‘壹’ 怎么使用多功能酶标仪检测双荧光素酶报告基因
以Promega公司双荧光素酶检测试剂盒为例：
1. 试剂准备
按照说明书配制PLB细胞裂解液、LAR II检测液、Stop&Glo检测液。
2.仪器准备
准备单管或微孔板发光检测仪
3. 样品准备
按照说明书使用PLB细胞裂解液裂解细胞，取20ul细胞裂解液
4. 检测过程
a) 在1.5ml离心管中加入20ul细胞裂解液，然后加入100ul的LARII溶液，混合后放入发光检测仪检测第一次发光值；
b) 然后加入Stop&Glo检测液，终止第一次发光，同时开始第二次发光，混合后放入发光检测仪检测第二次发光值。
‘贰’ 如何使用多功能酶标仪检测双荧光素酶
报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应。Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。但是报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响，例如培养细胞的数目和活力的差别、细胞转染和裂解的效率、以及加样操作过程中引起的变异。Dual-Luciferase双荧光素酶报告基因检测系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。共转染的“对照”报告基因会作为内对照，减小细胞活性和转染效率对实验的影响。因此双报告系统减少了外部干扰，使得实验数据更可信。Promega提供了一种先进的双报告基因技术（Dual-reporter assays）,结合了萤火虫荧光素酶测试和海肾荧光素酶测试，该技术同时使用两个独立的报告基因以提高实验的准确性，Biotek synergy 系列微孔板检测仪作为双报告基因的检测分析平台获得了Promega DLR 认证。
在双报告基因系统中，通常一个报告基因用于检测特定实验条件下待测物的反应，即“实验”reporter，另一个报告基因用来检测实验条件，类似于内部对照，用于校准“实验”reporter的数据。通过这种方法，可减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，例如：转染效率、细胞活性、细胞裂解差异以及加样操作过程中引起的差异。Promega公司的Dual-Luciferase系统利用萤火虫和海肾荧光素酶的活性分别检测实验组和对照组。萤火虫荧光素酶是一种分子量为61KD的单体酶，分两步催化虫荧光素的氧化反应，产生560nm的光，海肾荧光素酶是一种分子量为36KD的单体酶，催化海肾荧光素的氧化反应，产生中心波长为480nm的蓝光。萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶没有种源同源性，对应不同的反应底物，反应中没有任何的交叉干扰。
‘叁’ 怎样选购荧光酶标仪
荧光酶标仪(Fluorence microplate reader)是用来进行荧光检测的酶标仪。通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上，会发出波长更长的发射光，通过发射光栅后到达检测器，荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例。荧光检测灵敏度高，可实时检测，使用方便，检测模式多样，但是容易受外界干扰，激发光与发射光容易互相影响干扰检测。
其用途主要是蛋白和核酸定量，酶活测定，荧光免疫分析，代谢物/被分析物定量，胞内钙离子浓度的变化，荧光蛋白的报道基因分析 (GFP)，细胞存活/毒性/增殖/粘合分析，受体-配基结合，蛋白-DNA相互作用，寡核苷酸多态性，酶活性分析，药物筛选等方面。
荧光酶标仪最常见的品牌是的是美国宝特(BioTek)。BioTek 有多种荧光检测仪器，从低成本、高精度的 FLx800�6�4 到模块化的 Synergy�6�4 2 和 Synergy�6�4 4，可满足各种荧光检测需求。
FLx800 系列有五种不同型号的荧光酶标仪。分别是FLX800T，FLX800TB，FLX800TBP，FLX800TBI，FLX800TBID。其差别在于探针的位置顶部/底部，以及是否配有孵育，震荡，注射器，PCR读板等。
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详细资料请参考：on
http://www.bio1000.com/news/1/351982.html