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在培养基纯化细菌最常用的方法

发布时间:2023-02-02 14:43:12

① 细菌培养的方法有哪些

根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。

1、一般培养法:将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18-24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。少数生长缓慢的细菌,需培养3-7天直至一个月才能生长。

为使培养箱内保持一定湿度,可在其内放置一杯水。培养时间较长的培养基,接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固,以防培养基干裂。

2、二氧化碳培养法:某些细菌,如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空气中才能生长,尤其是初代分离培养要求更为严格。将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法,

3、厌氧培养法:常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。


(1)在培养基纯化细菌最常用的方法扩展阅读:

培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基,制定培养条件(温度、pH值、时间,对氧的需求与否等)。

一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上,做分离培养。再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。

一般细菌可在有氧条件下,37℃中放18~24小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放2~3天后生长。个别细菌如结核菌要培养1个月之久。

通过日常管理、检测、检查,了解光合细菌的生长情况,就可以结合当时环境条件的变化进行分析,找出影响光合细菌生长繁殖的原因,采取相应的措施。影响光合细菌生长的原因很多,内因是菌种是否优良,外因是光照、温度、营养、敌害和厌气程度等。

温度、光照和pH值都能影响着光合细菌的生长,而且温度、光照和pH值之间是互相制约的,温度与光照的强弱是对立统一的,所以光合细菌生长的最适条件应是互应的,即温度高,光照应弱;温度低,光照应强。

如果是温度高,光照强,pH值就会迅速升高,培养基产生沉淀,抑制光台细菌的生长;如果温度低,光照弱,光合细菌得不到最佳能源,生长速度也慢。经试验得出光合细菌生长的最适条件是:

①温度15~20℃时,光照30000~50000lx,培养基pH值为7.0;

②温度25~30℃时,光照为3000~5000lx,培养基的pH值为7.0。

② 纯化菌种的方法 简单介绍一下

1、首先,精种的分离是整个工作的第一个关键步骤, 分离培养基的确定,分离培养条件的选择,如培养温度、湿度、好氧或厌机培养等,在分离的最初阶段一般不给予严密的培养条件,尽可能分离到尽可能多的纯菌种。

2、在这种情况下,在菌种的分离阶段可以选用广泛的分离培养基,各种分离培养基中还应针对性地加人目的酶产生菌的作用底物。分离对象可包括细菌、真菌、酵母菌及放线菌等。

3、分离条件也应做到多样化,比如吸取的土样稀释液量的控制、不同的培养温度选择等。分离到的单菌落应立即转移到分离成分一致的新鲜斜面上,等获得纯培养之后就可着手进行初筛。

4、菌种的初筛有两种方法,用简单的定性反应进行初筛,在最初分离阶段就给予特殊的培养基或培养条件,进而让目的菌株得以繁殖,尽可能地把只成为目的菌的菌株或只将其最适菌株的一株纯化分离。总之,初筛的目的就是要用最简单和最快捷的方法来对大量的待筛菌进行测试。

5、目的酶产生菌高产突变体的获得,高产突变菌种有着十分重要的意义。首先,高产突变株常常能够比亲株产生高出很多倍数量的酶。在另外一些情况下,突变株能够产生比较少的不需要的酶或其他代谢产物,因而有利于酶的回收和提纯。

6、最后,获得高产突变株的方法,采用物理和化学因子来处理微生物,并使其发生变异。常用的化学诱变剂有氮介子气、亚硝酸、硫酸二乙酯、环氧乙烧、乙烯亚胺等。物理因子有: 紫外线、X射线、7 射线等。另外,还有其他的一些方法。

③ 如果菌种污染了,可以用怎样的方法纯化它

用平板划线法进行分离培养,再挑选出纯化菌种。用接种针或接种环从受到污染的培养基中挑选少许菌,在平板培养基上划线,使各个菌长成单菌落。再挑选由单菌长成的、生长良好的菌落重复进行一到两次平板划线培养,从中挑选出单菌落,就实现了菌种的分离纯化。用液体培养的菌液适当稀释后在平板培养基上进行涂布培养,从中挑选菌落,也是可以的。

④ 微生物的分离与纯化的常用方法有哪些

分离:

稀释倒平皿法

平板划线法

单细胞挑取法

利用选择培养基分离法

纯化:

1、若是你不知道你所要纯化的微生物的特征,最简单的不知道它的菌落特征和形态大小,那现根据你要分离菌的特性,找适合的初筛培养基,找到你要纯化的菌。如纤维素菌,你在培养基中加纤维素粉或CMC-Na作碳源,这样就可以筛选出分解纤维素的菌。然后再用下面的方法继续纯化。

2、若你知道目标菌的形态,可以直接挑混合菌划平板,直到长出当个菌落,并且在镜下没有杂菌即可;或者挑菌稀释涂布得到当个菌落也行。

如何纯化菌种

菌种在分离、保藏和生产过程中,极易遭致杂菌污染,因此必须对染有杂菌的菌种进行提纯,方能用于生产。根据污染的类型和程度,需采用不同的纯化措施。
(1)排除细菌或酵母菌污染
在菌种培养中,用肉眼仔细观察培养基表面,不难发现被细菌或酵母菌污染的分离物常出现黏稠状的菌落。取被纯化物接种在无冷凝水、硬度较高(琼脂用量2.3%~2.5%)的斜面上,再降低培养温度至15~20℃,利用某些大型真菌在较低的温度下,菌丝生长速度比细菌蔓延速度快的特点,用尖细的接种针切割菌丝的前端,转接到新的试管斜面培养基中培养,连续2~3次就能获得所要的纯菌丝。也可打破试管,挑取内部长有基内菌丝的琼脂块,移入无冷凝水的培养基上,该法适于被好气性细菌污染的母种。
(2)排除霉菌污染
霉菌和细菌不同,它和食用菌菌丝很相似,也有气生菌丝和基内菌丝。分离的方法主要是抑制杂菌生长,拉大食用菌菌丝生长和杂菌菌丝生长的范围差,从食用菌菌落前端切割,移植入新培养基。杂菌发现越早,分离的成功率越大。严格地说,在斜面培养基上的非接种部位发现的白色菌丝,应认为是杂菌菌落,应马上提纯。若有色孢子已出现,一方面易使分生孢子飘散,另一方面其基内菌丝早已蔓延,可能和食用菌菌丝混生一起。如霉菌刚出现孢子且尚未成熟、变色,则可采用前端菌丝切割法提纯。转管时先将菌丝接种在斜面尖端,当长满斜面后,及时将原接种点连同培养基一起挖掉;如霉菌菌落颜色已深,说明孢子已成熟,稍一振动孢子就会飘满培养基,若再行上法意义不大。如菌丝蔓延范围较大,可将0.2%升汞溶液或1%多菌灵处理过的湿滤纸块覆盖在霉菌的菌落上,可抑制霉菌生长,防止孢子扩散,后用灭菌接种铲将表层铲掉,随之用接种针钩取基内菌丝移入新的培养基,如此2~3次。
(3)限制培养
取直径7~10毫米、高4~6毫米的玻璃环或不锈钢环,经酒精灯火焰灼烧后趁热放到斜面培养基中央,将环的一半嵌入培养基内,然后将染有细菌的接种块放入环内进行培养。细菌生长会被限制在环内,而食用菌菌丝则可越过环而长到环外的培养基上,转管后即可得到纯化。
(4)覆盖培养
在污染了细菌的食用菌菌丝斜面上倾注一层厚约2毫米的培养基,培养一段时间,当食用菌菌丝透过培养基形成新的菌落时,即可切割转管。最好进行二次覆盖。
(5)基质菌丝纯化培养
对棉塞长有霉菌的试管斜面,可将试管打碎,取出培养基,用0.1%升汞浸泡2分钟,用无菌水淋洗,再用无菌滤纸吸干。取一段2厘米的培养基从中部切开,在断面上用无菌刀片切成米粒大小的块,移入新的斜面上进行培养。
(6)药物处理
菌种提纯时,可向培养基中注入选择性强的抗菌制剂,如加入 5~10毫克/升的多菌灵(MBC)、涕必灵(TBZ)或托布津等,可有效地防止菌霉混生;在每毫升培养基中加入30~40毫克链霉素、20~30毫克四环素、金霉素,或50毫克高锰酸钾,可以有效地防止细菌混生;加入灰黄霉素(20单位/毫升),可抑制真菌生长。
(7)破碎菌丝
从试管中取出已污染的培养基,放在0.1%升汞水中处理2分钟,用无菌水冲洗,无菌纸吸干,再放入有玻璃珠的无菌水内,经组织破碎,稀释后注入平板培养,取其单个菌落纯化培养。

⑥ 求细菌分离纯化的详细方法

平板划线分离,在平板培养出单个细菌菌落后可以做镜检观察。

稀释倒平板法:先把微生物悬液作一系列的稀释,分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。

如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。


培养基与菌种分离

培养基与菌种分离是从含有多种微生物的样品中获得纯种微生物的操作技术。菌种分离主要在培养皿上进行,常用的方法是稀释法和划线法。使用这两种方法的目的是是微生物的一个个体通过繁殖,在固体培养基上长出肉眼能见的群体,根据培养特征,用接种针调取所需菌种并在显微镜下检查,证明为单一形状的菌体。常用的培养基是选择培养基。

如分离分解纤维素的微生物用的培养基是以纤维素为碳源的培养基,因为从这种培养基上长出来的只能是分解纤维素的微生物。

以上内容参考:网络-菌种分离

⑦ 纯化菌种,为了得到单菌落,常采用的接种方法有吗些

常采用的接种方法有两种:一个是平板划线法,另一个是稀释涂布平板法。这俩种最为常用且操作相对简易。

⑧ 试述常用的细菌分离方法及其用途

分离纯化的目的,都是为了获得特定的、纯的微生物
方法有以下几种,其实只要掌握简单的固体培养基分离纯化就够你使用了,其他的可以了解一下,我是这样认为
因为具体方法内容太多,所以只列出了方法名称。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
1、用固体培养基分离和纯化
1.1 稀释倒平板法
1.2 涂布平板法
1.3 平板划线法
1.4 稀释摇管法
2、用液体培养基分离和纯化
3、单细胞(孢子)分离
4、选择培养分离
4.1 利用选择平板进行直接分离
4.2 富集培养
5、二元培养物

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