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dna和rna常用提取方法

发布时间:2023-01-27 12:22:18

如何分离DNA和RNA

1、盐析法:DAN与蛋白质结合形成的核蛋白溶于高盐溶液,但不溶于低盐溶液;而RNA形成的核蛋白易溶于低盐溶液,因此可用高盐溶液从细胞破碎液中提取DNA核蛋白,还可以除去RNA.。
2、凝胶电泳法
3、跑琼脂糖胶,RNA跑得快些,割胶可以得到。
4、利用DNA和RNA在PH不同的苯酚中溶解度不一样:DNA溶解于碱性酚,而RNA溶于酸性酚,从而分离。

❷ 分离DNA和RNA主要方法有哪些

[思路分析]
:①取鸡血细胞液(其红细胞椭圆具核,除骆驼外,猪、羊、狗等哺乳动物红细胞无核),或取新鲜猪肝、菜花、洋葱等材料.虽然在细菌的转化实验中提取的是无核细胞中的DNA,但一般而言,均是从具核的生物材料中提取DNA.当然,在提取出的DNA中也含有一定量的胞质DNA,即线粒体DNA和叶绿体DNA.值得推介的材料是洋葱,取材容易,操作简便,效果明显.将家用加盐洗洁精与洋葱碎屑混合研磨并过滤后,再加酒精,微摇后即出现白色的毛絮状DNA混合物.②使红细胞溶血破膜以及化学药剂十二烷基磺酸钠 SDS(洗洁精的主要成分)或三氯乙酸溶膜.在低渗溶液中,如加蒸馏水使血细胞过度渗透吸水直至破裂,同时用玻棒加速血细胞及核破裂,经一级过滤后滤出液为DNA核蛋白和RNA核蛋白.对于菜花、洋葱等植物材料,在研磨破坏其细胞壁的同时,可考虑适量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解.③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA.在浓氯化钠溶液(2 mol/L)中,DNA核蛋白的溶解度很大,而RNA核蛋白的溶解度很小.在稀氯化钠溶液(0.14mol/L)中DNA的溶解度最低,蛋白质的溶解度很高而出现盐溶现象,经二级过滤后滤出液主要为DNA粗制品.④DNA不溶于酒精,经三级过滤后,再利用乙醇沉淀法使其他物质溶于酒精而进一步纯化DNA.⑤二苯胺或甲基绿鉴定法即DNA遇二苯胺(沸水浴)被染成蓝色,遇甲基绿被染成蓝绿色,且颜色的深浅与DNA纯化程度有关.在此过程中设计对照实验,以增强实验中二苯胺对DNA专一性显色结果的可信度.

❸ 提取DNA的方法总结与比较

dna提取是一项经常要做的实验,下面我们就总结了四种dna提取方法并做详细说明和比较。

一.浓盐法提取dna:

A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.

B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

二.阴离子去污剂法提取dna: 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA

三.苯酚抽提法提取dna:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态

四.水抽提法提取dna:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

❹ 分离DNA和RNA主要方法有哪些

盐析法 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解 而使杂质沉淀 或者相反 以达到分离目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后减小 在DNA溶解度最低时 DNA从溶液中析出 而其他杂质还留在溶液中 达到粗提取的目的
酶水解法 采用RNase(可以买)水解杂质RNA如果混入DNase酶可以采用100度加热15min使其失活 RNase不会失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、时加入蛋白酶K或加碘乙酸钠

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