测定小麦蛋白质含量常用方法

㈠ 常用的蛋白质含量测定方法有哪些

①凯氏定氮法
原理：蛋白质平均含氮量为16%。当样品与浓硫酸共热，蛋白氮转化为铵盐，在强碱性条件下将氨蒸出，用加有指示剂的硼酸吸收，最后用标准酸滴定硼酸，通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量。
②双缩脲法
原理：尿素在180℃下脱氨生成双缩脲，在碱性溶液中双缩脲可与Cu2+形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上就是酰胺键，故多肽、蛋白质等都有双缩脲（biuret）反应，产生蓝色或紫色复合物。比色定蛋白质含量。
缺点：灵敏度低，样品必须可溶，在大量糖类共存和含有脯氨酸的肽中显色不好。其 精确度 较差 (数mg)，且会受样品中 硫酸铵 及 Tris 的干扰，但 准确度 较高，不受蛋白质的种类影响。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸，所用试剂由试剂甲和乙两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试剂（碱性铜试剂），试剂乙中含有磷钼酸和磷钨酸。
在碱性条件下，蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+， Cu+能定量地与Folin－酚试剂反应生成蓝色物质，600nm比色测定蛋白质含量。
灵敏度较高(约 0.1 mg)，但较麻烦，也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰。 步骤中各项试剂的混合，要特别注意均匀澈底，否则会有大误差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收进行测定。
280nm-260nm的吸收差法：若样品液中有少量核酸共存按下式计算：
蛋白质浓度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260为角标）
⑤色素结合法（Bradford 法）
直接测定法：利用蛋白质与色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）结合物的光吸收用分光光度法进行测定。
考马斯亮兰（CBG）染色法测定蛋白质含量。CBG 有点像指示剂，会在不同的酸碱度下变色；在酸性下是茶色，在中性下为蓝色。当 CBG接到蛋白质上去的时候，因为蛋白质会提供 CBG一个较为中性的环境，因此会变成蓝色。当样本中的蛋白质越多，吸到蛋白质上的CBG也多，蓝色也会增强。因此，蓝色的呈色强度，是与样本中的蛋白质量成正比。
间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。
⑥BCA法
BCA（Bicinchoninc acid procere，4,4’-二羧-2,2’-二喹啉）法与Lowry法相似，主要差别在碱性溶液中，蛋白质使Cu2+转变Cu+后，进一步以BCA 取代Folin试剂与Cu+结合产生深紫色，在波长562 nm有强的吸收。
它的优点在于碱性溶液中BCA 比Folin试剂稳定，因此BCA与碱性铜离子溶液结合的呈色反应只需一步骤即完成。灵敏度Lowry法相似。
本方法对于阴离子、非离子性及二性离子的清洁剂和尿素较具容忍度，较不受干扰，但会受还原糖 及EDTA的干扰。
⑦胶体金测定法
胶体金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶胶，呈洋红色，具有高电子密度，并能与多种生物大分子结合。
胶体金是一种带负电荷的疏水胶体遇蛋白质转变为蓝色，颜色的改变与蛋白质有定量关系，可用于蛋白质的定量测定。
⑧其他方法
有些蛋白质含有特殊的 非蛋白质基团，如 过氧化物酶含有 亚铁血红素基团，可测 403 nm 波长的吸光来定量之。 含特殊金属的酶 (如镉)，则可追踪该金属。

㈡ 蛋白质含量的测定方法有哪些

蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin―酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。

1、微量凯氏定氮法：含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸铵。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。

2、双缩脲法：双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。

3、folin―酚试剂法：这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难，近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。

4、考马斯亮兰法：1976年由bradford建立的考马斯亮兰法，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

5、紫外吸收法：蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。

㈢ 双缩脲法测定蛋白质的含量实验分析与讨论怎么写

双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些：

• 双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。
  

• 双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5~160mg/ml。
  

㈣ 如何测定面粉中面筋，蛋白质，和水分的含量

利用凯氏定氮法测定面粉中蛋白质的含量。
面粉中面筋的检测，参考粮食、油料检验面筋测定法（GB5506－85） 本标准适用于商品小麦及小麦粉中面筋含量的测定。
面粉水分含量检测用SFY-6LS快速水分测定仪的烘箱法原理检测

㈤ 如何利用生物科技提取小麦蛋白质

谷朊粉。目前国内还把谷朊粉作为一种高效的绿色面粉增筋剂、方便面的生产中、面包专用粉的生产，是从小麦(面粉)中提取出来的天然蛋白质.谷朊粉还是增加食品中植物蛋白质含量的有效方法，含有人体必须的十五种氨基酸，具有粘性、面条小麦蛋白粉简介小麦蛋白粉又称活性面筋粉，是营养丰富的植物蛋白资源，添加量不受限制。全过程不加任何添加剂，同时也是高档水产饲料的基础原料、弹性、延伸性，也可用与肉类制品中作为保水剂，广泛用于面包。小麦蛋白粉用途谷朊粉是一种优良的面团改良剂、薄膜成型性和吸脂性，将其用于高筋粉，由多种氨基酸组成。面粉加水和成面团醒发面团洗涤 搅拌洗出淀粉类成为湿面筋团干燥碾磨成粉末状包装，蛋白质含量高达 75%～85%，原料为面粉100%

㈥ 检测食品中蛋白质最常用的方法

一般是根据产品标准要求选测定方法的，食品中蛋白质测定的最常用方法当然是凯氮测定法：常量凯氏定氮法和微量凯氏定氮法。
我大学时还做过考马斯亮蓝
半微量定氮法，与最新标准一致，我这有稍微简化的方法：
以饼干为例：称取2.000克于定氮瓶中，加20mL浓硫酸，加0.2g硫酸铜，加3.0g硫酸钾，然后进行消化，消化至澄清液体后倒入100mL具塞比色管，3次清洗定氮瓶，洗液并入100mL具塞比色管，蒸馏水加至100mL刻度线，摇匀，取10mL进半微量定氮装置蒸馏，收集瓶中为2%硼酸溶液10mL，以甲基红-亚甲蓝为指示剂2滴，用购置的0.1000标准溶液进行滴定，步骤结束。
要点：称量需准确；吸取也准确；玻璃仪器需检定合格。