日本血吸虫病原学诊断常用方法

⑴ 关于血吸虫有关问题

血吸虫病的诊断包括病原诊断和免疫诊断两大部分，具体方法详见附录。
1．病原诊断 从粪便内检查虫卵或孵化毛蚴以及直肠粘膜活体组织检查虫卵。
⑴直接涂片法：重感染地区病人粪便或急性血吸虫病人的粘液血便中常可检查到血吸虫虫卵，方法简便，使虫卵检出率低。
⑵毛蚴孵化法：详见附录。可以提高阳性检出率。在现场进行大规模粪便检查时，为了提高功效，产生了许多改良方法，如尼龙袋集卵法，可缩短集卵时间，降低损耗，便于流动性普查；为了便于观察毛蚴，可采用塑料杯顶管孵化法，毛蚴集中，便于观察，检出率较高。为了提高粪便检查效果，常常需要连续送检粪便3次。
⑶定量透明法：用作血吸虫虫卵计数。常用的计算方法为kato厚片法。可测定人群感染情况，并可考核防治效果。
⑷直肠粘膜活体组织检查：慢性及晚期血吸虫病人肠壁组织增厚，虫卵排出受阻，故粪便中不易查获虫卵，可应用直肠镜检查。血吸虫病人肠粘膜内沉积的虫卵，其中有活卵、变性卵和死卵。对未治疗病人检出的虫卵，不论死活均有参考价值；对有治疗史病人，如有活卵或近期变性卵，表明受检者体内有成虫寄生。若为远期变性卵或死卵，则提示受检者曾经有过血吸虫感染。目前流行区血吸虫病人大多已经过一次或多次治疗，检查到活卵的病例很少，并且此方法有一定的危险性，故不适于大规模应用。
2．免疫诊断
⑴皮内试验（intradermal test，idt）：一般皮内试验与粪检虫卵阳性的符合率为90％左右，但可出现假阳性或假阴性反应，与其他吸虫病可产生较高的交叉反应；并且病人治愈后多年仍可为阳性反应。此法简便、快速、通常用于现场筛选可疑病例。
⑵检测抗体：血吸病人血清中存在特异性抗体，包括igm、igg、ige等，如受检者未经病原治疗，而特异性抗体呈阳性反应，对于确定诊断意义较大；如已经病原治疗，特异性抗体阳性，并不能确定受检者体内仍有成虫寄生，因治愈后，特异性抗体在体内仍可维持较长时间。目前检测抗体的血吸虫病血清学诊断方法很多，常用的有以下几种（详见附录）。
1）环卵沉淀试验（circunoval precipitin test，copt）：通常检查100个虫卵，阳性反应虫卵数（环沉率）等于或 大于5％时，即为阳性。粪检血吸虫卵阳性者，copt阳性率平均为97.3％（94.1%～100%）。健康人假阳性率为3.1％，与肺吸虫病、华支睾吸虫病可出现交叉反应。患者有效治疗后copt阴转较慢。若血吸虫病人距末次治疗时间已3～5年，而copt环沉率为3％或3％以上者，可结合临床表现考虑给予重复治疗。目前在基本消灭血吸虫病地区，已广泛应用copt作为综合查病方法之一。为了操作规范化、标准化，并适合于现场应用，对copt方法作了许多改良，如塑料管法，双面胶纸法等。
2）间接红细胞凝集试验（indirect haemagglutination test，iha）：粪检血吸虫虫卵阳性者与iha阳性符合率为92.3%～100%，正常人假阳性率在2％左右，与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫感染者可出现假阳性反应。iha操作简便，用血量少，判读结果快，目前国内已广泛应用。
3）酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，elisa）：此试验具有较高的敏感性和特异性，并且可反应抗体水平，阳性检出率在95％～100％，假阳性率为2.6％，病人在吡喹酮治疗后半年至一年有50％至70％转为阴性。此试验已应用于我国一些血吸虫病流行区的查病工作。近年来，在载体、底物及抗原的纯化方面都作了改良，如快速－elisa，硫酸铵沉淀抗原－elisa等。
4）免疫酶染色试验（immunoenzymic staining test，iest）：见附录。
在检测血吸虫特异抗体的方法中，尚有许多种，如间接荧光抗体试验（ifat）、胶乳凝集试验（la）、酶标记抗原对流免疫电泳（elacie）等，这些方法有它们各自的优点。
值得提出，近年来随着科技的发展，某些高科技和新方法被逐步引用到血吸虫病的诊断和研究领域。例如免疫印渍技术(immunoblotting）又称（western blot），是在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上建立的一种具有分子水平的免疫学新技术，有力推动了血吸虫病血清学诊断方法的进展，它不但能对血吸虫抗原的限定组分蛋白进行分析和鉴定，而且能用以诊断病人和区分血吸虫病不同病期的新型血清学诊断方法。又如杂交瘤技术制备单克隆抗体（mcab）的应用。采用特异的mcab纯化血吸虫抗原，用于血吸虫病血清学诊断；也可应用mcab检测循环抗原，为血吸虫病诊断提供新的途径。
⑶检测循环抗原：由于治疗后抗体在宿主体内存留较长时间，其阳性结果往往不能区分现症感染和既往感染，也不易于评价疗效。循环抗原是生活虫体排放至宿体内的大分子微粒，主要是虫体排泄、分泌或表皮脱落物中具有抗原特性，又可为血清免疫学试验所检出。从理论上讲，cag的检测有其自身的优越性，它不仅能反映活动性感染，而且可以评价疗效和估计虫荷。
在感染血吸虫宿主体内cag的种类较多，目前可检出比较重要的3类游离循环抗原，即肠相关抗原（gaa）、膜相关抗原（maa）和可溶性虫卵抗原（sea）。在检测方法上，采用检测不同靶cag的探针，包括抗血吸虫抗原不同表位——单克隆抗体、组合单克隆抗体以及多克隆抗体等。在检测的具体方法有：斑点elisa（dot-elisa），双抗体夹心elisa等。近年来，国内、外学者对cag进行了多方面的研究、进展很快，并已取得了不少可供参考的结果。但是，要过渡到临床实用阶段仍有许多问题和影响因素急待探讨与解决，如目前检测的方法有待改进和规范化；免疫复合物的形成和抗独特型抗体存在对检测结果的影响；循环抗原在感染宿主体内消长规律及治疗后的转归等。
⑷综合查病：上述各种检查方法各有优缺点，如果将几种方法合理搭配，由简到繁，综合查病，则可收到事半功倍的效果。一般在重流行区，粪检尚能查出一定比例病人的地方，仍以粪检为主，辅以其他方法检查；而在基本消灭血吸虫病地区，则应以免疫诊断为主，取得多项数据，综合判断。 致病

血吸虫发育的不同阶段，尾蚴、童虫、成虫和虫卵均可对宿主引起不同的损害和复杂的免疫病理反应。由于各期致病因子的不同，宿主受累的组织、器官和机体反应性也有所不同，引起的病变和临床表现亦具有相应的特点和阶段性。根据病因的免疫病理学性质，有人主张将血吸虫病归入免疫性疾病范畴内。
1．尾蚴及童虫所致损害 尾蚴穿过皮肤可引起皮炎，局部出现丘疹和瘙痒，是一种速发型和迟发型变态反应。病理变化为毛细血管扩张充血，伴有出血、水肿，周围有中性粒细胞和单核细胞浸润。实验证明，感染小鼠的血清和淋巴细胞被动转移到正常小鼠，再用尾蚴接种（初次接触尾蚴），也可产生尾蚴性皮炎。说明这种免疫应答在早期是抗体介导的。
童虫在宿主体内移行时，所经过的器官（特别是肺）出现血管炎，毛细血管栓塞、破裂，产生局部细胞浸润和点状出血。当大量童虫在人体移行时，患者可出现发热、咳嗽、痰中带血、嗜酸性粒细胞增多，这可能是局部炎症及虫体代谢产物引起的变态反应。
2．成虫所致损害 成虫一般无明显致病作用，少数可引起轻微的机械性损害，如静脉内膜炎等。可是，它的代谢产物、虫体分泌物、排泄物、虫体外皮层更新脱落的表质膜等，在机体内可形成免疫复合物，对宿主产生损害。
3．虫卵所致的损害 血吸虫病的病变主要由虫卵引起。虫卵主要是沉着在宿主的肝及结肠肠壁等组织，所引起的肉芽肿和纤维化是血吸虫病的主要病变。
肉芽肿形成和发展的病理过程与虫卵的发育有密切关系。虫卵尚未成熟时，其周围的宿主组织无反应或轻微的反应。当虫卵内毛蚴成熟后，其分泌的酶、蛋白质及糖等物质称可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，sea），可诱发肉芽肿反应。sea透过卵壳微孔缓慢释放，致敏t细胞，当再次遇到相同抗原后，刺激致敏的t细胞产生各种淋巴因子。研究结果表明：巨噬细胞吞噬sea，然后将处理过的抗原呈递给辅助性t细胞（th），同时分泌白细胞介素1（il－1），激活th，使产生各种淋巴因子，其中白细胞介素2（il－2）促进t细胞各亚群的增生； γ－干扰素增进巨噬细胞的吞噬功能。除上述释放的淋巴因子外，还有嗜酸性粒细胞刺激素（esp）、成纤维细胞刺激因子（fsf）、巨噬细胞移动抑制因子（mif）等吸引巨噬细胞、嗜酸性粒细胞及成纤维细胞等汇集到虫卵周围，形成肉芽肿，又称虫卵结节。
日本血吸虫产出虫卵常成簇沉积于组织内，所以虫卵肉芽肿的体积大，其细胞成分中，嗜酸性粒细胞数量多，并有浆细胞。肉芽肿常出现中心坏死，称嗜酸性脓肿。在虫卵周围常常可见到抗原抗体复合物反应，称何博礼现象（hoeppli phenomen )。用苏木素伊红染色的肝切片标本中，在虫卵周围有红色放射状物质。日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成机制在动物研究的结果表明，是t细胞介导的ⅳ型变态反应。
随着病程发展，卵内毛蚴死亡，其毒素作用逐渐消失，坏死物质被吸收，虫卵破裂或钙化，其周围绕以类上皮细胞、淋巴细胞、异物巨细胞，最后类上皮细胞变为成纤维细胞，并产生胶原纤维，肉芽肿逐渐发生纤维化，形成疤痕组织。
虫卵肉芽肿的形成是宿主对致病因子的一种免疫应答。一方面通过肉芽肿反应将虫卵破坏清除，并能隔离和清除虫卵释放的抗原，减少血液循环中抗原抗体复合物的形成和对机体的损害；另一方面，肉芽肿反应破坏了宿主正常组织，不断生成的虫卵肉芽肿形成相互连接的疤痕，导致干线型肝硬变及肠壁纤维化等一系列病变。
血吸虫虫卵肉芽肿在组织血管内形成，堵塞血管，破坏血管结构，导致组织纤维化，这类病变主要见于虫卵沉积较多的器官，如肝和结肠。在肝内，虫卵肉芽肿位于门脉分支终端，窦前静脉，故肝的结构和功能一般不受影响。在重度感染患者，门脉周围出现广泛的纤维化，肝切面上，围绕在门静脉周围长而白色的纤维束从不同角度插入肝内，称干线型纤维化（pipestem fibrosis），是晚期血吸虫病特征性病变。由于窦前静脉的广泛阻塞，导致门静脉高压，出现肝、脾肿大，侧支循环，腹壁、食管及胃底静脉曲张，以及上消化道出血与腹水等症状，称为肝脾性血吸虫病（hepatosplenic schistosomiasis）。所以日本血吸虫病晚期产生因门脉血流障碍所致的连锁性病理生理变化。
4．循环抗原及免疫复合物 血吸虫寄生在宿主静脉内，童虫、成虫和虫卵的代谢产物、分泌物和排泄物，以及虫体表皮更新的脱落物排入到血液中，并随血液循环至各组织，成为循环抗原。在血吸虫感染宿主血内可检出主要的循环抗原有：肠相关抗原（associated antigens，gaa）、表膜相关抗原（membrane associated antigens，maa）和可溶性虫卵抗原（soluble egg antigens，sea）。迄今，研究得最多的是肠相关抗原。血吸虫gaa的两个主要成分，即循环阳极抗原（circulating anodie antigens，caa），为肠相关血吸虫蛋白多糖抗原和循环阴极抗原（circulating anodie antigens，caa ），为不均一的糖蛋白抗原。应用间接荧光抗体技术证明，caa和cca均来源于成虫肠道衬细胞，随虫体吐出物排到宿主血流中。宿主对这些循环抗原产生相应的抗体，抗原抗体结合，形成免疫复合物。通常免疫复合物可被单核细胞或巨噬细胞吞噬、清除。当免疫复合物形成过多，或不能被有效清除时，则可在组织（血管、关节等）内沉积，引起损伤组织的炎症反应。即 ⅲ型变态反应。
免疫复合物沉积血管内可激活补体，补体中的c3a和c5a具有促使肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放组织胺等血管活性物质的作用，以致血管通诱性增加。另外，c5a的化学趋向性作用，可吸引中性粒细胞集聚于复合物沉积的血管，中性粒细胞吞噬复合物，并释放蛋白溶解酶，损伤包括血管在内的局部组织。血吸虫病人合并肾损害时，常出现蛋白尿，水肿及肾功能减退。实验研究认为血吸虫病的肾小球病变与免疫复合物的沉积有关。
5．临床表现 根据患者的感染度、免疫状态、营养状况、治疗是否及时等因素不同而异。日本血吸虫病可分为急性、慢性和晚期三期。当尾蚴侵入皮肤后，部分患者局部出现丘疹或荨麻疹，称尾蚴性皮炎。当雌虫开始大量产卵时，少数患者出现以发热为主的急性变态反应性症状，常在接触疫水后1～2月出现，除发热外，伴有腹痛、腹泻、肝脾肿大及嗜酸性粒细胞增多，粪便检查血吸虫卵或毛蚴孵化结果阳性，称急性血吸虫病。然后病情逐步转向慢性期，在流行区，90％的血吸虫病人为慢性血吸虫病，此时，多数患者无明显症状和不适，也可能不定期处于亚临床状态，表现腹泻、粪中带有粘液及脓血、肝脾肿大、贫血和消瘦等。一般在感染后5年左右，部分重感染患者开始发生晚期病变。根据主要临床表现，晚期血吸虫病可分为巨脾、腹水及侏儒三型。一个病人可兼有两种或两种以上表现。在临床上常见是以肝脾肿大、腹水、门脉高压，以及因侧支循环形成所致的食管下端及胃底静脉曲张为主的综合征。晚期病人可并发上消化道出血，肝性昏迷等严重症状而致死。儿童和青少年如感染严重，使垂体前叶功能减退，及其他因素可影响生长发育和生殖而致侏儒症。因肝纤维化病变在晚期常是不可逆的，并且对治疗反应甚差，从而导致临床上难治的晚期血吸虫病。
6．异位寄生与异位损害 日本血吸虫成虫在门脉系统以外的静脉内寄生称异位寄生，而见于门脉系统以外的器官或组织的血吸虫虫卵肉芽肿则称异位损害（ectopic lesion）或异位血吸虫病。人体常见的异位损害在脑和肺。血吸虫卵进入脑和脊髓产生异位损害，可致严重的神经系统并发症；经侧支循环进入肺的虫卵可引起肺动脉炎，甚至肺源性心脏病；罕见的异位损害可见于皮肤、甲状腺、心包、肾等处。
异位寄生与损害多发生在大量尾蚴感染的急性期，而慢性期及晚期患者也可出现。经动物试验结果初步分析，急性血吸虫病患者合并脑或肺的异位损害可能由于感染大量尾蚴，虫数过多，发生异位寄生和损害。晚期因肝纤维化，发生侧支循环，门腔系统吻合支扩大，肠系膜静脉的虫卵可被血流带到肺、脑或其他组织引起病变。

⑵ 血吸虫病的诊断

血吸虫病的诊断包括病原诊断和免疫诊断两大部分。病人的确诊需要从粪便中检获虫卵或孵化毛蚴。
1.病原学诊断
从粪便内检查血吸虫虫卵和毛蚴以及直肠黏膜活体组织检查虫卵称病原学检查，是确诊血吸虫病的依据。常用的病原学检查方法有改良加藤法、尼龙袋集卵孵化法、塑料杯顶管孵化法等。
2.免疫学诊断
免疫学诊断包括检测患者血清中循环抗体、循环抗原和循环免疫复合物。常采用的诊断方法有间接红细胞凝集试验（IHA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体染料试纸条法（DDIA）、斑点金免疫渗滤试验（DIGFA）。

⑶ 日本血吸虫病原学诊断为何采用粪便沉淀孵化法

血吸虫卵的孵化需要一定的温度，需要水，而且 越是清水越容易孵化，所以在虫卵具有向清性，向光性，毛蚴也是，把大便收集以后，加上水，稀释之后，虫卵会自然与水分离，也增加了单位体积内虫卵数量，增加检出率

⑷ 日本血吸虫病的检查方式是怎么样的

检查包括以下项目： 1.病原检查 病原检查对本病的诊断具有重大意义，主要的检查方法有以下几种： (1)直接涂片法 病人粪便或急性血吸虫病人的粘液血便中常可检出血吸虫虫卵，方法简便，但虫卵检出率低。 (2)沉淀法 水沉淀法或静置沉淀法可用于急慢性期患者，检出率较高。 (3)毛蚴孵化法 利用沉淀法收集到的沉淀虫卵，在无氯的温水(25~30℃)中培养，虫卵可在数小时孵化出毛蚴。适用于早期血吸虫病患者的粪便检查。 (4)定量透明法 用作血吸虫虫卵计数。通常用于疗效考核和测定人群感染度。 (5)直肠粘膜活体组织检查 用直肠镜或乙状结肠镜从直肠或乙状结肠病变部位钳取一小块肠黏膜作压片检查。 2.免疫检查 (1)皮内试验 阳性率约为90%，但可出现假阳性或假阴性反应，与其他吸虫病可产生较高的交叉反应，且无疗效考核价值。多用于现场确定病例。 (2)环卵沉淀实验(COPT) 本法在国内被广泛应用，是诊断血吸虫病血清学诊断的有效方法之一。 (3)间接荧光抗体试验(IFAT) 一种抗原抗体结合物反应与形态学相结合的化学方法。本法操作简单，特异性、敏感性均较高。 (4)间接红细胞凝集试验(IHA)用血吸虫卵抗原致敏绵羊红细胞，冻干保存，用时加蒸馏水稀释成2%的红细胞悬液，与受检血清进行微量血凝试验，l：lO血清为阳性反应，即有有诊断意义。此方法简易，敏感性高，观察结果快速。 其他的免疫方法还有酶联免疫吸附试验、免疫酶染色试验(IEST)、斑点酶联免疫吸附试验、循环免疫复合物检测等。 3.血象检查 白细胞总数、嗜酸性粒细胞增加明显。慢性期嗜酸性粒细胞仍有轻度增多。但极重型急性血吸虫病患者血中嗜酸性粒细胞常不增多，甚至消失，而中性粒细胞出现增多。晚期则因脾功能亢进，白细胞与血小板减少，并有不同程度的贫血。 4. 肝功能试验 血清球蛋白显着增高，血清丙氨酸转酶(ALT)也轻度增高。慢性血吸虫尤其无症状患者肝功能试验大多正常。晚期患者由于肝纤维化或肝硬化，血清蛋白明显降低，出现血清蛋白与球蛋白比例倒置现象。 5.辅助检查 (1).CT扫描 晚期血吸虫病患者经CT扫描可显示肝包膜与肝内门静脉区有钙化现象;肝包膜增厚钙化，与肝内钙化中隔相垂直;在两者交界处并有切迹形成。重度肝纤维化可表现为龟背样图像。 (2).B型超声波检查 经B超检查可见肝脾肿大。 查看原帖>>

⑸ 血吸虫病的病原学检查方法有哪些

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1
）粪检：从粪便中检出血吸虫虫卵或孵出毛蜘是确定诊断和考核疗效的最可靠的指标。粪检虫卵方法简便易行，但在轻度感染者、晚期患者和经治疗未愈者粪便中虫卵数很少，检出率不高，故粪检虫卵阴性不能排除血吸虫感染。粪检虫卵（毛勤）有定性检查法和定量检查法。①
定性检查：A
．直接涂片镜检法：检出率低，只在感染严重的早期患者可检出虫卵；B
．集卵镜检法：有自然沉淀法、汞醛碘沉淀法和尼龙袋集卵法等。自然沉淀法：较直接涂片镜检法检出率稍高。尼龙袋集卵法：将粪便匀浆滤去粗渣后，置双层尼龙袋（内层120
目，外层2
印目）内淘洗或在水龙头下冲洗，然后收集2
印目尼龙袋内的粪渣镜检。本法较沉淀法简便易行，检出率高，便于流动性普查；C
．孵化法：是根据血吸虫卵内的毛蜘在适宜条件下能很快孵出，并游动于水表面下的特性。方法是取受检粪便约309
，先经沉淀法浓集处理，将处理后的沉渣倒人500
血的三角烧瓶中，加清水至瓶口处，置于20
一30
℃
下进行孵化，在4
、12
、24
小时时，用肉眼或放大镜各观察一次结果。如见水面下有白色点状物作直线来往游动，即为毛坳阳性。采用塑料杯顶管改良法，可使虫卵散失少，毛坳集中便于观察，检出率较三角烧瓶法为高。为提高粪检虫卵的阳性率，最好选用集卵镜检和粪渣孵化两种方法同时进行检查；送检粪量及送检次数与检出率密切相关，送检的次数越多、粪量越大，检出率越高。在血吸虫病流行地区，提倡“一送三检”（留一次全量粪便，分三次检查）或“三送三检”（每次检309
粪便，送检三次），均可明显提高虫卵检出率。②
定量检查：患者每日从粪便中排出的虫卵数与其体内寄生的雌虫数相关，故虫卵的定量在一般情况下可反映出宿主的感染度。粪便中的虫卵定量可采用加藤（Kato
一kats
）集卵透明法，以50mg
粪便中的虫卵数为计算单位；少于100
为轻度感染，100
一中阅为中度感染，多于叨O
为重度感染。(
2
）直肠粘膜活组织检查：用乙状结肠镜或直肠镜观察直肠粘膜的病变；急性期以肠粘膜充血、水肿为主，慢性期时肠粘膜苍白、肥厚及瘫痕形成。各期均可见典型的小斑点或小结节。将夹取疑有虫卵结节的米粒大小粘膜组织，压于两载玻片之间镜检。本法检出血吸虫卵的阳性率很高。对未经治疗的病人，检出的虫卵不论死、活卵均有确定诊断价值；对经特效药物治疗过的病人，则只有检出活卵或近期变性卵才有诊断、治疗意义。活检时要细心操作，以防发生肠大出血或肠穿孔，尤其对晚期血吸虫病患者更应小心操作。
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