血清学常用方法

① hpv检测有哪些常用的方法呢

随着HPV疫苗的上市，人们对HPV也越来越 重视。那目前应该用什么方式去筛查HPV?

人乳头瘤病毒(HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖.目前已分离出130多种，不同的型别引起不同的临床表现。

不同型的HPV所引起的疾病不同，目前的筛查方法，建议使用基因检测，可以明确感染是哪型的HPV，可以做相应的干预，也对自己的身体状况有比较清楚的认知。

② 猪病常用的血清学诊断方法有哪些

抗原和相应的抗体在动物体内或体外都能发生特异性结合反应，这种反应称为抗原抗体反应，习惯上把体内的抗原抗体反应称为免疫反应，体外的抗原抗体反应称为血清学反应，因为抗体主要存在于血清中。

血清学反应可以用已知的抗体检查未知的抗原，也可用已知抗原测定未知的抗体。人们根据抗体能与相应抗原发生反应并出现可见的抗原—抗体复合物的原理，设计了许多血清学诊断方法，不仅可以检测动物体内乃至体外的病原微生物，或其抗原性成分，而且还可以测定动物机体对病原微生物的侵袭或对其抗原成分的免疫反应。在抗原—抗体复合物成不可见状态时，可以通过琼脂扩散、凝集实验以及酶标记等指示系统，使其变为可见或可测状态。

目前已知的血清学诊断方法很多，现仅介绍几种在目前条件下规模化猪场通过学习都能做到的诊断方法：

（1）凝集试验猪病诊断过程中常用的操作方法有以下几种：

①全血平板凝集试验实践中主要用于细菌性疾病的抗体检测和抗原（经分离培养后）的鉴定。现举例用已知猪丹毒抗原（丹毒杆菌的纯培养液）测定被检猪血清中的抗体。其操作步骤如下：

a.材料猪丹毒凝集抗原，玻片，9号针头，酒精棉球，酒精灯，铂耳（取血环）等。b.操作用铂耳取已知抗原1滴，置于玻片上。用酒精棉球擦拭针头，铂耳在酒精灯上灼烧消毒。用针头刺破被检猪的耳静脉，以铂耳取血与玻片上的抗原等量混合，在2～3分钟内观察结果。c.结果判定出现颗粒状的凝集，为阳性反应。否则为阴性。

②试管凝集试验是一种定量法，用于测定被检血清或其他体液中有否某种抗体及其效价，可做临床的辅助诊断，或用于流行病学监测。在猪场中，本法常用于猪布氏杆菌病的诊断。

A.材料布氏杆菌病试管凝集抗原（1∶20倍稀释），布氏杆菌病阳性血清、阴性血清（1∶25倍稀释），稀释液（0.5 %石炭酸生理盐水），灭菌小试管，1毫升吸管，试管架，待检血清等。B.操作取试管7支置于试管架上，设阳性和阴性血清及抗原对照各1支，测定管4支，以后每增加1个样品，只需增加4支测定管。

按表10示意稀释血清，加抗原，完成后每支试管内应含1毫升液体。

③ 免疫学检验常用技术有哪些

以下是几种常用的免疫学技术：
1．免疫荧光技术
免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体（或抗原）检测组织、细胞或血清 中的相应抗原（或抗体）的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点，因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。根据荧光素标记的方式不同，可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。间标荧光抗体中一抗并不直接连接荧光素， 而是先将一抗结合到蛋白，然后带有荧光素的二抗再结合至一抗。通过二抗的结 合，能将信号进行放大，因此能在一定程度上提高检测的灵敏度，但是随之带来 的高背景也降低了检测的特异性。近年来，随着荧光素和荧光检测技术的不断进 步，荧光检测的灵敏度已经接近同位素检测的水平，直接标记的荧光抗体逐渐取 代间接标记抗体。这些标记了荧光素的抗体直接结合至抗原，大大提高了检测的 特异性，使检测的结果更加准确可靠。荧光检测技术的发展，使得免疫荧光技术 在传染病诊断上有广泛的用途，如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病，检查IgM 抗体，做为近期接触抗原的标志。利用单克隆荧光直接标记抗体鉴定淋巴细胞的 亚类。通过流式细胞仪，针对细胞表面不同抗原，可以同时使用多种不同的荧光 抗体，对同一细胞进行多标记染色。
2．放射免疫检测
放射免疫检测技术是目前灵敏度最高的检测技术，利用放射性同素标记抗 原（或抗体），与相应抗体（或抗原）结合后，通过测定抗原抗体结合物的放射 性检测结果。放射性同位素具有pg 级的灵敏度，且利用反复曝光的方法可对痕 量物质进行定量检测。但放射性同位素对人体的损伤也限制了该方法的使用。

3．酶联免疫吸附试验（ELISA）
酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法。该方法是将二抗标记上 酶，抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来，根据酶作用底物后的 显色颜色变化来判断试验结果，其敏感度可达ng 水平。常见用于标记的酶有辣 根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶（AP）等。由于酶联免疫法无需特殊的仪器， 检测简单，因此被广泛应用于疾病检测。常用的方法有间接法、夹心法以及BAS －ELISA。间接法是先将待测的蛋白抱被在孔板内，然后依次加入一抗、标记了 酶的二抗和底物显色，通过仪器（例如酶标仪）定量检测抗原。这种方法操作简 单但由于高背景而特异性较差。目前已逐渐被夹心法取代。夹心法利用二种一抗 对目标抗原进行捕获和固定，在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性。近 年来，抗原的定量检测技术也不断推陈出新。近年来，在夹心法ELISA 的基础上， 开发了多抗原检测试剂盒，能同时检测微量液相样本中多个抗原含量。这项技术 的应用大大缩短了诊断的时间，提高诊断的可靠性和及时性。
4．免疫金胶体技术
胶体金技术经过30 多年的发展到现在已日趋成熟，该方法是将二抗标记上 胶体金颗粒，利用抗原抗体间的特异性反应，最终将胶体金标记的二抗吸附于渗 滤膜上，此方法简单，快速，广泛应用于临床筛查。

④ 梅毒血清学检查的方法有两种，有什么不同

引言：梅毒血清学检查一般分为特异性抗体检查以及非特异性抗体检查。特异性抗体检查一般是应用TPHA及TPPA两种方式，非特异性抗体检查一般是应用RPR及TRUST试验两种方式。两种方式有什么不同，我们来了解一下吧。

三、什么是梅毒？梅毒症状是什么样的？

梅毒是梅毒螺旋杆菌感染，会引起的一个性传播疾病，大多数人没有症状。一期梅毒三周以后自愈，二期梅毒也会自愈，会出现三期梅毒，后果十分严重。梅毒要及早治疗，然后需要洁身自好。梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病。主要通过性途径传播，临床上可表现为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏梅毒和先天性梅毒。一期梅毒主要表现生殖器附近单发或散发数个浅溃疡，或腹股沟淋巴结肿大，但相当一部分患者没有任何症状而直接进入下一期。二期梅毒的皮疹是个万能的模仿者，它可以与任何一种皮肤病相似，诊断需专科大夫的经验，当然此时仍有相当一部分人没有任何症状。三期梅毒未经治疗的梅毒病人会发生活动性晚期梅毒，除皮肤黏膜表现外，会侵犯关节、骨骼、眼、心血管、神经系统等任何一个脏器，严重危害患者健康。

⑤ 血清中禽流感抗体含量的检测方法

禽流感是由A型流感病毒引起的一种高度接触性传染性疾病。给世界养禽业造成了巨大的经济损失。禽流感病毒可分为不同的亚型，世界各地的禽流感主要由高致病性的H5和H7两种亚型引起，而人对其中的H1和H3亚型易感。快速诊断禽流感病毒具有重大意义。目前禽流感的实验室检测是比较快速、准确的方法。随着血清学实验技术和生物工程技术的飞速发展，禽流感诊断技术的研究也不断取得新进展。琼脂扩散试验、血凝和血凝抑制试验等常规方法的使用虽有一定的优势，但免疫荧光法和ELASA也日益显示出其快捷准确的特点：分子生物学的发展为核酸序列分析法的建立创造了条件,也使PCR，RT－PCR及核酸探针等检测技术成为可能。这篇文章就是对有关该病的诊断方法加以总结，并提出了认为比较可行的改进方法，旨在方便对禽流感做出及时而有效的诊断并采取相应措施。

1. 病毒的分离鉴定

无菌采集病料经处理后接种9－11日龄鸡胚，收取尿囊液测定血凝活性。若为阴性则应继续盲传2－3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫(ND)抗血清做血凝抑制(HI)试验!以排除ND感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异核心抗原，核糖蛋白(NP)或基质蛋白(MP)，再用血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验鉴定A型流感病毒亚型。分离鉴定的同时进行致病力试验，确定毒力强弱。但是流感病毒“O”相毒株不凝集鸡红细胞，故近来在流感病毒鉴定中常用豚鼠或人红细胞来代替。然而，该两种细胞无细胞核，沉积慢，一般在红细胞凝集及凝集抑制测定中需60分钟才能观察结果，同时在“U”型孔板中，很难沉积成像眼泪样的点即当中常有小空[1]。

病毒的分离鉴定对禽流感的诊断比较确实,但操作程序繁琐、费用多、耗时费力。

2. 血清学诊断技术

2.1 琼脂扩散(AGP)试验

进行病毒抗原型特异性鉴定即用已知阳性血清和末知抗原进行AGP试验。

受检样品是具有血凝素活性的鸡胚尿囊液。AGP是用来检测A型流感病毒群特异性血清抗体，即抗核糖蛋白(RNP)和基质蛋白(MP)抗体，因而适用于鉴定流感病毒 。1979年Beard首次将AGP用于禽流感抗体检测[2]。

此法虽简单易行，但是敏感性较差，易出现假阳性。AGP最常用的是免疫双扩散，赵增连、陈海燕等分别开展了禽流感病毒快速定型双扩散法的研究，不仅提高了其敏感度，且快速省时，在此方法基础上建立的AGP诊断技术及其诊断试剂盒，在全国范围内得到推广应用，并取得良好的效果。

2.2 血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)

一般情况下，新分离毒株要先鉴定出特异性NP或.MP抗原型(用AGP)确定禽流感病毒，再做HA亚型的鉴定[3]。

现已有人采用改进HA试验方法，称为HA加敏法。该法测抗体效价比常规性高2－4倍，若抗原用乙醚裂解其敏感性比常规法高4－6倍，但观察时以30min内为好，否则易出现假阳性。另外，还应注意在HI试验时，应先除去特异性凝集反应。许多禽类血清都含有非特异性因子，能和红细胞表面受体竞争性地作用于病毒表面的血凝素而发生非特异性凝集反应。通常用受体破坏酶(RED)即霍乱菌培养液处理法或高碘酸钠法制备血清[4]。

HA、HI 特异性好，是亚型鉴定的常用方法，但其操作过程繁琐费时，并且由于用已知HA亚型的抗血清不能检出新的HA亚型的禽流感病毒，所以用该方法鉴定不如琼脂扩散实验简便和快捷。

2.3 神经氨酸酶抑制试验(NIT)

根据A 型流感病毒的表面抗原特性,特别是血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)特性，不仅可通过HI试验对病毒进行坚定，而且可通过NI试验进行鉴定。1983 R.A.Van.Densen介绍了NI试验的一种改进法－平板微量NI试验，此法虽不能提供常量法的定量，但却是A型流感病毒的病毒分类和抗体检测的快捷方法， 试验证明微量NI试验能对分离物做出准确鉴定而常量NI试验检测亚型混合物似更敏感[5]。

目前国家兽医实验所已将微量NI试验列为流感病毒分离物定型及筛选畜禽血清9型NA抗体的常规方法，诊断中也已广泛采用此法特别是美国在80年代火鸡发生流感病毒期间，每次流行所得的血清样本用微量NI试验所作出的A型流感病毒亚型鉴定结果已为病毒分离、疫苗接种和流行病学资料所证实。这种方法已被证明是快速的且成本较低和有可重复性。这种技术的可靠性将导致NI试验的广泛应用。

2.4 中和试验(NT)

病毒中和实验技术是反映机体抵抗特定病毒感染能力的最可靠方法。流感病毒中和实验技术有以下优点：（1）由于中和抗体作用于流感病毒表面血凝素蛋白（HA），使流感病毒失去感染能力，因此，流感病毒中和实验主要用于检测血清中的特异性抗血凝素蛋白抗体。（2）流感病毒中和实验既能检测病毒株的功能性变化，又能反映机体的抗病毒水平。（3）该方法主要使用感染性病毒，不需要进行病毒或病毒蛋白的纯化，因此，可以被迅速用于检测新病毒或人群免疫状态[6]。

以中和试验(NT)来鉴定或滴定流感病毒时常用鸡胚或组织培养细胞，操作方法与其他病毒(如NDV)的中和试验相同。病毒中和实验技术是一个相当复杂的过程，参与中和反应的因素有病毒、抗血清和宿主细胞。这些因素的变化都会影响中和实验的结果。因此，对中和实验的整个过程进行严格的质量控制。每次测定必须设立阳性和阴性血清对照，阳性和阴性细胞对照，以及对病毒使用剂量进行滴定。

NT试验是最敏感而特异的血清学方法，只有抗体与病毒颗粒上的表面抗原相对应，特别是与吸咐到宿主细胞上的病毒表面抗原相对应，才能在实验中取得满意的显示效果。 因此，某一个血清型的中和试验抗体只与同组内地其他病原表现出有限的交叉反应。病毒中和试验操作繁琐耗时费料，临床上几乎不用。但作为经典方法在病毒鉴定中起着重要作用，许多新的检测方都要与之为标准进行比较[7]。

2.5免疫荧光技术(IFT)

免疫荧光技术就是荧光抗体技术(FAT)。 IFT早在1961年就开始用于人类流感的快速诊断。1984年滨西法尼亚州爆发禽流感时，Skeeles将IFT首次用于AIV的检测。IFT最早用于病毒的鉴定和定位病毒感染细胞中特异性抗原。主要是核内荧光:用MP抗原的荧光抗体主要出现胞质荧光，核内也有部分荧光[8]。

用于禽流感病毒的诊断常用直接荧光抗体法即在组织触片上直接染色，以荧光显微镜检查荧光 。一种AIV的荧光抗体可用来检测不同亚型的其他病毒。

IFT用于诊断具有快速、简便、敏感性好的特点，而且费用较低，其敏感度同病毒的分离鉴定相当，有时高于用鸡胚进行的病毒分离。但是需要注意的是如何避免和降低标本中出现的假阳性(非特异性荧光)问题。

对一株杂交瘤细胞分泌的流感病毒的单克隆抗体进行检测时，发现间接固相免疫荧光技术的敏感性比HI 高40－150倍。间接免疫荧光技术也可以用来检测核蛋白(NP)基质蛋的(MP)抗原与抗体的反应，其敏感性很高。但对抗原制备要求较高，需用非离子型去污剂对纯化的病毒粒子进行裂解[9]。

2.6 酶联免疫吸附法(ELISA)

ELISA的基本原理是：酶结合物与相应抗体或抗原特异性结合，再遇酶底物时，在酶的强烈催化下使原来无色的底物产生化学反应，即形成有色的产物，便可用肉眼或分光光度计定量检测其含量。该方法具有特异性、敏感性、快速性和简易性等优点。在流感病毒微量中和实验中，酶结合物（HRP标记的羊抗鼠IgG抗体）与存在于MDCK细胞膜上的病毒核蛋白抗原-核蛋白单克隆抗体复合物结合，HRP酶催化OPD，使无色底物形成橙黄色化合物，再由ELISA检测仪测定吸光度值，从而获得中和抗体滴度[11]。

1974年Jenning等首先用ELISA对注射流感病毒所产生的抗体消长规律进行了检测。Lanbre认为ELISA的敏感性远高于HI补给结合反应 。Meulemans(1987)对ELISA、AGP、HI检测AIV抗体进行了比较研究。发现AGP和ELISA一样均能检测型特异性抗原(抗体)，但敏感性远低于ELISA，HI适用于亚型的检测，其敏感性不如ELISA。1993 年Shodihall用混合纤维素脂膜或硝酸纤维素膜代替微量反应板，建立了快速诊断的DAS－ELISA大大缩短了诊断时间，并可保留ELISA的特异性、敏感性，其结果又不需要特殊仪器分析、可用肉眼判定。

随着分子生物技术的发展，中国农业科学院哈尔滨兽研所的李海燕等用表达禽流感病毒核蛋白的杆状病毒感染S9昆虫细胞，以其表达产物制备抗原，建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接(重组核蛋白)ELISA诊断技术(rNP－ELISA)确定了其最适工作条件，并对3138份鸡血清进行了检测。实验证明rNP－ELISA与全病毒间接ELISA(AIV－ELISA)，AGP及HI的符合率分别为99.9%、97.8%、98.8%，并能100%检出AGP阳性及疑似HI阳性的血清样品。 这证明了rNP－ELISA是检测A型禽流感病毒血清特异性抗体的一种特异、敏感、微量、快捷、经济的血清学诊断技术[11]。

ELISA方法的敏感性和特异性与抗原的纯度直接相关 。1984年Abraham等报道了抗原快速提纯法，所需时间比常规法缩短10倍，并且研究结果表明应用提纯抗原几乎全部排除了假阳性反应。

目前美国Kiregard Reery和Labortories有试剂盒出售。ELISA成为AI流行病学普查及早期快速诊的最有效和最实用的方法。

3 分子生物学技术

近年来，随着现代生物技术的发展，分子生物技术已被大量应用于禽流感的快速诊断。

3.1聚合酶链反应(PCR)及反转录---聚合酶链反应(RT—PCR)

PCR是近来发展成熟起来的一种体外基因扩增技术，能在数小时内使DNA呈指数增加。已成功地用于多种病毒的基因检测和分子流行病学调查等其检测原理为：寻找传染性因子的特异DNA序列。对待测样品进行PCR扩增， 如果检测出了相应的扩增带，则判为阳性反应；反之，无扩增带则为阴性反应。

鉴于引起致病的禽流感病毒多是H5和H9血清亚型，在PCR技术的基础上，崔尚金等(1998)建立了一种直接检测禽粪样和鸡胚尿囊液中AIV—H9亚型RNA的RT－PCR反应，并将此法与AGP和电镜技术作了比较，结果表明引物的特异性决定了产物的特异性，并且该方法灵敏度高，检测过程仅需8h左右，并且大大缩短了感染后的检出时间。

应用毛细管PCR(15min30个循环)代替常规PCR(2.5个小时30个循环)以进一步缩短检测时间的研究也已展开并进入更深入的领域，以期用于不同样品(组织、组织液、分泌液、粪便等)的检测，区分高致病力毒株和低致病力毒株与非致病力毒株，从而深入探讨该方法在AIV的临床早期诊断，流行病学调查及发病机制中的应用价值，为我国制定AIV的综合防制措施做出贡献[12]。

3.2 核酸探针技术/核酸分子杂交技术

这项技术是目前生物化学和分子生物学研究应用最广泛的技术之一，是定性和定量检测特异DNA或RNA的有力工具。

核酸探针技术的原理，在进行杂交时，用一种预先分离纯化的已知DNA或RNA序列片段去检测末知的核酸样品，对作检测用的已知DNA或RNA序列片段加以标记的片段就称为核酸探针。作为核酸探针的DNA或RNA是各种病原微生物基因的一部分。 在变性分开的待检DNA或RNA单链中加入与其有互补作用的核酸探针。探针在一定条件下就能与原来变性分开的DNA或RNA单链上的互补区段形成氢键，从而结合成杂交双链，通过洗涤，除去未杂交上的标记物，然后进行放射自显影，即可确定原待检样品有无与探针互补的DNA或RNA序列。

Bashiruddin等(1991)报道了扩增HA基因来分析致病毒株与非致病毒株的差异，证实了致病毒株与非致病毒株氨基酸的差异，显示了本方法的应用前景[13]。

3.3荧光PCR法

利用生物学手段，用荧光PCR方法快速检测禽流感病毒的方法已在北京通过专家鉴定，这一研究成果不仅在国内属于首次，而且在国际上也属于先进水平。它与国际标准方法鸡胚病毒分离相比，不仅无需做鸡胚病毒分离培养，而且时间也由原来最短的21d缩短为4h。

4 电镜技术

由于流感病毒为正粘病毒，属于形态特征性强的病毒,因而可用电镜技术来诊断。为提高禽流感的检出率，除样品制备技术外，取病料的部位和时间也是获得准确检验结果的关键。病料的采集部位及取材时间应根据禽流感病毒在动物体内分布特征及其感染特性而定[15]。

5 流感实验室检测中应注意的若干问题（高致病性流感病毒）

（1）禁止在同一实验室，更不应在同一接种柜中，同时处理接种未知临床标本、已知阳性标本

（2）禁止在同一实验室，同一时间处理，接种采自不同动物的标本；动物标本（如禽、猪等）必须与人的标本分别保存。

（3）接种后剩余原始标本，尤其分离出病毒的标本需暂时冻存，有条件的应置-70℃或以下保存，以便需要时可进行复查，待分离物经国家流感中心鉴定完后方可处理掉。分离阴性的标本应随时弃之。

（4）严禁实验室交叉污染：在病毒分离时严禁设阳性对照及操作在人群中已消失的流感病毒。

（5）向国家流感中心送毒株时，量至少需5 ml，同时需自己保存一些，以便寄送过程发生意外时可继续补送。

（6）流感病毒在-20℃～-40℃ 时不稳定，故不宜在此温度下长期保存。

（7）鸡胚中分离出的流感病毒，应尽量别在MDCK细胞上传代。因当今国内所用的MDCK细胞属肿瘤细胞系，一旦病毒通过它传代就无法用于疫苗制备。

（8）寄送毒株时一定需附上送检表。寄送毒株需及时，尤其鉴定不出的，异常的毒株应尽快向国家流感中心寄送。寄送时用快速直送国家流感中心[16]。

总结

使用常规方法检测禽流感及其抗体仍是目前世界上普遍接受的方法。这些方法包括病毒的分离、琼脂扩散实验鉴定病毒和测定特异性的血清抗体，血细胞凝集及其抑制试验鉴定病毒或血清抗体亚型。 采用鸡胚中和试验来鉴定病毒或血清抗体亚型也是一种可以接受的方法，但相对血凝抑制试验较为麻烦。随着科学技术的发展，检测该病毒和血清的方法出现了免疫光法和ELISA法，这些方都有快捷的特点，特别是日益完善并趋向成熟的ELISA检测方法,因其简捷、敏感、特异性强等优点而越来越得到广泛的重视和应用。随着分子生物学的发展，核酸序列分析法越来越可能成为一种更准确可行的方法,特别是它能从分子生物学的发展，核酸序列分析法越来越可能成为一种更准确可行的方法，特别是它能从分子水平揭示HPAIV甚至潜在HPAIV毒株。这种方法虽然在一般实验室还不能应用,但RT－PCR技术为从基因水平检测禽流感病毒RNA提供了灵敏、特异和快捷准确的方法。正在进行的应用毛细管PCR代替常规PCR，以进一步缩短检测时间的研究和根据禽流感NP的高度保守性而建立的rNP－ELISA检测法，不仅具有与AGP、HI同样的特异性，而且具有更高的灵敏性，可在微克水平上进行检测!都是很有前途的方法。将rNP－ELISA检测技术及其成套的成品试剂组装成诊断试剂盒，也取得了很好的实验效果。

在以上各种检测方法及科学技术发展的基础上，将PCR技术与ELISA技术结合起来，建立一种新的实验室检测AIV的方法，将有较大的研究价值其实。其实验原理（以此类方法中最简单的双引物双标记法为例）如下：

PCR的一对引物中!其中一种引物用生物素标记，另一种引物用地高辛标记，酶标微孔板上用生物素的亲和素包被(生物素的亲和素与生物素特异的结合)。PCR扩增后纯化片段加入微孔板中。此时，微孔板上包被的生物素亲和素将与引物上的生物素结合而捕捉了PCR片段，再在微孔板中加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体，该抗体将与另一引物上的地高辛结合，从而形成生物素亲和素－生物素－PCR片段地－高辛－抗地高辛－酶的复合物。加入酶的相应底物进行显色，便可判断PCR扩增的有无。由于该方法是PCR技术和ELISA技术的结合，所以它是一种两级放大系统,即PCR放大和ELISA放大。故而它的灵敏度更高，同时这种方法避免了PCR产物分析时的电极及染色过程，所以更为快捷、简便、灵敏。

⑥ 简述血清学实验的影响因素。

（1）电解质：常用生理盐水，促进可见现象的发生。
（2）温度：适宜的温度可增加抗原、抗体活性及相互接触的机会。
（3）pH：pH=6-8较合适；pH=5-5.5，非特异性沉淀；pH=2-3，解离。
（4）振荡：振荡加速反应；但过速可解离。
（5）杂质：蛋白质、脂质、糖类杂质时，抑制反应进行或引起非特异性反应。故试验设立对照。

⑦ 梅毒检测方法有哪些

梅毒检测方法有哪些 ？很多人在性生活方面没有节制，或者不注意卫生，很容易的被梅毒盯上。而梅毒感染之后不会立刻发病，而是有一定的潜伏期。那么，梅毒检测方法有哪些？

梅毒检测方法有哪些

梅毒是由苍白螺旋体所引起的一种慢性传染病，有先天性和获得性两种，主要是由于不洁性交引起的。梅毒的表现极为复杂，几乎可侵犯各种器官组织，早期主要侵犯皮肤和黏膜，晚期主要侵犯心血管和中枢神经系统。梅毒可通过胎盘传给下一代，导致胎儿先天梅毒。

诊断梅毒，除病史和临床表现外，还需要通过病原体检查和梅毒血清检查来确诊。梅毒血清学检查的方法有两种，分别是非梅毒螺旋体试验，和梅毒螺旋体试验。

所有孕妇均应在首次产前检查时进行梅毒血清学筛查。首先用上述两种血清学方法中的一种进行筛查，若结果呈阳性，需立即用另一种方法进行验证。结合病史和临床表现，可以确诊梅毒。

梅毒血清学检查的方法有两种：

①非梅毒螺旋体试验：包括性病研究实验室试验(VDRL)和快速血浆反应素试验(RPR)等，可行定性和定量检测。此法用于筛查和疗效判断，但缺乏特异性，确诊需进一步作螺旋体试验。

②梅毒螺旋体试验：包括荧光螺旋体抗体吸附试验(FTA-ABS)和梅毒螺旋体被动颗粒凝集试验(TP-PA)等，测定血清IgG抗体。由于该抗体终身阳性，故不能用于观察疗效、鉴别复发或再感染。

孕妇在进行梅毒血清学检查时，首先用上述两种血清学方法中的一种进行筛查，若结果呈阳性，需立即用另一种方法进行验证。若两者均呈阳性，结合病史及临床表现，可以确诊梅毒。

梅毒血清试验注意事项

梅毒血清试验是用于梅毒疾病的诊断试验。妊娠梅毒不但能给孕妇健康带来影响，更能影响胎儿发育，导致流产、早产、死胎等严重后果。即使妊娠能维持到分娩，所生婴儿患先天性梅毒的几率也很高。有些胎儿虽然发育正常，但在通过产道时，仍有可能与生殖器病损接触而感染。

未经治疗的早期妊娠梅毒妇女，大部分胎儿会成为先天性梅毒儿。大部分潜伏期梅毒妇女的胎儿在幼儿期会成为先天性梅毒儿。

实施产前梅毒筛查可及时发现孕产妇人群中的梅毒感染者，对于选择和采取各种有效的干预性预防措施，阻断或降低梅毒母婴传播的发生，提高优生优育的水平，具有十分重要的意义。

产前梅毒筛查和对妊娠梅毒进行规范的治疗及随访，可以防止90%以上的先天梅毒的出现，与此同时还进行性伴通知，使性伴得以治疗，最终可以减少传染源，切断传播途径，杜绝先天梅毒的发生。特别的需要注意梅毒血清试验的事项：

1、备孕女性应在孕前做一次梅毒血清试验，若没有进行产前检查或检查时间已经超过三个月，则怀孕后需及早做梅毒血清检查。

2、做梅毒血清试验会抽取孕妇肘关节静脉血检查，不需要空腹。一般上午抽血下午出结果，下午抽血第二天上午出结果。

3、梅毒血清学检查是诊断梅毒的重要依据，但不是唯一依据。诊断梅毒，除依据化验结果外，更重要的依据是详细了解患者的生活史和既往病史，以及详细的体查。综合分析后慎重作出判断，才能避免梅毒化验结果假阳性造成的误诊。

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⑧ 猪传染性胃肠炎治疗方法

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性、传染性肠道疾病。此病多发生在冬末春初，传播很快，在同一疫区，所有猪都可感染，2～3周龄以下的仔猪会出现大批死亡，5周龄以上的猪发病后死亡率很低。

治疗治疗猪传染性胃肠炎，原则以补液、防止酸中毒、防止继发感染为治疗原则，首先对患猪禁食，一般禁食2～3天。但在此期间，应让猪自饮补液（氯化钠3.5克，碳酸氢钠2.5克，氯化钾1.5克，葡萄糖20克，加温水1000毫升）。口服四环素、磺胺、黄连素、高锰酸钾等防止继发感染。

⑨ 化验室检验系统包括哪些方面的内容

答案如下：

1、该仪器程序采用目前流行的VC6.0语言编制而成，各种功能的操作及显示均采用在主屏幕上弹出所需功能窗口的做法，使操作者感到层次清楚、一目了然。

（1）微生物学检查。
病料涂片镜检：对于一些具有特征性形态的病原体，比如曲霉菌、巴氏杆菌、葡萄球菌等，通过取有显着病变的特定组织器官作的涂片和染色镜检作出初步诊断。
用病料直接制作触片或涂片镜检的方法较简单，但因为细菌太少，常难以观察到。有条件时应将病料接种到培养基上进行培养，然后用培养物涂片镜检。这样不仅能观察到大量细菌，还可根据培养后细菌菌落大小、形态、颜色来鉴别细菌。
分离培养和鉴定：用人工培养的方法，如用鸡胚、组织培养及人工培养基培养等，将病原体从病料中分离出来，并进一步对所分离的病原体进行形态学、培养特性、生化特性检查和动物接种以及血清学检查等作出准确的鉴定。
动物接种实验：将分离或可疑的病料接种于易感的实验动物，如雏鸡，小白鼠，豚鼠等，根据接种动物所出现的临床症状和病理变化等特征来进行诊断。
血清学诊断：血清学诊断是利用抗原和抗体之间的特异性反应来进行疾病确诊。该法具有高度的特异性和敏感性。可用已知抗原或抗体测未知的抗体或抗原，是传染病的重要诊断方法。常用的血清学方法有凝集反应、琼脂扩散反应、中和试验和免疫荧光抗体技术等。