沉淀蛋白质常用的方法

㈠ 蛋白沉淀的方法和原理

蛋白质通过盐析的办法沉淀的原理是降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出。
蛋白质的沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。蛋白质从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。

㈡ 请问使蛋白质沉淀的方法有几种

蛋白质沉淀实质上是蛋白质的分离，提取蛋白质的方法。一般来说若蛋白质存在于各种生物流体如血浆、牛乳、鸡蛋白及尿的溶液中时，不要经过提取。若在组织和细胞里的蛋白质必须经过提取成为蛋白质溶液，再用（1）透析法：有半透膜透析、电透析、超滤析三种。（你是问方法有几种？所以不讲详细过程，下同）上面是蛋白质与非蛋白质的分离。（2）分离后要除去蛋白质水溶液中的溶剂，可用有机溶剂的亲水作用，在低温（负10度或接近溶剂凝固点的温度）将蛋白质水溶液倾入大量酒精或丙酮中，蛋白质就沉淀下来。（3）也可以用冻干法除去蛋白质溶液中的溶剂（通常是水）即将蛋白质溶液迅速冻成薄层，在高度真空中用升华法将溶剂除去。（4）分段分离将干燥后的多种蛋白质混合物采用分阶段分离。用盐析法进行也可用有机溶剂为沉淀剂分离（5）最后用标准试验法：如超离心法、电泳法及相律法等检验蛋白质是否纯净。

㈢ 有哪些方法可使蛋白质沉淀，沉淀的原理是什么，有何实用意义

盐析法可以使蛋白质沉淀。
盐析法的原理
蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。
---摘自网络

㈣ 蛋白质沉淀的定义及蛋白质沉淀的方法有哪些

蛋白质沉淀的定义：

蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation)，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。

蛋白质沉淀的方法：

1. 盐析法——多用于各种蛋白质和酶的分离纯化；

   在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的pH至等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好。盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫b分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。影响盐析的因素包括：蛋白质浓度、离子强度和类型、PH值、温度等。针对温度这一条，需要强调：在低离子强度或纯水中，蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加。但在高浓度下，蛋白质、酶和多肽类物质的溶解度随温度上升而下降。在一般情况下，蛋白质对盐析温度无特殊要求，可在室温下进行，只有某些对温度比较敏感的酶要求在0-4℃进行。

   使用硫酸铵沉淀蛋白需要注意：硫酸铵中常含有少量的重金属离子，对蛋白质巯基有敏感作用，使用前必须用H2S处理：将硫酸铵配成浓溶液，通入H2S饱和，放置过夜，用滤纸除去重金属离子，浓缩结晶，100℃烘干后使用。另外，高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性（PH=5.0左右），使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH。

2. 有机溶剂沉淀法——多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化；

   有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。该法优点在于：1）分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；2）沉淀不用脱盐，过滤较为容易；3）在生化制备中应用比盐析法广泛。但是，在常温下，有机溶剂沉淀蛋白质往往引起变性。例如酒精消毒灭菌就是如此。因此，操作要求在低温下进行。有机溶剂的选择首先是能和水混溶，使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮，还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。

3. 等电点沉淀法——此法单独应用较少，多与其它方法结合使用；

   两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。如工业上生产胰岛素时，在粗提液中先调PH8.0去除碱性蛋白质，再调PH3.0去除酸性蛋白质。利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性，不然盲目使用十分危险。不少蛋白质与金属离子结合后，等电点会发生偏移，故溶液中含有金属离子时，必须注意调整PH值。等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联合使用，以提高其沉淀能力。

4. 重金属盐沉淀法——常用于抢救误服重金属盐中毒的病人；

   许多有机物质包括蛋白在内，在碱性溶液中带负电荷，能与金属离子形成沉淀。根据有机物与它们之间的作用机制，可分为羧酸、胺及杂环等含氮化合物类，如铜锌镉；亲羧酸疏含氮化合物类，如钙镁铅；亲硫氢基化合物类，如汞银铅。蛋白质-金属离子复合物的重要性质是它们的溶解度对溶液的介电常数非常敏感，调整水溶液的介电常数（如加入有机溶剂），即可沉淀多种蛋白。沉淀的条件以pH稍大于等电点为宜。重金属沉淀的蛋白质常是变性的，但若在低温条件下，并控制重金属离子浓度，也可用于分离制备不变性的蛋白质。临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的这种性质，抢救误服重金属盐中毒的病人，给病人口服大量蛋白质，然后用催吐剂将结合的重金属盐呕吐出来解毒。

㈤ 沉淀蛋白质的方法有哪些，各有和特点

沉淀蛋白质的方法有哪些？各有何特点？
答：（1）盐析法，此方法并未破坏蛋白质天然状态，沉淀出的蛋白质可不变性，所以盐析法是分离制备蛋白质或蛋白类生物制剂的常用方法。
（2）有机溶剂沉淀法，通过破坏蛋白质的水化膜而使蛋白质沉淀，此方法在常温下可使蛋白质变性，低温下可使变性速度减慢。
（3）重金属盐沉淀法，可与蛋白质结合形成不溶于水的蛋白质盐沉淀，引起蛋白质变性。临床用于救重金属盐中毒。

㈥ 常用蛋白质沉淀方法有哪些有哪些应用实例

1、盐析法：此方法并未破坏蛋白质天然状态，沉淀出的蛋白质可不变性，所以盐析法是分离制备蛋白质或蛋白类生物制剂的常用方法2、有机溶剂沉淀法：通过破坏蛋白质的水化膜而使蛋白质沉淀，此方法在常温下可使蛋白质变性，低温下可使变性速度减慢3、重金属盐沉淀法：可与蛋白质结合形成不溶于水的蛋白质沉淀，引起蛋白质变性。

㈦ 蛋白质沉淀有哪几种方法哪些是可逆的沉淀反应

蛋白质沉淀 蛋白质在溶液中的稳定性是有条件的、相对的.如果条件发生改变,破坏了蛋白质溶液的稳定性,蛋白质分子则聚集成大的颗粒沉淀出来.
蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关,只要破坏这些条件,蛋白质自然会从溶液中沉淀出.
沉淀蛋白质有以下方法：
1、盐析法
2、有机溶剂沉淀法
3、重金属盐沉淀法
4、生物碱试剂和某些酸（三氯醋酸,磺基水杨酸,硝酸等）沉淀法
5、加热变性沉淀法
蛋白质变性：蛋白质的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象.蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时,次级键受到破坏,导致天然构象的破坏,使蛋白质的生物活性丧失.
蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀（precipitation）,变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀.
蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即颗粒表面的水化层和电荷.若无外加条件,不致互相凝集.然而除掉这两个稳定因素（如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂）蛋白质便容易凝集析出.
可以看出,如将蛋白质溶液pH调节到等电点,蛋白质分子呈等电状态,虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了.但是还有水化膜起保护作用,一般不致于发生凝聚作用,如果这时再加入某种脱水剂,除去蛋白质分子的水化膜,则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀；反之,若先使蛋白质脱水,然后再调节pH到等电点,也同样可使蛋白质沉淀析出.

㈧ 蛋白质沉淀的方法有那些，各有什么特点

沉淀蛋白质的方法主要有：盐析、有机溶剂、生物碱试剂、重金属盐、加热凝固。
分析如下：
（1）盐析破坏蛋白质的水化膜和电荷，采用不同浓度盐可将不同的蛋白质分段析出，盐析的蛋白质不变性，盐析作用是可逆的。（2）有机溶剂可破坏蛋白质的水化膜，若调节pH=pI，则更易沉淀。低温操作，快速分离溶剂不会使蛋白质变性，而常温操作，蛋白质易变性。（3）沉淀生物碱试剂：钨酸、三氯乙酸等的酸根与带正电荷的蛋白质结合沉淀，会使蛋白质变性。（4）重金属离子可与带负电荷的蛋白质结合沉淀，会使蛋白质变性。（5）在等电点加热蛋白质可形成凝块沉淀，会使蛋白质变性。

㈨ 沉淀蛋白质的几种方法及应用实例

1.盐析法——多用于各种蛋白质和酶的分离纯化
在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出,这种方法称为盐析.常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等.各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同,故可用于对混和蛋白质组分的分离.例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白,饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来,盐析沉淀的蛋白质,经透析除盐,仍保证蛋白质的活性.调节蛋白质溶液的pH至等电点后,再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好.盐析法分为两类,第一类叫Ks分段盐析法,在一定PH和温度下通过改变离子强度实现,用于早期的粗提液；第二种叫b分段盐析法,在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现,用于后期进一步分离纯化和结晶.影响盐析的因素包括：蛋白质浓度、离子强度和类型、PH值、温度等.针对温度这一条,需要强调：在低离子强度或纯水中,蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加.但在高浓度下,蛋白质、酶和多肽类物质的溶解度随温度上升而下降.在一般情况下,蛋白质对盐析温度无特殊要求,可在室温下进行,只有某些对温度比较敏感的酶要求在0-4℃进行.
使用硫酸铵沉淀蛋白需要注意：硫酸铵中常含有少量的重金属离子,对蛋白质巯基有敏感作用,使用前必须用H2S处理：将硫酸铵配成浓溶液,通入H2S饱和,放置过夜,用滤纸除去重金属离子,浓缩结晶,100℃烘干后使用.另外,高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性(PH=5.0左右),使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH.
2.有机溶剂沉淀法——多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化；
有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数,导致具有表面水层的生物大分子脱水,相互聚集,最后析出.该法优点在于：1)分辨能力比盐析法高,即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；2)沉淀不用脱盐,过滤较为容易；3)在生化制备中应用比盐析法广泛.但是,在常温下,有机溶剂沉淀蛋白质往往引起变性.例如酒精消毒灭菌就是如此.因此,操作要求在低温下进行.有机溶剂的选择首先是能和水混溶,使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮,还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等.
3.等电点沉淀法——此法单独应用较少,多与其它方法结合使用；
两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低,不同的两性电解质具有不同的等电点,以此为基础可进行分离.如工业上生产胰岛素时,在粗提液中先调PH8.0去除碱性蛋白质,再调PH3.0去除酸性蛋白质.利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性,不然盲目使用十分危险.不少蛋白质与金属离子结合后,等电点会发生偏移,故溶液中含有金属离子时,必须注意调整PH值.等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联合使用,以提高其沉淀能力.
很全面实用的答案,