食用菌菌种保藏的方法

1. 常用的菌种保藏方法 常用的菌种保藏方法介绍

1、斜面低温保藏法

这是最简单最普通的保藏方法。首先将菌种在适宜的斜面培养基（一般PDA）上培养成熟后，选择菌丝生长粗壮，边缘保存。一般保存温度4～6℃，除草菇和银耳菌种外（10～15℃），此方法对其他食用菌都适宜，一般菌种可保藏2～4个月，所以需定时移接。此法保藏虽然方便，但是保藏时间短，需经常转管，也很容易发生衰退变异现象。因此，不能用作长期保藏，最好与其他方法结合起来保藏。另外，为了减少保藏期间培养基水分蒸发，琼脂最好加到2.5%。为防止菌种在保藏过程中产酸分的积累，应加入0.2%的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等缓冲盐类，同时，培养成熟后，最好将棉塞管口外剪平，并用矿蜡封或换以无菌木塞，这样做也可以减少培养基水分的散失，延长保存时间。在农村如果没有冰箱，可采用土法保藏。即把保藏用的斜面菌种换上无菌橡皮塞，并用矿烛蜡封后密闭的广口瓶中，悬入井底保藏。

2、贮藏室保藏法

原种和栽培种一般只在贮藏室短期保藏，贮藏室温度0～10℃为好。室内应清洁、干燥、无光，应经常检查温度和湿度，以降低其生活力，减少变异退化，防止杂菌污染，避免过早出菇。温度越高，保存的时间越短。

2. 食用菌的菌种有哪些保藏方法各有什么特点

（1）斜面低温保藏。是一种最常用、最简便的菌种保藏方法。首先将需要保藏的菌种接到斜面培养基上，在适宜的温度条下培养，当菌丝健壮地长满斜面时，即将此试管菌种取出，放置于4 ℃的冰箱中保藏。特点：

①简单易行，适用于各类菇类菌种保藏，是目前生产及科研普遍采用的一种方法；②保藏时间短，需6个月转接一次，转管次数多菌丝变异的可能性大；③如改用橡皮塞并用石蜡扣，可保藏1年～3年。

（2）液体石蜡保藏。液体石蜡保藏也称为矿油保藏，即用矿油覆盖试管斜面试管保藏的方法。矿油是指无色、透明、黏稠、性质稳定、不易被微生物分解的石蜡油和液体石蜡，将其覆盖在斜面菌种之上，可以隔绝空气，防治培养基水分蒸发，抑制微生物的代谢活动，推迟细胞老化，从而达到长期保藏菌种的目的。特点：

①方法简便易行，保藏条件不严格，保藏时间长，可作为长期保藏菌种的方法；②菌种必须垂直放，放置不方便。

（3）滤纸保藏。滤纸保藏是一种以无菌滤纸作为食用菌孢子吸附载体长期保藏菌种的方法，又称滤纸孢子保藏法。特点：技术要求高，设备费用大，菌种不易衰老退化，菌种保藏时间长很少变异。

（4）自然基质保藏。自然基质保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含营养的自然生长的基质作培养基来保藏菌种的方法。自然基质很多，食用菌常用的自然基质有发酵的粪草、木屑及枝条基质等，取材方便，制作方法简便，保藏时间也较长。使用时，只需取一块、一粒或一条培养物放在新鲜的培养基上，并在适温下培养即可。特点：方法简便易行，保藏时间长。

3. 母种的保藏方法有哪些

母种保藏的方法有很多种，具体采用哪种方法应根据实际情况而定。常用的基础方法有：斜面继代低温保藏、自然基质保藏（麦谷粒保藏、发酵粪草保藏、木屑保藏、麦麸+木片保藏、木块+琼脂保藏、稻草粉保藏草菇菌种、枝条保藏）、液体保藏[矿油保藏、菌丝球生理盐水保藏、蒸馏水保藏、营养液保藏、液氮保藏（图2-12）]、孢子滤纸保藏、真空冷冻干燥保藏、液氮超低温保藏、孢子沙土管保藏、梭氏真空干燥保藏等方法。专门保藏菌种的机构为确保保藏效果，每一品种都要同时用至少三种方法保藏，即长期方法、中长期方法和短期方法。限于篇幅，不再一一介绍。下面仅针对菇农介绍常用的低温和基质保藏法及几种土法保藏方法。

图2-12 母种的液氮保藏法

（1）斜面继代低温保藏

这是一种传统的、普遍应用的简易保藏方法，它简单易行，不需特殊设备，并能随时观察所保藏菌种的情况。其缺点是转管频繁，营养生长过多，易发生退化，在操作中发生技术错误的机会多；可能会因未及时转接、培养基干缩而引起菌种老化、死亡等。

这种方法是根据低温能抑制菌丝生长的原理，将需要保藏的菌种接种在斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地快长满斜面时取出，放2～5℃低温干燥处或冰箱、冰柜中保藏。每隔一定时间要移植转管、继代培养1次（一般4～5个月），具体应根据菌种特性来确定。食用菌中有的中高温和高温型品种，不适于该法，如毛木耳多数品种保藏的适宜温度在10℃左右，中华灵芝在6～10℃，草菇在10～12℃。可在草菇菌落上灌注3～4毫升的防冻剂（10%的甘油）。

用于保藏的培养基，不宜用营养过贫或过富的合成培养基，一般采用天然培养基，如马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、马铃薯综合培养基（CPDA）等。为防止产酸，糖应少加或不加，而需添加缓冲剂，如磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、碳酸钙等，以中和菌种在保藏过程中产生积累的有机酸。同时，每1000毫升还需加 10毫克维生素 B₁，加大琼脂用量至25克，以防止培养基中水分蒸发过快。如保藏香菇和黑木耳菌种，把配方中的葡萄糖更换成麦芽糖更有利。棉塞稍长，入管内达3厘米左右，制成半高层培养基，即斜面小、短，管底1.5厘米的培养基呈柱状。

橡皮塞密封保藏：选用与试管口相应大小的白橡皮塞，清洗、晒干，放入低压聚乙烯袋内，于0.137兆帕下灭菌1小时。在无菌条件下，将培养合格的斜面菌种用无菌橡皮塞取代原棉塞，置4～6℃冰箱内保藏，保藏时间可达6个月以上。这种方法能隔绝空气，防止蒸发，达到液体石蜡相似的效果。而且放置、邮寄、携带等很方便。

注意事项：

①保藏菌种必须是发育健旺的菌种，培养时间不可过长，以免降低菌种生活力。

②制种时要贴好标签，每次移接时要细心核对菌种号及标明时间，做到准确无误，若发现错误，应立即纠正，无法确认的，剔除不要。

③定期检查保藏情况，一旦发现污染或培养基失水干缩现象，应立即移接、剔除。

④尽量少启用冰箱，以免产生冷凝水而引起污染，开启时应做到边开、边取、边关，最好设置一个永久性的保藏冰箱，与常用菌种的冰箱分开。

⑤保藏菌种在冰箱中不可过分拥挤；保藏温度控制在3～5℃，不宜过高或过低。

⑥冰箱要定期排霜，清除积水。保藏时要注意环境湿度不能太高，湿度太高，霉菌容易在棉塞上生长，并通过棉花纤维进入管内。所以，最好用橡皮塞或硅氧海绵塞代替。若用棉塞，可用干净的纸（硫酸纸、牛皮纸均可）包扎好，也能起到减少污染、延缓培养基干缩的作用。

⑦所保存的菌种在使用时，要提前12～24小时从冰箱取出，经适温培养恢复活力后，方能转管移接。

（2）自然基质保藏

即利用食用菌自然生长的培养基来保藏菌种的方法。常用的有麦粒、谷粒培养基、发酵粪草、木屑木片、麦麸米糠等基质。

①麦（谷）粒保藏 此法利用麦粒、谷粒或玉米粒（碾碎）等作为培养基，进入颗粒的菌丝体，在表皮的保护和谷粒中有限水分的供给下，保藏期可达1～2年。现以麦粒为例介绍如下：

先将麦粒洗净，用20℃左右温水浸泡5小时后捞出晾干表面的水分（或置水中煮沸5分钟至不破皮），装入试管长度的2/3～3/4，塞好棉塞，置于1.18×10⁵帕压力下灭菌30分钟。处理后麦粒的含水量不要超过25%，灭菌过程中勿使表皮破裂，以保护进入麦粒的菌丝体。灭菌后趁热摇散麦粒，冷却后，接种孢子液或菌丝悬浮液或菌丝块，然后置25℃下培养，当试管快发满菌丝后，即停止培养，保藏在干燥冷凉处。

②木屑保藏 用阔叶树木屑、麦麸加糖和石膏各1%，混合拌匀，加适量水后，装入试管长度的2/3，稍压紧，洗净管口，塞上棉塞，用纸包好，置1.18×10⁵帕压力下灭菌40分钟，冷却后接种，置25℃条件下培养，菌丝长满后将棉塞蜡封或换橡皮塞，再包扎塑料袋置4℃冰箱中可保藏1～2年。

（3）井底低温保藏

即利用井底具恒温且温度低的原理进行菌种保藏的方法，适用于不具备保鲜冰箱的菇农。将要保藏的试管母种，用无菌橡皮塞醮石蜡封口，装入密闭的广口瓶或塑料袋中，扎紧，沉入井底贮藏，可保藏2～5个月。

（4）石蜡封口保藏

把蜡纸裁成6～8厘米见方，放75%酒精中浸泡1分钟。将已培养好试管种的管口在酒精灯火焰上方旋转灭菌后，用镊子取出蜡纸，扎紧管口。再将包好蜡纸的管口浸入熔化的石蜡中，将蜡纸完全浸入为止，使蜡纸紧紧封包在管壁上，绝不漏气。待石蜡冷却凝固后，置冰箱或室温下保存。

（5）玻璃纸封口保藏

用明胶15克（粘合剂），硫酸铜2克，美蓝1～2滴（指示剂），溶于100毫升热水中，配制成封口剂。将新长满的母种拔去棉塞，管口朝下，蘸上封口剂，贴上用95%酒精浸泡过的玻璃纸（赛珞璐），再用石蜡熔封。在室温下，菌种至少可保存8个月，并能防止霉菌或螨的侵染。在斜面注入无菌矿油（液体石蜡），可大大延长保藏时间。

（6）厩肥保藏

此法适合保藏双孢菇等草腐菌类。将腐熟牛粪等堆肥晒干、打碎，取300克干堆肥，用5毫米孔径筛过筛，加1000毫升水调湿，装入试管，占管深1/3～1/2，在0.15兆帕压力下灭菌2小时。确认无菌后，接种，菌丝长满后，放在3℃冰箱内保藏，每隔2年移植一次。在长期保藏中，如培养基失水，应将保藏菌种及时接种在琼脂斜面上进行活化，再继续保存。此法连续保藏4年后，其生产性状未出现明显变化。

4. 菌种保存的方法有哪些，菌种传代操作规程

菌种保存的方法有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、滤纸保藏法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法。1、斜面低温保藏法:将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8°C的冰箱中进行保存。2、液体石蜡覆盖保藏法:使用液体石蜡将斜面菌覆盖住，使其和空气隔绝。
一、菌种保存的方法有哪些
1、斜面低温保藏法
(1)将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，等到菌种充分生长过后，使用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8°C的冰箱中进行保存。
(2)如果是霉菌、放线菌及有芽孢的细菌，一般可以保存2-4个月左右，需要移种一次。如果是酵母菌，一般可以保存2个月左右，需要每个月移种一次。
2、液体石蜡覆盖保藏法
(1)将液体石蜡装在三角烧瓶中，并使用棉塞塞好，用牛皮纸进行包扎，然后在0.1MPa，121.3°C的环境下灭菌30分钟左右，接着将其放置在40°C的温箱之中，将水汽蒸发掉。
(2)将需要保藏的菌种，用适合的斜面培养基进行培养，得到健壮的孢子或者是菌体。
(3)使用灭菌过的吸管将液体石蜡吸出，注入斜面上，用量为高出斜面顶端1cm左右为宜。
(4)将试管直立，放置在低温或者是室温之下进行保存。
(5)霉菌、放线菌、芽孢细菌可以保藏2年以上不死，酵母菌可以保藏1-2年，一般无芽孢细菌可以保藏1年，脑膜炎球菌可以保藏3个月左右(37°C环境下)。
3、沙土保藏法
(1)准备好河沙，加入10%稀盐酸，然后加热煮沸30分钟左右，将里面的有机质去掉，然后将酸水倒掉，用自来冲洗至ph为中性，接着烘干，过筛(40目筛子)，去掉粗颗粒。
(2)准备好非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，浸泡洗涤数次，直至ph为中性，然后烘干，碾碎，过筛(100目筛子)，去掉粗颗粒。
(3)将沙和土按照2:1的比例混合，装入试管或者是安瓿管中，塞好棉塞，在1212°C的环境下灭菌30分钟左右。
(4)将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。
(5)使用灭菌过的吸管吸取菌悬液，然后均匀滴入沙土管中(0.2-0.5ml/管)。如果是放线菌或霉菌，可以直接挑取孢子拌入沙土管中。
(6)真空抽去沙土管中的水分。
(7)将沙土管用火焰熔封，然后存放在低温(4-6°C)干燥处保藏，或者是将沙土管用牛皮纸或塑料纸包好，放置在干燥器内保存。保存期间，每隔6个月左右检查一次菌种存活性。
4、滤纸保藏法
(1)准备好滤纸条(0.5×1.2cm)，安瓿管(0.6×8cm)，然后每个安瓿管放置1-2张滤纸条，塞上棉塞，在0.1MPa，121°C的环境下灭菌30分钟左右。
(2)将菌种在适合的斜面培养基上培养，得到健壮的菌体。
(3)在灭菌培养皿中滴加1-2ml的灭菌脱脂牛乳，并取数环菌苔在牛乳内混合均匀，制成浓悬液，然后使用镊子从安瓿管中取出滤纸条，浸入菌悬液中，吸饱后，放回安瓿管中，塞上棉塞。
(4)将安瓿管放入干燥器中(内有五氧化二磷作吸水剂)，并用真空泵抽气至干。
(5)将棉花塞入管内，用火焰熔封，然后放置在低温环境下保存。
5、甘油管保存法
(1)准备好80%的甘油，然后进行高压蒸汽灭菌处理。
(2)将菌种在适合的斜面培养基上培养，并使用无菌水注入，制成成高浓度的菌悬液。
(3)取出1ml的甘油和菌液混合均匀，让甘油的浓度变为10-30%左右，然后放置在零下70°C的环境下进行保存。
6、冷冻干燥保存法
在低温下快速冻结细胞，然后在真空条件下进行干燥，让微生物的生长和酶活动停止，同时为了保证细胞在冷冻和水分升华的过程中不受损害，应当使用保护剂来制备细胞细胞悬液(菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质)，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
二、菌种传代操作规程
1、点燃酒精灯，在火焰旁的上方灼烧接种环。
2、将原有的菌种斜面培养基(菌种管)和待接种的新斜面培养基(接种管)用左手的拇指、食指和中指夹住，菌种管在前，接种管在后，然后斜持试管(45°)，让试管内斜面向上，两个试管的口子平齐。
3、右手在火焰旁边转动两管的棉塞，然后右手拿着接种环的柄端，垂直将接种环在火焰上灼烧，顶端的环必须烧红，而且凡是接种时进入试管的部分，均应通过火焰灼烧。
4、使用右手的小指和手掌之间以及无名指和小指之间，将两管的棉塞拔出，拿住，然后将试管在火焰上通过。
5、将接种环插入菌种管内，接触无菌苔生长的培养基，待冷后，从斜面上挑取少许菌苔，然后迅速插入接种管，在斜面上轻轻划线接种(由下而上划直线，然后由下往上划曲线)。
6、接种完毕后，将管口通过火焰灭菌，并将棉塞塞上。

5. 食用菌菌种的概念和分级，保存使用最多的方法

1、食用菌菌种的概念：食用菌指子实体硕大、可供食用的蕈菌（大型真菌）。2、食用菌菌种的分级：在生产上，一般将食用菌分为三级，分别是一级种（母种、试管种）、二级种（原种）和三级种（栽培种）。3、食用菌菌种保存使用最多的方法：在生产中，食用菌菌种保存使用最多、最常用的方法是斜面低温保存法，它具有应用方便、操作简单、无需特殊设备以及能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等优点。

一、食用菌菌种的概念和分级

1、食用菌，指子实体硕大、可供食用的蕈菌（大型真菌），通称为蘑菇。常见的食用菌有香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑（松茸）、口蘑、红菇、灵芝、虫草、松露、白灵菇和牛肝菌等。

2、在生产上，一般将食用菌分为三级，分别是一级种、二级种和三级种。

（1）一级种：又称为母种、试管种，指经过不同方法选育得到的，具有结实性的菌丝体纯培养物以及继代培养物，通常以玻璃试管为培养容器和使用单位。根据生产目的不同，母种又可以分为保藏母种、扩繁母种和生产母种。

（2）二级种：又称为原种，指在母种的基础上再次繁殖出来的菌丝体纯培养物。原种是母种的菌丝体转接到棉籽壳、玉米芯、木屑或高粱粒、麦粒等固体培养基上培养而成的食用菌菌种。原则上，二级种可用来直接栽培，也可用来再次繁育三级种。

（3）三级种：又称为栽培种，是食用菌菌种的最后一级，是直接用于生产栽培的菌种，也是生产中使用量最大的食用菌菌种。通常情况下，它是用原种在天然固体培养基上扩大繁殖而成的，培养基包括谷类、木屑和草类等。

二、食用菌菌种保存使用最多的方法

1、在生产中，食用菌菌种保存使用最多、最常用的方法是斜面低温保存法。该方法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，具有应用方便、操作简单、无需特殊设备以及能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等优点。

2、斜面低温保存法是将分纯的待存菌接种于适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，用封口膜封口，贴上标签，保存于2-8℃的冰箱中。通常保存时间较短，一般每个月都要移种1次，而且菌种容易变异。

6. 保藏菌种的方法有哪些

1、传代培养保藏法：包括又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等，培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法：液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间。

3、载体保藏法：载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物。

5、冷冻干燥保藏法：先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥），其中真空冷冻干燥法最常见。

(6)食用菌菌种保藏的方法扩展阅读

菌种保藏的原理：

菌种保藏有多种方法，其原理大多大同小异，主要是运用一些方式尽量降低生物体内的代谢，达到延长生命，减少变异的目的。通常采用的方法为低温、缺氧、干燥。

低温主要对菌种产生两方面的影响，首先，较低的温度可以减缓机体细胞的酶活，降低新陈代谢，达到保藏菌种的目的。其次，低温同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制，如果降温过程失误，同样会造成机体的机械损伤和溶质损伤。

7. 常用的菌种保存方法有哪些

菌种保藏是食用菌产业的一项基础工作，是确保野生种质资源基因留存和现有生产用种遗传性能相对稳定的必要手段。菌种保藏的方法多种多样，有的虽然保藏效果好，但投资高或操作繁杂。在生产实践中，更需要设备投入少，能保障菌种不死亡、不污染、最大限度地保持优良种性的简便方法，如斜面低温短期保藏和自然基质较长期保藏相结合的方法。

一般而言，对母种进行长期保存，对原种进行短期保存。须保证优良菌种的性状和活力不发生变异，不死亡，不被污染，确保其纯度。因此，保存方法应具备取材容易、操作方便、菌种不易退化、长期保存不污染杂菌等优点。常用的菌种保存方法如下：

（一）斜面低温保藏 该法的优点是保藏方便且所占空间较小。具体做法是：菌丝长满斜面后，放在0～5℃保存。以后每隔一定时间（2～3个月）转管一次。转管保存不能长期用PDA培养基，否则种性易退化，灰树花降解木质纤维素的能力减弱。因此隔一定时间（1年左右）须把菌种转接到木屑培养基上复壮，之后挑选健壮无污染的菌丝再转回PDA培养基保存。在长期保存过程中，要防棉塞受潮滋生杂菌。菌种试管口最好用蜡烫封，以防培养基内水分过快蒸发。增加琼脂用量（2.5%～3%）可减缓水分蒸发。还要防止菌种管上的标签脱落而造成种系混杂。

斜面低温保藏方法简便易行，能随时观察保藏菌株的活力和纯度，一旦染杂，肉眼能及时发现。

（二）自然基质保藏 此法是根据灰树花的特性，利用自然基质保藏其菌种的方法。灰树花是木腐菌，可以采用以木屑为主料的培养基。自然基质营养全面，且大部为缓释养分，不易产生营养过剩或饥饿；其次，培养基理化性状好，可吸收或缓冲菌丝代谢出的有害物质，水分与通气协调平衡，部分菌丝扎入基质内生长，不裸露于空气中，菌丝呼吸强度低，生命力强。

1.原料与配方 粗、细木屑比例适当，采用板栗树木屑最佳，粗木屑粒径为2毫米左右，细木屑为一般圆盘锯屑，粗、细的比例为1∶2，添加干木屑重量20%的麸皮和1%的糖，含水率为60%左右。这样的基质通气性好，营养丰富且供菌丝分解利用的时间长，长到基质内部的菌丝比包裹在基质外部暴露于空气中的菌丝耐受性强。不同粒径的基质比例适当，还能协调气与水的矛盾。粗粒过多，架空菌丝多；细粒过多，透气性差，菌丝生长慢。应用配方如下：

栗木屑78%，麸皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，装入较粗大的试管中，装料量为试管的1/3～1/2，1.5千克/厘米2灭菌1.5小时。冷却后，接入需保藏的菌种，在28℃下培养，待菌丝长满木屑培养基时取出换上无菌橡皮塞，在0～5℃冰箱内保藏1～2年转管一次。

2.容器与装量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗洁净，装量一般不超过玻璃瓶容量的3/5，填料不能过满，瓶壁所残留的颗粒须擦拭干净，否则保藏的菌种易引起污染。

3.灭菌和冷藏 灭菌时若采用棉塞封口，基质表层易失水，接种成活率低，即使菌丝复活，生长也很缓慢，所以最好采用聚丙烯膜封口，接种后换用无菌棉塞培养，待菌丝长满后再换成有孔灭菌胶塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌种经3年贮放后，接出成活率均达90%以上，出菇验证产量及子实体形态特征均无明显变化。因此，自然基质保藏法具有保存期长，菌种遗传性能相对稳定的特点。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰树花在自然状态下易发生于栗树根部，这说明其营养需求较为特殊。根据灰树花这种习性，在PDA基础上添加适量的栗树木粒制成母种培养基。在多年的使用中发现，用该培养基培养的母种生长势好，在转接原种时，适应能力强，萌发定植快；用作菌种保藏基质时，保藏时间长，并能很好保持菌种的优良性状。

1.木粒PDA的制作 选取栗树边材，加工成0.3～0.5厘米的颗粒，及时烘干或晒干备用。称取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成营养液。将营养液倒入盛有木粒的小铝锅中，营养液以完全浸没木粒为准。煮沸10分钟，以加快木粒对营养液的吸收速度，起锅静置30分钟让木粒吸足营养液。捞出木粒，沥掉表面的水，装入试管，装量为试管长的1/6，最多不得超过试管长的1/5，否则在摆制斜面时，不易使木粒均匀分散于斜面的表面上。

选取新鲜的马铃薯，去皮并切成薄片，称取200克放入小铝锅中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁热过滤取汁，并补足1升的体积。称取琼脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。先将琼脂剪碎，加入到马铃薯滤液中，继续用文火加热，使琼脂溶化。待琼脂完全溶化后，加入称好的其他3种营养成分，搅拌使这些物质溶解均匀，趁热装入已装有木粒的试管中，装至试管长的1/3处，塞上棉塞。

在0.8～1千克/厘米2蒸气压下灭菌40分，待气压降至0时，开盖取出，趁热轻轻抖拍试管，使木粒分散后即可摆制斜面，并使木粒呈半裸状分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培养基。

2.生长及保藏效果 木粒PDA斜面上培养的灰树花母种，菌丝生长迅速、良好，12天即可长满试管，但菌丝的后期生长势更为粗壮、浓密，后劲足。转接原种时，菌种适应力强，定植快。这表明，灰树花菌丝的生长速度、生长势不仅取决于本身的遗传性，而且很大程度上取决于培养基的营养。常规PDA的营养成分，主要是可溶性的速效性营养，前期营养丰富，营养利用直接，因而前期菌丝生长迅速、良好，后期营养则不足，菌丝生长不良，长势欠佳。木粒PDA由于在增添了木粒这一缓效性营养，就木腐性的灰树花而言，营养配伍合理，补充了菌丝生长后期所需的营养，因此后劲足。

菌丝体对基质的分解利用是通过菌丝细胞分泌的胞外酶，将基质中的大分子营养分解成小分子营养后才被吸收利用的，而这些胞外酶大多为诱导酶，其合成与分泌受基质的诱导和分解产物阻遏机制调节。就纤维素酶而论，许多易代谢碳源（如葡萄糖等）具有引起酶合成阻遏作用，同时伴随着菌丝体的旺盛生长，酶的大量合成则出现在易代谢碳源基本耗尽之后，且受到基质纤维素的诱导，常规PDA基质，到葡萄糖等易代谢碳源基本耗尽的后期，由于营养的缺乏，菌丝生理机能下降，酶的合成量减少。而木粒PDA不仅含有易代谢碳源——葡萄糖，又含有木粒这一缓效性营养，前期葡萄糖促进了菌丝体旺盛生长，获取了大量的菌丝体，表现为菌丝粗壮、浓密。到了易代谢碳源耗尽的后期，木粒一方面补充了后期所需的营养，使菌丝的生埋机能维持在一定的水平；另一方面木粒的纤维素激活菌丝细胞纤维素酶的诱导机制，合成了大量的酶，保持了木腐生性灰树花较强的分解木材的能力，因此，用该培养基培养的母种在转接原种时适应力强，萌发定植快。因部分菌丝长入木粒内部，抵抗不良环境的生存能力增强，种质不易退化。木粒PDA灰树花菌种，在0～5℃保藏2～3年再转管活化，成活率仍达到90%左右。此外，木粒PDA应用于木腐性灰树花种的提纯复壮，效果也较理想。

（四）石蜡隔氧封藏 具体做法是将液态石蜡分装入三角瓶内，装量达瓶空间的1/3，塞好棉塞，于121℃灭菌2小时，然后置40℃温箱中，使其水分蒸发，或置于干燥器内数日以除去水分，石蜡呈透明状为宜。在无菌条件下，用无菌吸管装入已长好菌丝的斜面试管，使液面高出斜面顶部1厘米左右。塞上无菌橡皮塞，竖直保存。此法可使菌种存活3年以上，但以1～2年移植一次为好。移植时不必倒出石蜡，用接种钩取一块菌丝即可。因转移时带有石蜡，菌丝生长弱，需要再转管1～2次，方能复壮。