。继续培养2小时。
2、小心倒去培养液。用200μl Hanks液洗涤细胞1次。小心倒去培养液，减少细胞丢失。
3、每孔加100μl脱色液，在摇床中轻轻摇晃溶解30分钟。在550nm波长处测定OD值。
十、直接计数细胞：
1、如果靶细胞是帖壁细胞，在细胞因子作用适当时间后，用生理盐水洗去死亡细胞，用0.25%胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打，使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。
2、如果靶细胞是悬浮细胞，则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再计数。通常用台盼蓝染色细胞，活细胞可以排除进入细胞的台盼蓝而不着染，死细胞着染呈深蓝色。
3、计数血细胞计数板上4个大方格中的全部活细胞，按下式计算活细胞数：活细胞数（个/ml）＝计数的全部活细胞数×10 000×2×1/4。

Ⅱ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因晶片、多聚酶链反应等，该文对这些检测技术进展做一综述。 对人和动物具有致病性的微生物称为病原微生物，又称病原体，有病毒、细菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体、真菌、放线菌、朊粒等。这些病原微生物可引起感染、过敏、肿瘤、痴呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年来出现的SARS、高致病性禽流感、西尼罗病毒感染等疾病的传染性极强，往往造成世界性大流行，因此对病原体的检测必须做到快速、准确。常规病原学检测方法操作繁琐，检测周期长，而且对操作人员技术水平要求比较高。随着医学微生物学研究技术的不断发展，病原学诊断已不再局限于病原体水平，深入到分子水平、基因水平的检测手段不断出现并被应用于临床和实验室 J。核酸分子杂交技术、PCR技术、基因晶片技术等检测方法，自动化程度高，快速省时、无污染、结果精确，可以准确灵敏地鉴定病原微生物。1 传统的病原微生物的检测方法传统的病原微生物学实验室检查以染色、培养、生化鉴定等为主，将标本直接涂片染色镜检和接种在培养基上进行分离培养是对细菌或真菌感染性疾病进行病原学诊断的常用方法。1．1 直接涂片镜检病原微生物体形体积微小，大多无色半透明状，将其染色后可借助显微镜观察其大小、形态、排列等。直接涂片染色镜检简便快速，对那些具有特殊形态的病原微生物感染仍然适用，例如淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等的早期初步诊断。直接涂片镜检不需要特殊的仪器和装置，在基层实验室里仍然是十分重要的病原微生物检测手段。1．2 分离培养与生化反应 分离培养主要用于临床标本(如血液、痰、粪便等)或培养物中有多种细菌时对某一种细菌的分离。细菌的生长繁殖需要一定时间，检测周期较长，不能同时处理批量样本。为解决这一问题，各种自动化培养和鉴定系统不断产生，传统鉴定方法也在逐步改进，大大加快了检验速度。例如Microscan WalLCAway全自动微生物分析仪，可同时做细菌鉴定和药敏试验，检验500多个菌种。苛养菌如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等对营养要求比较高，常规培养阳性率低。雍刚 等将不要同比例的葡萄糖、玉米淀粉、生长因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌剂加入到巧克力培养基中制成了新型淋病奈瑟菌培养基，大大提高了淋病奈瑟菌的分离培养率。苏盛通等在营养琼脂中加人了中药红枣、赤小豆培养甲型链球菌、乙型链球菌、肺炎链球菌等细菌，生长指数明显高于血平板。1．3 组织细胞培养 活组织细胞培养适于专营活组织细胞内生存的病原体，包括病毒、立克次体、衣原体等。不同病原体敏感的组织细胞是不一样的，将活细胞从病原体敏感的动物组织中取出在体外进行原代培养或用病原体敏感细胞系进行传代培养，再将病原体接种于相应的组织细胞中后，病原体可在其中繁殖增长，引起特异性的细胞病变效应。也可以将病原体直接接种于敏感动物体内，引起相应组织器官出现特异的病理学改变。往往可以根据这些特异的病变对病原体进行鉴定。2 血清学与免疫学检测血清学检测是通过已知的抗体或抗原来检测病原体的抗原或抗体从而对病原体进行快速鉴定的技术，简化了鉴定步骤，常用的方法包括血清凝集技术、乳胶凝集实验、荧光抗体检测技术、协同凝集试验、酶联免疫测试技术等。酶联免疫技术的应用大大提高了血清学检测的敏感性和特异性，不仅可检测样本中病原体抗原，也可检测机体的抗体成分。幽门螺奸菌在我国人群感染率高达50％ ～80％ ，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测唾液中抗HP抗体来诊断HP感染，其结果满意。乙型肝炎病毒(HBV)在我国人群中感染率极高，ELISA应用于乙型肝炎病人早期血清学诊断的效果最为明显。临床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何从这些细菌中分离出目标菌是关键。免疫磁珠分离技术(IMBS)是近年来发展起来的在微生物检测领域中一种新技术。其基本原理是将特定病原体的单抗或多抗或二抗偶联到磁珠微球上，通过抗原抗体反应形成磁珠一目标病原体复合物或磁珠一一抗一目标病原体复合物，在外部磁场磁力的作用下，将目标病原体分离出来。目前已经开发出了针对各种病原体的免疫磁珠，如大肠埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、军团菌等，广泛应用到各级科研和实验室 。经IMBS分离出的白色念珠菌可直接在显微镜下检测，检测时间缩短至4 h。IM—Bs还可以和其它检测技术联合来检测病原菌，免疫磁珠分离得到的目标菌可继续用于分离培养使大肠埃希菌0157最低检测限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS结合聚合酶链反应(IMBS—PCR)可对培养条件比较特殊的细菌如苛养菌、厌氧菌进行快速检测，肉类中的产毒素型产气荚膜梭菌经IMBS．PCR检测

微生物的快速检测方法有哪些

目前主要普通培养（简称标）般报告要用仪器、核酸检测（PCR）、目前快速检测（主要包括：免疫磁珠、酶联免疫试剂盒、金标检测卡等根据自需求选择

食品微生物的检测方法有哪些？

目前主要有普通培养法（简称国标方法）一般出报告的要用，仪器法、核酸检测法（PCR）、还有目前的快速检测法（主要包括：免疫磁珠、酶联免疫试剂盒、金标检测卡等。这个根据自己的需求来选择吧。

简述hiv的微生物学检测方法有哪些

简述hiv的微生物学检测方法有哪些
梅毒是由苍白螺旋体感染引起的一种性传播性疾病 。梅毒螺旋体感染人体后出现两种抗体：一种是特异性抗体(TPHA)，为lgM。当有补体存在和厌氧条件下，对活螺旋体的动力有抑制作用，并可将螺旋体杀死或溶解，对机体的再感染有保护作用。另一类是非特异性抗体（快速血浆反应素 RPR）。为lgA与lgM的混合物，可与正常生物组织中的类脂抗原发生非特异性结合，对人体无保护作用

微生物的传统检测方法有哪些？

传统检测有三种方法
1、直接显微镜观察，正常情况，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度以及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。

2、选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件，选择培养基，其作用是允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养一般是通过观察微生物的同化作用型别或某一特征进行间接判断，得到的微生物往往并不只有一种，但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。

3、鉴别培养基，根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比，鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小，一般可直接测定某微生物的种类。

现代定义

微生物：个体难以用肉眼观察的一切微小生物之统称。
微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。
根据存在的不同环境分为空间微生物、海洋微生物等，按照细胞机构分类分为原核微生物和真核微生物。

主要特征

1、体小面大
2、吸多转快
3、生长繁殖快

微生物的这一特性使其在工业上有广泛的应用，如发酵、单细胞蛋白等。微生物是人类不可或缺的好朋友。

水产品致病微生物检测方法有哪些

这个是我在网上找到的的微生物的检测试纸片，也不知道方法咋样，你要也可以去网站上看看的
像大肠杆菌测试纸片 肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新出现的食物传播性疾病的病因。它除了引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。大肠杆菌O157测试片（FilmplateTM E.coli O157BO204）3方元方圆生物的采用进口高选择性显色培养基作为主要原料，运用专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认，大大地简化了检测程式，非常适合各级检验部门和食品企业使用。本品适用于海产品、水产品、各类熟肉制品和冷荤、蛋及蛋制品等的快速检测。参照标准：食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验（GB/T4789.36）。

物体表面的微生物检测方法有哪些

; 用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的取样管内送检。擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具 *** 置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间

牛奶中细菌检测方法有哪些

先配制固体培养基，再划线培养1天，之后挑每一种菌落的细菌制片，显微镜下观察细菌的种类

Ⅲ 细菌学有哪些检验方法

直接涂片检查：取混匀新鲜尿涂片，健康人的尿涂片无细菌。若每个油镜视野下可见1条或以上的细菌，提示为菌尿。并可行革兰氏染色，初步确定尿路感染细菌是阳性球菌或阴性杆菌。细菌培养：目前多采用定量接种环法，培养24h，计数菌落。阴性杆菌分裂快，菌落数>l〇5cfo/ml，提示菌尿，菌落数104〜105cfo/ml为可疑。阳性球菌分裂慢，菌落数>103cfU/ml为菌尿。结核菌检查：尿结核菌检查是确定有无泌尿系结核的重要方法，尿沉渣涂片抗酸染色较简单，阳性率为50%〜70%;清晨第1次尿送检则阳性率高。尿结核菌培养阳性率可达90%，但结核菌生长缓慢。使用改良罗氏培养基，一般需4〜8周始能报告结果。近年常用聚合酶链反应（PCR)方法，使含微量结核菌DNA扩增，40条结核菌即可有阳性结果，此法特异性强，2d可有结果，但时有假阳性或假阴性的情况。菌尿的辅助检查亚硝酸盐试验：革兰阴性杆菌如大肠、副大肠杆菌能将尿中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，而球菌和结核菌无还原硝酸盐的能力，因此亚硝酸盐试验阳性，提示革兰阴性杆菌的感染。氯化三苯四氮唑试验（TTC试验）；大部分革兰阴性活杆菌能将无色TTC还原为红色的三苯甲替，而球菌及变形杆菌则呈阴性。故可用以初步判定是哪一类细菌感染。尿抗体包裹细菌（ACB):肾盂肾炎为肾实质感染，在细菌抗原作用下，机体可产生相应抗体，抗体将致病菌包裹，在荧光镜下观察用荧光素标记的抗人体蛋白抗体处理的尿细菌，若表面有荧光抗体包裹则大多属肾盂肾炎，膀胱炎为黏膜浅表感染，故细菌表面无荧光抗体包裹。用ACB法有助于上、下尿路感染的定位诊断。但在前列腺炎患者，其ACB试验亦呈阳性，应注意鉴别。其他：另外还有过氧化物酶试验、葡萄糖氧化酶试验、鲎试验及尿氧压测定均可帮助诊断尿路感染，但目前临床上应用较少。

Ⅳ 细菌学检验有哪些方面的应用

来源：临床检验医学
近年来，随着恶性肿瘤的高发、艾滋病的流行、化疗药物、广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制亩轿燃剂等药物的广泛使用，以及人工导管等侵入性操作、器官移植等有创诊疗技术的应用，由真菌所引起的感染日益成为临床各科室面临的巨大挑战。
为了提高临床诊断水平，加强真菌的检验能力显得至关重要，现在临床微生物实验室有关真菌检验的常见问题汇总如下，供大家学习参考。
1、为什么培养要设定35℃？
实验室通常将孵箱温度设定为35℃，是为了防止温度的波动对细菌或真菌生长的影响。临床常见细菌的最适生长温度为33~37℃(嗜热，嗜中温菌除外，占少数)，设定为35℃时上下波动2℃对培养无影响，如设定为37℃C显然就不合适了。至于真菌培养,要视标本来源而定。
一般怀疑浅部真菌感染的标本如皮屑、甲屑、头屑及毛发等分离培养于26~28℃。来源于人体深部组织的标本如痰、胸腹水、血及骨髓深部脓肿等,建议放35℃培养,是刚离体的标本在35℃更接近于人体温度,其次临床最常见的白念珠菌在35℃能形成更为典型的伪足样菌落,这与血清出芽试验在35℃做是同样的道理。
同时,来源于35℃初分离的光滑念珠菌具有更高的酶活性。怀疑温度型双相真菌感染或个别真菌需要较高温度生长时则需要帆枝两种温度同时培养。还要注意培养环境的湿度,一般要求大于60%,如果培养箱的湿度不够,最好在平板附近放置盛有无菌水的容器以保证湿度。
2、CO2对真菌生长影响大吗?
真菌属于异养型微生物，主要从有机化合物中获得碳源,而自养型微生物才需要从CO2中获得碳源，所以真菌一般不需要在二氧化碳环境中培养，而且CO2对真菌的生长和繁殖均不利,但一定浓度可刺激孢子形成。
3、在血培养中培养出真菌2次，但是患儿没有临床表现，而且临床也没用抗真菌药患儿就好了，是考虑污染吗?
这种情况要判断是否为污染菌，调查采血过程是否规范、血瓶转运过程是否符合要求、针孔是否适当封口、转运箱是否受到污染等众多因素，最关键的还是患者的临床表现，如没有真菌感染的症状，要么考虑污染，要么考虑定植(可能性不大)。
4、我们基层医院实际工作中做阴道分泌物真菌培养，生化鉴定几乎做不了，很多直接报白念珠菌，这样合适吗？
这样做不合适。目前有些检验科甚至分不清酵母菌和霉菌，在阴道白带、尿液和粪便中镜检发现念珠菌后报告为“找到霉菌”。
霉菌是指丝状多细胞真菌；酵母菌是指单细胞形态的真菌，二者不可混为一谈。阴道中感染的酵母菌大多是白念珠菌，但不排除其他酵母菌。
克柔念珠菌对氟康唑和5-氟胞嘧啶天然耐药，如果遇到类似存在天然耐药的菌株，会影响后续的治疗。
5、痰标本中少量念珠菌需要在报告中体现吗?还是不报告?
标本要求和检验程序用要体现，临床医生会综合考虑。虽然白色念珠菌导致肺部真菌感染的概率很小，遇到痰标本真菌培养中分离出该真菌，还是建议报告，临床医生结合影像学结果综合考虑。
先进性痰标本直接涂片，标本质量合格的情况下，见到真、假菌丝或大量孢子，痰培养有真菌生长，还是要报给临床医生，临床医生会综合考虑的。至于是否要做药敏，可和医生沟通后决定。
①建议留样本前5%苏打水漱口；
②清晨第一口痰；
③连送3d结果是否一致。
最好迅虚和临床医生沟通一下,或平时对医生、护士进行标本采集方法的培训。报告之前,结合痰涂片镜检结果,备注标本质量信息及污染可能性。
6、请问一下：前几天遇到一个抽出的脓液标本，打到血培养中，报阳后涂片显示真菌孢子，转种后涂片，形态上圆形，墨汁染色阳性，但是没有荚膜，转种科玛嘉没有颜色，后有白色有点黄色，用某国产鉴定显示近平滑，药敏全耐。问题是:①这个结果可信不?②墨汁用的是普通汁有影响吗?③该如何改进?
墨汁染色是针对标本中怀疑隐球菌属的荚膜进行负染，特别是新生隐球菌才做的试验，对纯培养的隐球菌属不可作为鉴定试验。
(1)将之前的脓液标本做个10%KOH湿片检，寻找真菌孢子和真、假菌丝。
(2)培养结果应该是可信的，最好和临床医生沟通一下，看患者是否有症状。
(3)对某国产品牌不熟悉,鉴定结果和药敏结果不好判断
(4)按照全国操作规程配制念珠菌的鉴定生化管，用原卫生部质控真菌鉴定符合率还是很好的，可以考虑自配生化鉴定管，用质控真菌进行验证。
(5)对每批号的某国产鉴定管用质控真菌进行验证,如果结果符合,应该没问题。
(6)最好参加原卫生部微生物质控培训，无论细菌、酵母菌方面,都会帮助你提高业务水平和验证你所用的试剂质量。
(7)墨汁只要粗细均匀，颗粒越细小越好，推荐曹素功墨汁，试剂公司也有印度墨汁可采购。
7、临床常见痰标本初次检出曲霉后,流程是怎么进行下去的?
(1)痰标本初次培养出丝状真菌菌落，前提是痰标本必须是新鲜的或不能立即送检应4℃冰箱保存。
流程是接受痰标本→镜检→培养→鉴定。
在痰标本合格的情况下,先做个10%KOH湿片镜检,低倍镜寻找真菌菌丝，是透明或暗色，是否有45度分枝。
如果痰标本合格，又找到菌丝，电话联系临床，告诉医生有丝状真菌生长，怀疑是XXXX，容易的直接报告临床，难的点种沙氏琼脂平板或察氏琼脂平板，再做进步鉴定。
(2)若标本不合格或合格但标本中未见菌丝，和临床医生电话沟通，告知有真菌生长，让医生综合考虑。鉴定正常进行,并报告临床,备注不排除污染可能。
8、酵母菌同化试验为什么放28℃而不是35C?同化试验和发酵试验有何区别?为什么教科书上说凡能发酵某种糖，一定能同化该糖，同化某种糖则不一定发酵该糖?
多数酵母菌体外最适生长温度为28-30℃，故其体外试验选用此温度。通话和发酵分别指真菌的有氧呼吸和无氧酵解，前者将糖类分解为二氧化碳和水，后者将糖类分解为二氧化碳和酒精等。
其代谢首先进行的是有氧呼吸获得能量，再进一步进行无氧酵解，这由细菌和真菌的相关酶类决定。酵母菌多数为专性需氧菌，所以其试验设计多以糖同化试验为主。比如隐球酵母只能进行有氧呼吸，所以只能同化葡萄糖而不能发酵，而酿酒酵母可将粮食发酵为酒，既发酵也同化葡萄糖。
9、鉴于目前真菌培养不是很规范，如何选择培养基、温度、报告时间和方式?请讲述实验室的具体流程。
(1)培养基：沙氏葡萄糖琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、脑心浸膏琼脂等适宜真菌生长的培养基，临床疑似酵母菌及酵母样菌感染，有条件实验室可平行接种显色培养基，推荐采用螺口管斜面培养法，标本处理后接种于培养基斜面中下部，绝大多数为需氧菌建议平行接种两管。
(2)培养条件及报告时间：深部真菌28±1℃培养7~14d，如怀疑双相真菌感染，应同时在28士1℃及35士1℃培养。
怀疑罕见真菌慢生长真菌感染或临床已用抗真菌药物时，延长观察时间至少培养4周。
如CSF宜置28℃及35℃两个温度培养至少一周；
痰/尿/粪一般35℃48h即可，如未见丝状真菌生长，则延长培养时间；
组织标本一般30℃，2~4周。
10、是否可以用科玛嘉显色培养基作为真菌初代培养基?
可作为初代培养基之一，建议另外接种沙氏培养基或酵母氮培养基(YPDA)，SDA和YPDA一般是酵母样菌的标准培养基。
11、咽拭子真菌培养有意义吗?
咽拭子培养真菌意义不大，存在定植除非患者有临床表现。

12、请问痰标本念珠菌定植率那么高，痰涂片看到比较多的孢子和假菌丝要怎么报告才比较合理?
个人觉得还是要如实报告临床医生、并将标本质量是否合格告知临床医生，至于是否感染，临床医生会根据影像学资料、患者临床表现等综合考虑的。
13、患者的手上有湿疹一样的丘疹,怀疑真菌感染,请问怎么样采样好?
对于皮损类的标本采集，需要用70%的酒精先将患处消毒处理，再使用已消毒的不锈钢刮刀或外科手术刀在皮损边缘刮取皮屑，装在无菌容器内送检。
14、我们用一次性手套装SDA平板可以吗?
一次性手套无论是PV还是乳胶，都会产生相对低氧的环境，而真菌是需氧菌会影响真菌的生长，不建议这样操作。
可以使用透气性好的胶带(静脉输液固定针头的)封闭平板，注意不要封太死。
15、用的墨汁在显微镜下不是均匀的黑色背景，而是一些细小黑色颗粒，这是不是墨汁的质量不好?还有,生物安全柜、超净工作台和通风柜三者有什么区别?
墨汁本身就是一些细微小颗粒加入溶媒形成的，墨汁质量的好坏在于颗粒的大小和均一性。
一般的墨汁检测隐球菌应该能观察，它只是作为背景,荚膜不染色，为透明的，背景是黑色。
生物安全柜和超净工作台的区别在于风吹的方向：
生物安全柜的风向是先垂直向下再向柜内，经过循环通过HEPA过滤后再排出，柜内形成一个相对负压的环境；
超净工作台的风向是先向下再向外吹，保证柜内的清洁无尘，通常用来配置平板和操作一些简单的分子克隆相关实验。
通风柜是通过风机将柜内的空气排到实验室外，通常用来配置有挥发性的化学品试剂，有害气体排向室外。
16、痰涂片中看到曲霉头，有多大临床意义?毛霉有没有污染可能？或者是定值？在痰里一直检查到青霉菌,没有意义吗?
如果痰标本直接镜检发现曲霉头，那就要考虑是曲霉感染。培养可以确定是哪一种曲霉。
毛霉存在污染的可能性，空气中也可以存在，但又因其高度的侵袭性，报告需谨慎，定值的可能性很小，但操作中污染的情况还是不少的。若标本合格，湿片镜检有90度分枝及粗大、不分隔的菌丝，那就要考虑了，否则有污染可能，最好及时联系临床医生。
青霉菌是一种条件致病真菌，如果痰中直接镜检查到菌丝，培养阳性，还是考虑感染。
17、在经验积累的初期，如何得到足够的菌株，用于练习各类染色、阅片呢?
有条件的话，最好到相关医院真菌室进修学习湿片镜检、真菌鉴定，将保存的菌株分批转种后，仔细研究其菌落颜色、大小质地等变化和镜检变化，并做好笔记。或参加医学真菌专业培训班进行系统学习。
18、如何保存真菌菌株?
最好的方法就是真空干燥、低温冻存。国际菌株保藏机构都是这种方法。
(1)将生长的斜面直接放在-10℃冷冻，表皮癣菌和许多接合菌纲菌种不可用此法保存。
(2)蒸馏水保存法：将生长在马铃薯葡萄糖培养基上的成熟的菌落，刮取菌丝体、芽孢或酵母细胞或利无菌蒸馏水冲洗斜面表面，再以吸管吸取放在无菌小管中，密封阻止蒸发，置于室温保存。
(3)另一种方法为直接加无菌矿物油至霉菌生长的琼脂斜面，至少可保存半年以上。
(4)基础液体培养基中加入15%~30%甘油，将新鲜成熟菌落挑至其中，-80℃保存。
19、一般什么样的患者我们会重点去关注是否为真菌感染呢?
免疫缺陷病患者、器官移植患者、肿瘤患者、中性粒细胞减少患者患者及较长时间使用广谱抗生素的患者。
20、霉菌培养箱(28C)被污染后如何处理?培养基放进培养箱后很快长污染菌，尤其门上的密封条上也长菌了，怎么办?
断电后，甲醛熏蒸,5%苯酚(石炭酸)擦拭后停留30min后，清水擦拭，打开通风24h后再使用。
21、血培养中可能培养出哪些丝状真菌?哪些是污染?
血培养阳性的丝状真菌主要有组织胞浆菌、马尔尼菲蓝状菌、镰刀菌、念珠菌、隐球菌、毛孢子菌、赛多孢，人眼球组织(研磨后打入血培养瓶)里曾培养出紫色拟青霉。腹水打入血培养瓶培养出棕黑腐殖霉。
文献报告皮炎芽生菌、伊蒙菌、球孢子菌都可以从血培养里培养出来。
烟曲霉是污染的,有报告土曲霉的心内膜炎患者外周血培养出来土曲霉[ I Clin Microbiol.1998Nov;36(11):3347-51]。
22、呼吸科患者，男，61岁，诊断支气管肺炎，HIⅣ阴性，在合格痰内培养出马尔尼菲蓝状菌3+，可以诊断吗?有必要复检吗?
他肝脾大吗?是否有骨骼受累及?皮肤受累及?还是仅仅局限在肺部?患者有其他基础疾病吗?
建议重送标本，如果反复培养出马尔尼菲蓝状菌要警惕。痰中培养出马尔尼菲蓝状菌，应该可以认为是致病性真菌。
马尔尼菲蓝状菌和曲霉菌丝区别：
如果在直接的临床标本中(体内)，马尔尼菲蓝状菌是酵母样的孢子，而曲霉菌是分枝分隔成45度角的菌丝。
如果在体外28℃培养物马尔尼菲蓝状菌可为淡黄色、黄绿色，背面红色，有红色色素渗透培养基中；
而曲霉开始为白色，表面可为不同颜色的颗粒，以此区分为何种曲霉。
马尔尼菲蓝状菌可以见到帚状枝，而曲霉可以看到曲霉头。
以上内容来源：卢洪洲、钱雪琴、徐和平主编的《医学真菌检验与图解》
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Ⅳ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

Ⅵ 细菌的鉴定有哪些

细菌的鉴定有哪些：

实验室使用常用的培养方法通常可以识别常见细菌的典型菌株。然而，当数据库中没有非典型菌株或稀有或新出现的细菌时的确会出现问题。

细菌培养往往是通过形态特征以及生长特征分辨细菌，进一步的鉴定还包括：

• 生化鉴定：主要是借助细菌对营养物质分解能力的不同及其代谢产物的差异对细菌进行鉴定，包括蛋白质分解产物试验、触酶试验、糖分解产物试验、氧化酶试验、凝固酶试验等。

• 血清学鉴定：适用于含较多血清型的细菌，用已知抗体检测未知抗原(待检测的细菌)，或用已知抗原检测患者血清中的相应抗细菌抗体及其效价。血清学鉴定操作简单快速，特异性高，可在生化鉴定基础上为细菌鉴定提供确定诊断。

• 分子生物学检测：适用于人工培养基不能生长、生长缓慢及营养要求高不易培养的细菌，主要是对基因、蛋白质、细胞及其他生物进行大信息量分析的检测技术。16S rRNA 基因序列分析法逐渐成为临床细菌鉴定、分离的金标准。

• 免疫学鉴定：通过 ELISA 的方法进行细菌检测。这种方法度敏感高，但它依赖于非常特异的抗体和高度区分的蛋白质。

• 质谱分析：通常使用气相色谱法和质谱法的组合对脂肪酸进行分析。脂肪酸在细菌细胞膜中是必不可少的，不同的细菌种类会产生不同的脂肪酸组合。 该脂肪酸谱可用于通过与已知谱匹配来确定未鉴定的细菌种类。

Ⅶ 细菌总数的检验方法是什么

细菌总数是水质参数之一，指单位体积水中的细菌总量。其检验方法是:在玻璃平皿内,接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。

Ⅷ 进行菌种质量检测的常用方法有哪些

1、直接观察。对引进菌种观察包装是否合乎要求，棉塞有无松动，试管、玻璃瓶和塑料袋有无破损，棉塞和管、瓶或袋中有无病虫侵染，菌丝色泽是否正常，有无发生变化。然后在瓶塞边作深吸气，闻其是否具备特有的香味。原种和栽培种可取出小块菌丝体观察其颜色和均匀度，并用手指捏料块检验含水量是否符合标准。

2、显微镜检验。若菌丝透明，呈分枝状、有横隔、锁状联合明显，再加上具有不同品种固有的特征，则可认为是合格菌种。

3、观察菌丝长速。将供测的菌种接入新配制的试管斜面培养基上，置于最适宜的温、湿度条件下进行培养，如果菌丝生长迅速、整齐浓密、健壮有力，则表明是优良菌种，否则即是劣质菌种。

优质菌种的标准

食用菌的种类虽然繁多，但从总体上看，每一个优良菌种均有＂纯、正、壮、润、香＂的共性。其标准是：

1、菌种的纯度要高，不能有杂菌感染，也不能有其他类似的菌种。

2、菌丝色泽要纯正，多数种类的菌丝应纯白、有光泽，原种、栽培种菌丝应连结成块，无老化变色现象。

3、菌丝要粗壮，分枝多而密，接种到培养基吃料块，生长旺盛。

4、培养体要湿润，与试管（瓶）壁紧贴而不干缩，含水适宜。

5、具有每品种特有的清香味，不可有霉、腐气味。

Ⅸ 细菌的临床检验

临床细菌学检验在检验医学中具有特殊的位置，主要表现在它的高风险性（如脑脊液培养结果正确与否直接关系到患者的生死）、高干扰性（如标本采集、运送等过程中的诸多因素都会干扰检出率和正确率）、高技术性和高严谨性（准确表达、报告和解释结果直接影响治疗的成败）。因此，细菌培养和药敏试验等属于高度复杂的试验范畴。
由于致病菌的多样性和变异性，临床细菌学始终是一门知识更新和发展较快的学科。为此，从事临床细菌检验的医师和技师必须具有较好的业务素质和敬业精神，要勤于学习和探索，要有严谨求实的作风和对新事物的敏感性，这是高质量完成细菌检验任务的首要条件。
细菌检验的全面质量管理是一个连续的质量管理过程，包括从患者准备，申请单书写，标本采集、标识、保存、运送、处理和检验，结果分析和报告，直至医师的理解和应用（诊治）。为了有效地对这一过程进行全面质量管理，本文从检验前、检验中和检验后三个方面提出相关要求。 （一）检验项目的申请
细菌检验项目的申请要有针对性和合理性。临床医师应在熟悉人体各部位正常菌群以及常见致病菌的基础上，结合感染患者的症状、体征，科学地提出检验申请。对于有感染迹象者（WBC增高，中性粒细胞升高，CRP>20mg/L等），应尽快申请做细菌培养与药敏试验，并力争在使用抗菌药物之前送检标本，以便及时获得致病菌的有关资料和药敏结果，正确选用抗菌药。对于低临床价值的细菌标本，如口腔和肠内容物、直肠周围脓肿、褥疮、多毛的脓肿、恶露、呕吐物、Foley导管尖等，由于易受正常菌群的污染，细菌培养价值较低，一般不做细菌培养；必须申请细菌培养时，其结果应结合临床分析。由于细菌检验的特殊性，细菌检验申锋枣嫌请单必须提供临床信息，特别应说明患者是否使用过抗菌药以及使用过何种抗菌药，以便于实验室有的放矢地抵消抗菌药的作用，提高细菌培养阳性率。
（二）检验标本的采集、保存、运送和验收
1．患者的准备 主要包括两个方面：一是做好采集部位的清洁和消毒工作，防止正常菌群的污染；二是耐心细致地交待患者，使其主动配合以便采集到有价值的标本。
2．标本采集 标本正确采集十分重要，其目的是千方百计捕捉病原菌并保持其活性，以提高检出率，同时又要尽可能避免非病原菌的污染和干扰。为此，要根据各种感染性疾病和目标病原菌的不同特点，正确合理地确定采样部位、时机和次数。要选用恰当的采样器材并严格按规范操作。一般来讲，采样量多一些有利于病原菌的检出，但应以不影响患者健康和便于操作为前提，因此采样量要恰当。
3．标本保存与送检 盛标本的容器应无菌、不漏和便于密封。要根据目标病原菌的特点决定是否使用保菌液、运送液或增菌液，以及选择何种保菌液、运送液或增菌液。标本采集后应尽可能立即送检。如不能及时送检，要根据目标病原菌的特点确定保存条件（如温度等），在规定的时间内送到实验室。
4．验收和登记 标本的验收和登记要有专人负责。验收的内容主要包括：采样时间与送检时间（注意时间间距）以及送检条件是否符合保存致病菌活力的要求；盛标本容器是否有溢漏和污染；申请单是否填写完整；标本标识是否与申请单一致和唯一等。对不合格的标本要拒收，并向送检医护人员说明拒收原因，告知正确送检的要求，嘱其重新采集和送检标本。
以上各项均与细菌检验的质量密切相关，检验科（细菌室）应与临床科室通过共同研讨，认真制定有关的要求和标准操银手作程序，并严格执行。 （一）致病菌分离鉴定
1．标本（细菌）的接种、分离和鉴定
根据标本和检验目的的不同接种不同的培养基。对阳性培养要分离纯化，然后进行分群和种属鉴定。整个操作过程要按标准操作程序（SOP）进行，不得随意更改操作程序，对于疑难菌株，要查阅文献、组织会诊，不能草率作出结论。
2．检验过程的记录和结果报告
检验过程中所见现象和发现的问题，均应如实地记录，以便于分析实验结果，作出正确结论和发出可信的报告，亦可作为今后总结和改进工作的依据。所发报告内容要登记，以便查询；如原（初步）报告有误或不完善，应发纠正报告。
（二）药敏试验质控
药敏试验应严格按最新发岩衫布的NCCLS所规定的培养基、操作方法、药敏纸片和判定标准进行。为了监控试验过程的质量，必须做好药敏质控。
1．常用的药敏质控标准菌株
NCCLS从美国菌种收集中心（ATCC）选择推荐了一些菌株作为质控标准株（见表1）。

2．质控株的保存
尽管质控标准株比其他一些菌株药敏结果是相对稳定的，但反复多次的传代不可避免地会造成菌株的变异。为防止变异，必须将标准株冻干保存。每月从冻干株中复苏1次，种入大豆胰酶消化肉汤中（厌氧菌可用GAM肉汤等）作为工作株。工作株可存于4℃～8℃，并于每周转种1次。通常工作株转种4～5次后即须弃去。在质控中，如发现工作株结果有疑问，应予以更换。反复传代亦易使其敏感性变异，特别是铜绿假单胞菌（ATCC 27853），将会丢失对脲基青霉素的敏感性。如无冻干条件时，可将质控株置入：①含10～15%甘油的大豆胰酶消化肉汤，或②脱纤维羊（或兔）血，或③脱脂奶，或④含50%小牛血清的肉汤，存于-20℃以下环境中（最好－60℃以下），亦可防止变异。
3．药敏质控方法
质控株应每天随临床分离株一道进行药敏试验，质控株的药敏结果如果在质控允许范围内（参见最新CLSI文件），说明实验条件符合要求，结果可信；若药敏结果在质控允许范围外，则实验中可能存在差错。由于质控允许范围的最大值与最小值是质控株在标准条件下多次重复实验的95%可信限，故20次连续质控结果中仅允许1次落在范围外，但不能偏离质控允许范围中间值[（最大值+最小值）/2]4个标准差。由于允许范围恰好包括4个标准差，故落在允许范围外的抑菌圈直径一定要在离中间值一个允许范围（中间值±1个允许范围）之内。此外，20次或更多次药敏结果的平均值应接近中间值。如果20次连续质控结果中≥2次或30次中有≥4次结果超出了允许范围，则提示实验过程中存在问题，必须查找原因加以解决。常规的药敏质控可按下法进行：连续测定某药对质控株的药敏结果，每天一次，共测20或30天，取得20或30个值。⑴如果20个值中仅有一个值，或30个值中仅有三个以下的值超出允许范围，则结果基本可信，可改每天质控一次为每周一次。此后，若某周出现一次质控值超出允许范围，则于当天查找原因（包括用错纸片和质控株，菌株污染，孵育条件错误等），经纠正明显错误后重测，如结果在允许范围内可继续每周一次的质控；如未能找出明显原因则需采取立即纠正措施：连续质控五天，每天一次：①若五次结果皆在允许范围以内，则继续每周一次的质控；②五次结果只要有一次失控，则存在系统误差，需进行增加的纠正措施：查找到原因，然后改每周一次质控为每天一次，完成20（或30）天质控，其间失控次数若在一次（或三次）以内，则再改为每周一次。⑵如果有两个（或四个）以上的值超过允许范围，则继续做每天一次的质控。⑶每当改变试剂、药敏纸片和培养基等时，均要重新进行连续20（或30）天的质控。⑷每次失控均要查找原因，纠正后才能发出报告。
（三）培养基、试剂和染色的质控
1．培养基的质控
培养基无论是自制的还是商业购买的，都应注明生产日期和效期。培养基的质控主要包括以下四个方面：①无菌试验，每批培养基在高压或过滤除菌后均要抽取样本进行培养，以证实无菌生长。②支持生长试验，以适宜的菌株接种，经培养应生长良好。③选择和抑制生长试验，对选择性培养基应至少分别选1株可生长、1株被抑制菌进行接种培养，可生长菌应生长良好，被抑制菌应不能生长。④生化反应培养基至少应分别选阳性和阴性反应菌株各1株，以证实应有的反应。常用的质控菌见表2，请正确选用。
2．生化反应试纸和试剂的质控
试纸和试剂无论是外购的还是自制的，在使用时一定要注明开启时间和失效期。测定代谢产物的试纸或试剂，要用已知阳性和阴性的菌株进行测试，并作好测试记录。测定代谢产物的试剂，要防止细菌的污染。触酶、氧化酶、凝固酶试剂在开瓶时以及使用中，每天至少要分别用一阳性和阴性菌测试1次。杆菌肽、Optochin、ONPG、XV纸片（条）在开瓶时以及使用中，每周至少要分别用一阳性和阴性菌测试1次（XV纸片仅做阳性菌）。用于分枝杆菌鉴定的试剂在开瓶或配制时，以及每次使用时，均要做阳性菌对照（铁的摄取试验还要做阴性对照）。抗血清在开瓶时和使用中每月需分别用阳性反应和阴性反应菌做1次测试。抗原检测试剂和DNA探针在每次操作时，均要设阴、阳性对照。其他试剂和纸片仅在开瓶或配制时，做1次阴、阳性反应测试即可。各种常用试纸和试剂的质控菌和预期结果见表3。
3．染色的质控 常用染色的质控要求见表4，质控结果应作好记录。
（四）仪器设备质量监测
实验室内的各种仪器设备的运行情况，应每天进行监测，每一仪器均要有专人按使用说明书要求进行维护保养，仪器上要附有运行记录卡，每天由维护保养人记录温度等指标的变化情况。一旦发现异常或失控，应立即查找原因并进行维修。
（五）积极参加室间质评
要按规定参加细菌学的室间质评，对实验室质控水平进行全面评估，不断提高检测水平。 检验工作完成后，要综合检验结果，正确及时地发出报告。阳性结果应先通知医师，以争取时间抢救患者。对于可疑的阴性结果或与临床不符的结果，要与医师共同探讨，找出可能的原因，不断提高诊断水平。对于所分离的特殊菌株，最好设法保存，以利于今后的研究工作。经常征求医护人员和患者的意见，加强相互间的沟通，重视医师和患者的投诉和抱怨，定期对质量管理工作进行评价，作出书面总结。要求全体检验人员都知道存在的问题和克服的办法，不断调整和改进质量管理体系。

Ⅹ 简述细菌性疾病微生物学检查的主要程序及方法

能够在得病生物体内提取出病原微生物。病原微生物能够引发其他目美丽病。目美丽病后症状与感染源生物症状相同。在目标体内仍能够提取出相同病原微生物。

标本的采集非常重要。细菌感染通常是通过培养的方法检测的，而病毒通常是通过抗原或者核酸来检测的。细菌培养和鉴定，以及药敏试验，是合理使用抗菌药物的前提，好的标本决定一切，这是检验领域的一句俗话。

不恰当的标本、不恰当的采集时间、不规范的采集方法，可能造成假阴性，假阳性，杂菌污染等，延误诊断，危及生命。对于严重感染，需要确定病原菌的，标本应该选择细菌可能定植的部位，如深部痰液，胸水，血液等，标本提取的时间应该在抗菌药物使用前，最好在发生寒战的时候。

(10)临床细菌检验的常用方法与技术扩展阅读：

菌落总数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）样品生长出来的细菌菌落数量。国内外普遍采用此需氧平板计数法（APC）。国外用于食品、化妆品中微生物计数的螺旋平板计数法（SPC）也需（48±3）h。

这2种方法均为传统的培养方法，操作繁琐，费时费力。近年来，国内外技术人员研究开发了快速测试片技术、生物电化学技术、微菌落技术、发射测量法、微热量技术、ATP生物发光技术、色谱法等快速检测方法，缩短了检测时间，简化了检测程序。