㈠ 生物制片的基本步骤
一 目的：
1.学习并掌握临时装片的制作方法。
2.完成基本实验要求的基础上，依自己的兴趣，制作更多的临时装片
二 背景知识（点击展开）
三 实验内容
制作洋葱表皮细胞临时装片
四 实验用品
滴管、纱布、镊子、吸水纸、载玻片、盖玻片、清水、刀片、染液（碘液）
五 实验材料
洋葱表皮细胞、其他感兴趣的生物材料
六 实验步骤
1．擦拭载玻片、盖玻片（动画）
2．在载玻片的中央滴一滴清水（动画）（图zx-21）
3．在洋葱内表皮用刀片划出一个约1cm2的正方形（在使用刀片时注意安全），用镊子撕取洋葱内表皮（动画）（图zx-22）
4．将内表皮置于载玻片的清水中，并使之铺开（动画）（图zx-23）
5．从一侧开始慢慢盖上盖玻片，不能有气泡产生（动画） （图zx-24）
6．在盖玻片的一侧滴一滴染液（动画）
7．然后用吸水纸从另一侧吸取多余的染液，使洋葱表皮细胞均匀染色（动画）
8．显微镜下观察。（图zx-25）
染色后的洋葱细胞(示细胞核)（图）
显微镜使用的注意事项
1．搬动显微镜时，要一手握镜臂，一手扶镜座，两上臂紧靠胸壁。切勿一手斜提，前后摆动，以防镜头或其他零件跌落。
2．观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离(5cm)，以免显微镜翻倒落地。镜柱与镜臂间的倾斜角度不得超过45度，用完立即还原。
3．使用时要严格按步骤操作，熟悉显微镜各部件性能，掌握粗、细调节钮的转动方向与镜筒升降关系。转动粗调节钮向下时，眼睛必须注视物镜头。
4．观察带有液体的临时标本时要加盖片，不能使用倾斜关节，以免液体污染镜头和显微镜。
5．粗、细调节钮要配合使用，细调节钮不能单方向过度旋转，调节焦距时，要从侧面注视镜筒下降，以免压坏标本和镜头。
6．用单筒显微镜观察标本，应双眼同时睁开，左眼观察物像，右眼用以绘图，左手调节焦距，右手移动标本或绘图。
7．禁止随意拧开或调换目镜、物镜和聚光器等零件。
8．显微镜光学部件有污垢，可用擦镜纸或绸布擦净，切勿用手指、粗纸或手帕去擦，以防损坏镜面。
9．凡有腐蚀性和挥发性的化学试剂和药品，如碘、乙醇溶液、酸类、碱类等都不可与显微镜接触，如不慎污染时，应立即擦干净。不要任意取下目镜，谨防灰尘落入镜筒。
10．使用油镜观察样品后，随即用二甲苯将油镜镜头和载波片擦净，以防其他的物镜玻璃上沾上香柏油。二甲苯有毒，使用后马上洗手。
11．实验完毕，要将玻片取出，用擦镜纸将镜头擦拭干净后移开，不能与通光孔相对。用绸布包好，放回镜箱。切不可把显微镜放在直射光线下曝晒。
显微摄影操作的重要注意事项
1.摄影者对显微摄影装置的调整：包括两目镜瞳孔间距的调整和个人屈光不正的校正。前者指将两目镜的距离按个人的瞳孔间距进行调整，拉动目镜或捻转瞳孔间距调节螺旋。校正屈光时应转动目镜筒上的屈光度调节环，使物镜视野中心的“十”字由单线调成双线，达到完全清晰，并且左右眼应分别调整。每个拍摄者都不宜省略这一步。
2.物镜与摄相目镜不同组合的选择：摄影目镜除放大功能外，并不具备空间分辨功能，只有物镜才具有空间分辨力。在一般条件下，对组织切片厚度在20 μm以下者，应尽量选择较高倍物镜，例如欲放大实物50倍时，选择“20×”物镜配以“2.5×”目镜的组合方式，其清晰度比“10×”物镜及“5×”目镜的组合方式要高些。但是也要考虑切片薄厚和观察标本的特异性的问题，例如在厚度为30 μm以上的冰冻切片上，观察蜿蜒走行的神经纤维或血管时，由于较低倍物镜的焦点深度较长，有利于从不同深度、层次或角度，连续观察分析不在同一平面上走行的神经或血管影像。在这种情况下，还可将物镜与目镜不同组合多次拍摄，最终择其效果最佳者。
3.聚光器的调控使用问题：经验较少的摄影者往往缺少对聚光器高度的调节，也不知光源是否偏离视野中心。不少人只进行了物镜与组织切片间的所谓“上聚焦”，而没有进行聚光器与组织切片间的“下聚焦”，这当然也无法获得最佳清晰度的成像底片。 Kohler 照明法操做步骤如下：①将视场光阑缩至最小，使光阑叶片的通孔呈现其八角形影像；②两手分别捻转载片台下的左右定心螺丝，使光阑影像与视场中心圆圈重合，以校正光路；③调节聚光器高度，使八角形光阑影像由模糊变清晰，即“下聚焦”；④散大该光阑至135帧幅边框（指常规135型负片画幅，24 mm×36 mm）影像外周。再次微调聚光器高度，使光阑象最清晰为止。每变换一次放大倍率时，都要重复进行如上调整步骤。
4.提高摄影反差：组织结构对比反差的好坏，当然取决于组织制备技术的质量。这是提高显微摄影质量的重要环节。但是一般情况下，为了弥补切片中对比反差的不足，常可采用如下的补救措施：①按照物镜上的数值孔径值即NA值，相应地进行聚光器孔径光阑的匹配调节。一般质量优良的物镜镜头上，除标有放大倍率外，同时还标有NA值，NA值越大者空间分辨率相对越高。②如果按此法调节NA值转盘后，若由于组织制备欠佳致使影像反差仍然不足时，则可将物镜孔径光阑的NA值再适当缩小，例如10x物镜可调至0.19等。③如经过上述措施影像反差仍不好，则可将视场光阑从135（指常规135照片画幅24 mm×36 mm）边框外缩至边框内，然后在暗室扩放时，再将视场光阑影像除去。当然，上述的后两种措施，只不过是一种稍作修正的补救办法而已。
5.低倍摄影难度大：低倍摄影有其特殊优点，例如在1（物）×2.5（目）放大倍率下，可拍摄大鼠脑切片一侧全貌，对总览特异性标记物的分布有一目了然之效果，但是低倍物镜分辨力低，焦深较长，利用微调螺旋进行精确聚焦有一定难度。为避免视力的个体差异,应采取欠焦、过焦、正焦3步,聚焦不宜反复进行。
6.油浸镜头的使用：100×的物镜多为油浸镜头，然而，使用后常因镜头擦不净而使镜头受损。替代的办法是滴加超纯水或双蒸水，观察效果与香柏油差别不大。由于100×物镜镜头与切片距离极近，极易碰损镜头，必须先以40×物镜聚焦，再转至100×物镜，轻轻转动聚焦微调螺旋至焦点。为避免镜头损伤，新型100×物镜常有弹簧装置，可使镜头微动伸缩而避免其损伤。
7.其它注意事项: ①按照常规,彩色胶卷应加LBD（色温变换）滤片,黑白胶卷应加IF550（绿色）滤片。LBD滤片可使日光型彩卷获得最佳色温补偿，IF550 滤片则可使黑白卷分光感度与人眼者接近。尽管有人认为不一定需要滤光处理，但因为摄影取决于胶片的化学感光度，并不取决于人们眼睛对视野的直观感受，还是加滤光片为好。②曝光时间的选定，也是一个必需注意的问题。已知在光强与曝光时间两个参数之间，有许多不同的组合，均在曝光的“安全”范围内，但所谓的“安全”范围，并不等于最佳条件，所以作者认为限定曝光时间还是十分必要的，其道理在于胶卷化学感光度有一定限制，一个胶卷36个帧幅若随意变动曝光时间，在36张之间差异将很大，而冲洗胶卷是在同一条件下，难免有些帧幅显影不佳。依据作者的经验，曝光时间一般限定在0.5～1 s，底片的影像效果较佳。③要将重点拍摄的结构置于视场中心，因为自动曝光装置测得的曝光时间，是以视场中心区为标准，而偏离中心区越远越不准。有时为了兼顾结构局解关系，而重点结构又不在视场中心时，则可采取点（spot）曝光法。④若需将一张切片上的结构拍为几张,之后拼接时,可在New Vanox 显微摄影仪器上设有一个锁定键（lock），有利于解决这一问题，以使同一结构的几个帧幅曝光时间一致，然后在洗照片时将这组照片同时放入显影液与定影液。
㈡ 脱落细胞涂片具有哪些要求，制片方法有哪几种，分别适用于哪些标本
一、涂片前准备工作及涂片方法
1、涂片前准备工作
（1）保证标本新鲜，取材后尽快制片。
（2）涂片操作要轻巧，避免挤压以防止损伤细胞。涂片要均匀，厚薄要适度，太厚细胞堆叠，太薄细胞过少，均影响诊断。
（3）玻片要清洁无油渍，先用硫酸洗涤液浸泡冲洗，再用75%乙酸浸泡。
（4）含蛋白质的标本可直接涂片，缺乏蛋白质的标本，涂片前先在玻片上涂薄层粘附剂，以防止染色时细胞脱落，常用粘附剂为蛋白甘油，由等量生鸡蛋蛋白和甘油混合而成。
（5）每位患者的标本至少涂两张玻片，以避免漏诊。涂片后立即在玻片一端标上编号。
2、涂片制备方法
（1）推片法：用于稀薄的标本，如：血液、胸、腹水等。取离心后标本一小滴滴在玻片偏右侧端，推片用30度夹角将玻片上检液轻轻向左推。
（2）涂抹法：适用于稍稠的检液，如：鼻咽部标本。用竹棉签在玻片上涂布，由玻片中心经顺时针方向外转圈匀抹；或从玻片一端开始平行涂抹，涂抹要均匀，不宜重复。
（3）压拉涂片法：将标本夹于横竖交叉的两张玻片之间，然后移动两张玻片，使之重叠，再边压边拉，获得两张涂片。该法适用于较粘稠标本，如：痰液。
（4）吸管推片法：用滴管将标本滴在玻片一端，然后将滴管前端平行置于标本滴上，平行向另一端均速移动滴管即可推出均匀薄膜。此法亦适用于胸、腹水标本。
（5）喷射法：用配细针头的注射器将标本从左至右反复均匀地喷射在玻片上，此法适用于各种吸取的液体标本。
（6）印片法：将切取的病变组织用手术刀切开，立即将切面平放在玻片上，轻轻按印。此方法为活体组织检查的辅助方法。
二、涂片的固定
固定（fication）的目的是保持细胞自然形态，防止细胞自溶和细菌所致的腐败；固定液能沉淀和凝固细胞内蛋白质和破坏细胞内溶酶体酶，使细胞不但保持自然形态，而且结构清晰，易于着色。因此标本愈新鲜，固定愈及时，细胞结构愈清晰，染色效果愈好。
1、固定液：细胞学检查常用的固定液有下列三种：第一种乙醚酒清固定液：该固定液渗透明性较强，固定效果好，适用于一般细胞学常规染色；第二种是氯仿酒精固定液：又称卡诺氏固定液。其优点同上；第三种是95%酒精固定液，适用于大规模防癌普查。制备简单，但渗透作用稍差。
2、固定方法
（1）带湿固定：涂片后未待标本干燥即行固定的方法称带湿固定。此法固定细胞结构清楚，染色新鲜。适用于巴氏或HE染色。痰液、阴道分泌物及食管拉网涂片等常用此方法。
（2）干燥固定：涂片后待其自然干燥，再行固定。适用于稀薄标本如尿液、胃冲洗液等，也适用于瑞特染色和姬姆萨染色。
3、固定时间：一般为15-30min。含粘液较多标本，如痰液、阴道分泌物、食管拉网等固定时间应适当延长；尿液、胸、腹水等涂片不含粘液，固定时间可酌情缩短。
三、涂片的染色
1、染色的目的和原理：染色的目的是借助于一种或多种染料，使组织和细胞内结构分别着不同的染色，这样在显微镜下能清楚地观察细胞内部结构，作出正确判断。
组织细胞染色原理至今尚无满意的解释，可能是物理作用，也可能是化学作用，或者是两者综合作用的结果。
染色的物理作用是利用毛细管现象，渗透、吸收和吸附作用，使染料的色素颗粒牢固地进入组织细胞，并使其显色；染色的化学作用是渗入组织细胞的染料与其相应的物质起化学反应，产生有色的化合物。
各染料都具有两种性质，即：产生颜色；征收被组织形成亲和力。这两种性质主要由发色基因和助色基因所产生。发色基团：苯的衍生物具有可见光区吸收带。这些衍生物显不出吸收带与其价键的不稳定性有关，如对苯二酚为无色，当其氧化后失去两个氢原子，它的分子或则变为有黄色的对醌，这种产生颜色的醌式环称为发色基团。若一种化合物含有几个环，只要其中有一个醌式环就会发出颜色，称此发色基团为色原（chromogen）。助色基团：是一种能使化合物以生电离作用的辅助原子团（酸碱性基团）。它能使染色的色泽进一步加深，并使其与被染色组织具有亲和力。
助色基团的性质决定染料是酸性碱性。碱性染料具有碱性助色基团，在溶媒中产生的带色部分为带正电荷的阳离子，吻与组织细胞内带负电荷的物质结合而显色。如细胞核内的主要化学成分脱氧化核糖核酸易被苏木素染成紫蓝色，称嗜碱性。酸性染料具有酸性用力色基团，在溶酶中产生带色部分为阴离子，易与组织细胞内带正电荷部分结合而显色，此性质被称为嗜酸性，如细胞浆内订成分为蛋白质，易与伊红或橘黄结合呈红色或橘黄色。
2、常用染色方法：临床日常工作中较为常用的染色方法有下列3种：
（1）巴氏染色法：本法染色特点是细胞具有多色性颜色，色彩鲜艳多彩。涂片染色的透明性好，胞质颗粒分明，胞核结构清晰，如鳞状上皮过度角化，细胞质呈橘黄色；角化细胞显粉红色；而角化前细胞显浅绿色或浅蓝色，适用于上皮细胞染色或观察阴道涂片中激素水平对上皮细胞的影响。此方法的缺点是染色程序比较复杂。
（2）苏木精—伊红（he
㈢ 组织学教学标本常用的制片技术是
课堂学习过程中基本组织形式，就是指教师采用一定的方式，运用一定的协调机制等来组织而形成的课堂学习活动的过程模式。例如有：
（一）环套式的组织形式
指通过教师编制一整套的、系统的、层层递进式的问题（问题情境），以此来引导学生不断地去探索、发现，直至问题的解决。
例如，在课堂学习两位数乘法（例题：17×32）是，教师就可以通过下列一组问题来引导学生思考：①17×32表示什么？能否用算式表示？②第一步先算什么？为什么先算17×30？③再算什么？两个结果怎样相加？④怎样用竖式相加？为什么这样对？找到什么规律？
（二）回旋式的组织形式
指通过教师编制的一个引导学生对问题情境的探索、思考与发现的系统，来组织学生的学习。并且这个系统不是直线式的，而是一个循环式的回路系统。在这个系统中，“情景①”和“情景②”之间构成一个不断比较、探索、思考和修正的回路，而“情景②”与“情景③”又构成了一个不断比较、探索、思考和修正的回路。如此往复不断地通过尝试、比较、修正，来逼近问题目标。
㈣ 生物制片方法有哪些主要包括哪些步骤
生物制片的方法主要包括动物或者是植物细胞的制片，有永久装片也有一些切片图片还有其他的一些装片。不同的装片方法是不一样的。
㈤ 【高中生物】求列举高中生物常见的临时装片的制片方法，和它与永久装片的主要区别，谢谢^ω^
一个盖片一个不盖片 印象中这样
㈥ 比较各种制片方法的特点,分析各种制片方法分别适用哪类放线菌
摘要
㈦ 植物组织器官中主要制片方法有哪些
保护组织位于植物的植物体幼嫩的根、茎、叶、花、果实的表面、直接接触外界环境的细胞层
而输导组织则是贯穿于植物体的根
茎
叶等器官为他们提供营养
掐去一根枝条的顶端就不会向上长了
因为植物生长靠的是细胞分裂，顶端的分生组织被破坏，就不
㈧ 液基TCT有哪些制片方法怎样选择液基试剂与制片设备
液基TCT制片方法大致可以分为：1、离心式制片；2、膜式制片；3、沉降式制片；4、离心沉降式制片；5、手工制片。这些制片方法与使用的耗材有不同，康乃欣生物有适合不同制片方式的液基TCT试剂与配套液基制片机。
㈨ 几种生物制片方法各适宜观察什么生物样品
装片：可观察从生物体上取下来的细胞（如口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶内表皮细胞）或个体微小的生物如衣藻、水绵、水螅、青霉结构
切片：用于观察用特制刀具把生物体的组织或矿物切成的薄片,如叶片切片（观察叶片结构气孔等结构）
切片：用于观察悬液状态的生物材料,如人的血液血细胞的观察
㈩ 冰冻切片，he是最常见的制片和染色方法吗
冰冻切片，HE的确是最常见的制片和染色方法
冰冻切片HE苏木素伊红染色步骤
切片固定30秒到1分钟。
水洗。
染苏木素3到5分钟。成熟苏木素制作，加入碘酸钠0.2g碘酸钠每1L苏木素。
分化。
于碱水中返蓝20秒。
伊红染色10到20秒。
脱水，透明，中性树胶封固。