Ⅰ d生物素溶解方法
d生物素溶解方法:
1.自溶法:
将新鲜的生物材料放于一定的 PH 溶液中和适当的温度下,细胞在其内所有的各种水解酶(如蛋白酶盒酯酶)的作用下发生溶解,使细胞内含物释放出来。使用时要特别小心操作,因为水解酶不仅可以使细胞壁和膜破坏,同时也可能会分解某些要提取的有效成分。
2.酶解法:
用各种水解酶(如溶解酶,纤维素酶,蜗牛酶盒酯酶)于37度PH8的缓冲液中处理细胞15min,可以专一性地将细菌或植物细胞壁分解,释放出细胞内含物。细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理;酵母细胞常采用蜗牛酶(来自蜗牛),将酵母细胞悬于0.1mmol/ L 杞橼酸﹣磷酸氢二钠缓冲液(PH5.4)中,加1%蜗牛酶,在30度处理30秒,即可使大部分细胞壁破裂,如同时加入0.2%疏基乙酸,则效果会更好。此法可与研磨法联合使用。
d生物素也称维生素H、辅酶R,是水溶性维生素,也属于维生素B族,B7。它是合成维生素C的必要物质,是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。是一种维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。
Ⅱ 溶菌酶肠溶片服用方法饭前服还是饭后服
您好, 溶菌酶肠溶片应该在饭前服用的。 有不明白的欢迎继续提问。
Ⅲ 酶制剂在食品保鲜中的应用有哪些
酶制剂在食品保鲜中的应用2.1溶菌酶
溶菌酶(Lysozme)又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁
质聚糖水解酶,可以水解细菌细胞壁肽聚糖的"-1,4糖苷键,导致细菌自溶死亡。溶菌酶的分子量14000左右,等电点10.7~11.0,
其化学性质十分稳定,在pH值1.2~11.3剧烈变化时,其结构几乎不变,故非常适合于各种食品的防腐[3]
。
对革兰氏阳性菌、好气性孢子形成菌、枯草杆菌、地衣型芽孢杆菌等都有抗菌作用,而对没有细胞壁的人体细胞不会产生不利影响。能杀死肠道腐败球菌,增加抗感染力,同时还能促进婴儿肠道双歧乳酸杆菌增殖,促进奶酪蛋白凝乳利于消化,所以是婴儿食品、饮料的优良添加剂。对人体完全无毒、无副作用,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效,是一种安全的天然防腐剂。用溶菌酶处理食品,可有效地防止和消除细菌对食品的污染,起到防腐保鲜作用。因此溶菌酶现已在干酪、水产品、酿造酒、乳制品、肉制品、新鲜果蔬、豆腐、糕点、面条、及饮料等防腐保鲜中广泛应用。马美湖等的研究也证明溶菌酶对于控制细菌总数的增殖,减缓TVB-N的上升具有极其重要的作用[4]。
2.1.1在乳制品的保鲜与强化中的应用。目前,我国液态乳制品发展很快,溶菌酶应用于乳制品中可起到防腐的效果,尤其适用于巴氏杀菌奶,可有效地延长保存期。由于溶菌酶具有一定的耐高温性能,也可适用于超高温瞬间杀菌奶。添加剂量为300~600mg/kg,
其方法为包装前添加,超高温瞬间杀菌奶也可以在杀菌前添加[5]。
在干酪的生产中,添加一定量的溶菌酶,可防止微生物污染而引起的酪酸发酵,以保证干酪的质量。
新鲜的牛乳中含有少量的溶菌酶,每100mi约含13mg,而人乳中含有40mg/mi溶菌酶。若在鲜乳或奶粉中加入一定量的溶菌酶,则不但有防腐保鲜剂的作用,而且可达到强化婴儿乳品的目的,有利于婴儿的健康。
2.1.2在低温肉制品中的保鲜应用。由湖南农业大学研制的~Nsafety-010低温肉制品保鲜剂,专门适用于低温肉制品的保鲜。采用纯天然、安全、无毒、高效的物质经科学方法配制而成。该保鲜剂在95C以下均保持性质稳定,因此,将其添加到原料肉中进行低温加热(80C左右),可保持活力不变。该保鲜剂可以延长低温肉制品保鲜期1倍以上。使用浓度为肉重的0.01%~0.05%。使用方法为在肉块进行滚揉或进行斩拌时加入。应注意的是低温肉制品热加工温度
不要超过95C,否则,会影响其活性[6]。
2.1.3低浓度酿造酒的保鲜。酿造酒的酒精含量较低,有些微生物可在其中生长,而引起变质。例如,清酒的酒精含量为15%~17%,大部分微生物不能在其中生长,而有一种称为火落菌的乳酸菌,则可在清酒中生长,并生成乳酸和产生不愉快的味道。若在清酒中加入15mg/kg的溶菌酶,即可
起到良好的防腐效果[7]
。
2.1.4水产品的保鲜。一些新鲜水产品
(如:虾、鱼等)在含甘氨酸(0.1M)、溶菌酶(0.05%)和食盐(3%)的混合液中浸渍5min后沥去水分,保存在5C的冷库中,9d后无异味、
色泽无变化[6]。
2.1.5其他食品的保鲜。在香肠、奶油、生面条、饮料等食品中加入溶菌酶均可起到良好的保鲜作用。
在应用溶菌酶作为食品保鲜剂时,必需注意到酶的专一性。因为溶菌酶抗菌谱较窄,对于酵母、霉菌和革兰氏阴性菌等引起的腐败变质不能起到防腐作用。但将溶菌酶与植酸、聚合磷酸盐、甘氨酸同用,因发生协同作用,对革兰氏阴
性菌的溶菌力可显着加强,可大大提高了防腐效果[8]。
2.2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase)对食品
有多种作用,作为在食品保鲜及包装中最大的作用是除氧,延长其食品的保鲜保质期。很多食品,尤其是生鲜食品,其保藏过程中或加工过程中,氧的存在使其保鲜受到很大影响,除氧是食品保藏中的必要手段。很多除氧方法效果都不佳,从选择抗氧剂的特性来说,利用葡萄糖氧化酶除氧是一种理想的方法,葡萄糖氧化酶具有对氧非常专一性的理想的抗氧作用。对于已经发生的氧化变质作用,它可阻止进一步
发展,或者在未变质时,它能防止发生[4]
。由于葡萄糖氧化
酶催化过程不仅能使葡萄糖氧化变性,而且在反应中消耗掉一个氧分子,因此,它可作为除葡萄糖剂和脱氧剂广泛应用于食品保鲜。
2.2.1脱糖保鲜。用葡萄糖氧化酶去除食品中残留的葡萄糖,目前应用最多的是生产脱水制品(如蛋白粉、蛋白片等)
中。例如蛋的蛋白中含有0.5%~0.6%的葡萄糖,葡萄糖的羰基与蛋白质的氨基发生Maillard反应,而使产品发生褐变、出现小黑点或使全蛋粉的溶解度下降等。因此在蛋液中加入适量的葡萄糖氧化酶(100~200mg/kg),不断地供给适量的氧气,在30~32C条件下处理一段时间,使葡萄糖完全氧
化,从而很好地保持蛋类制品的色泽和溶解性[7]
。此外,葡
萄糖氧化酶也可应用于脱水蔬菜、肉类及虾类食品保鲜中,防止因葡萄糖引起的褐变反应。
2.2.2防止食品氧化。氧化是造成食品色、
香、味变坏的重要因素,含量很低的氧就足以使食品氧化变质。将葡萄糖氧化酶和其作用底物葡萄糖混合在一起,包装于不透水而可透气的薄膜袋中,封闭后置于装有需保鲜食品的密闭容器中,当密闭容器中的氧气透过薄膜进入袋中,就在葡萄糖氧化酶的催化作用下与葡萄糖发生反应,从而达到除氧保鲜的目的。葡萄糖氧化酶也可直接加入到罐装果汁、酒、水果及色拉调料中,起到防止食品氧化变质的作用。如在啤酒加工过程中加入适量的葡萄糖氧化酶可以除去啤酒中的溶解氧和瓶颈氧,阻止啤酒的氧化变质。葡萄糖氧化酶又具有酶的专一性,不会对啤酒中的其他物质产生作用。因此葡萄糖氧化酶在防止啤酒老化,保持啤酒风味,延长保质期有显着的效
果[4]。又例如防止白葡萄酒在多酚氧化酶的作用下而变色、
果汁中的Vc因氧化而破坏、多脂食品中脂类因氧化而酸败等等。此外,也可有效地防止罐装容器内壁的氧化腐蚀。
此外,木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、霉菌酸性蛋白酶等都可以降解啤酒浑浊的蛋白质组分,防止啤酒冷浑浊,延长啤酒贮存期。
Ⅳ 用溶菌酶处理细菌菌体之后不用超声破碎可以么
细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞.方
法有三种:①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用SDS处理细胞; ③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎.
由于高等动物DNA 主要存在于细胞核与线粒体中,所以提取时有两个困难(高等植物与此类似):
①破碎细胞难;从处死动物٠分离组织器宫到破碎细胞费时长.在此时期间DNA 可能会被DN ase降解,而动物组织:特别是肌肉组织很难破碎,即使是较易破碎的肝٠肾等组织也往往使用组织匀浆器,易造成DNA 断裂.
②分子量大,一般比细菌的大2—3个数量级,比病毒的大4—5个数量.对不同生物材料,要根据具体情况选择适当的分离提取方法.
Ⅳ 有关天根细菌基因组DNA提取试剂盒中第二步革兰氏阳性菌的问题
一般DNA提取试剂盒中都是配好的,也可以找替代的缓冲液。如果没有现成的也可以根据参考的配置:Tris—盐酸缓冲液,基本的工具书中都有,溶菌酶也该是用液体低温分装的,根据说明滴加!
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使用敷尔佳冻干粉的体会
我给你安利敷尔佳冻干粉,根据自己的需要,我选择了小白瓶,小白瓶美白,小绿瓶祛痘,小红瓶祛皱,因为据说配方和SKII的小灯泡的主要美白成分是一样的,一盒五个,每一个必须在一周内用完,目前我已经用完了一盒,我是洗完脸先用,早晚各一次,每次2-3滴,吸收很快,没有油腻感。我是皮肤干燥的敏感肌,用了之后没有不舒服的感觉。不知道是不是心理作用,我每次敷面膜前都会用,感觉效果更好!
Ⅶ 冻干粉的正确使用方法
将冻干粉与溶菌酶混合后,用滴定管或注射剂取六分之一量,置于掌心轻拍于面部直至完全吸收,或使用低温导引器,效果更明显。
冻干粉具有美容养颜的作用,因为冻干粉中含有较多的营养物质,可以提高患者的皮肤代谢,改善脸部微循环。而且冻干粉还可以促进身体分泌纤维蛋白和促进合成,增加皮肤的弹性。因此可以起到嫩肤、美容养颜的效果。
另外,冻干粉还可以杀灭细菌,起到消炎的作用,所以可以用于治疗面部痤疮。冻干粉还可以在一定程度上增强体质,起到预防感冒的作用。但是建议在使用前应先做过敏试验,防止皮肤过于敏感,出现过敏的症状。
冻干粉使用注意事项
使用冻干粉之前,应先用洗面奶清洗脸部,适当的涂抹些爽肤水,滋养下肌肤,然后再涂抹冻干粉。
冻干粉分为两瓶,不是只使用其中一瓶,更不能直接涂抹冻干粉,应该将两瓶混在一起摇均使用,如果直接使用冻干粉,容易导致脸部滋生痘痘,油脂分泌旺盛,对皮肤极为不利。
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Ⅷ 水煮法提取DNA 的详细过程
摘要 您好,为您找到更细致的过程文字:水煮法提取DNA
Ⅸ 在溶菌酶的粗提取实验中,为什么将蛋清缓冲液PH调到4.7后又调到8.0
因为卵清蛋白的等电点是4.7,为了提纯溶菌酶,要将卵清蛋白沉淀,所以要把PH调到4.7,至于8.0,这是溶菌酶的最适PH值。
提取溶菌酶的方法:
树脂预处理:干树脂清水浸泡,使其充分膨胀并除去细小颗粒和较大杂质; 1 mol/L 的HCl浸泡2 h,去离子水洗3次至至近中性;抽滤收集树脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h,去离子水洗3次至近中性;抽滤收集树脂,加0.15 mol/L、pH 值为6.5的磷酸缓冲液平衡过夜待用。
蛋清制备:将3个新鲜鸡蛋洗净干燥,小端敲一个小洞,大端打一个小孔进气,分离得鸡蛋清,用1 mol/L HCl调节PH到7。过滤前称量烧杯重48.7g,缓慢搅拌用灭菌的两层纱布过滤除去脐带块和碎蛋壳等,蛋清与烧杯总重207.5g,蛋清净重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液调pH 值至7.0,量蛋清体积为100 ml。在调节PH时蛋清中出现少量白色沉淀,可能为部分蛋白由于局部过酸而变性。
吸附:蛋清在不断搅拌下加入抽滤好的724树脂25g(相当蛋清四分之一体积的树脂),冰水浴中磁力搅拌器缓慢搅拌(使树脂全部悬浮在鸡蛋清中,搅拌不能起泡)吸附2.5 h,4℃静置1.5h。然后3000r/min离心15min分层,收集树脂,回收蛋清(留样A)。
去除杂蛋白:收集树脂用去离子水振荡水洗直至洗液澄清(至无白沫为止),吸管轻吸去洗液,以去除杂蛋白。(每洗1次,离心1次,总共3次)冰浴中用等体积的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸缓冲液搅拌洗涤15min,抽滤,重复洗三次,注意防止树脂流失。最后一次抽滤滤除树脂水分至干燥。
洗脱溶菌酶:树脂中加入35ml(等体积)的10%(NH4)2SO4溶液搅拌洗脱30 min,抽滤,使溶菌酶从树脂上洗脱下来,重复两次,合并收集洗脱液(留样),洗脱液过滤后,准确量取体积100ml。(留样B)
盐析:每83mL洗脱液加32g磨细的固体(NH4)2SO4,本实验中总量为38.55g。缓慢加入(NH4)2SO4搅拌待完全溶解后保鲜膜封口,置于4℃冰箱盐析过夜。
透析:待白色沉淀析出,3000r/min离心15 min,收集沉淀,用去离子水将沉淀洗下并全部溶解(4.5ml去离子水),装于透析袋中,于去离子水中透析(冰浴),期间2次更换去离子水,直至用BaCl2检测透析完全。透析装置中加入磁子,于磁力搅拌器中搅拌加快透析速度。
去杂质蛋白:取出透析袋中的透析液,用0.1mol/L HCl调整pH4.6,产生少量白色沉淀(留样D),可能为杂蛋白。3000r/min离心10min,收集上清液(留样C 20ul)。
浓缩:用PEG-20000浓缩上清液至1.5ml(留样E,20ul,加loading buffer,出现黄色(可能为浓缩时透析袋中渗入了PEG-20000)。[5][6]
Ⅹ 请教用溶菌酶裂解细菌的配方
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白,属乙酰多糖酶。存在于唾液、乳汁、泪液和鼻及气管等分泌物中,能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 ),使它能与细菌牢固结合,并水解细菌细胞壁肽聚糖,使细菌裂解死亡。 本实验在平板上进行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子粘性蛋白,属乙酰多糖酶。存在于唾液、乳汁、泪液和鼻及气管等分泌物中,能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点( pH11.0 ),使它能与细菌牢固结合,并水解细菌细胞壁肽聚糖,使细菌裂解死亡。
本实验在平板上进行唾液酶的测定。溶菌酶与枯草芽胞杆菌( Bacillus subtilis )作用后,可使该菌因细胞壁破坏而溶解,致使琼脂板加样孔周围出现溶菌环。溶菌环直径与样品中溶菌酶含量的对数呈直线关系。
【材料】
1• 无菌 PBS ( pH6.4 , 1/15mol/L ), 5mol/LKOH , 3%PBS 琼脂,溶菌酶标准品,受验者唾液。
2• 枯草芽胞杆菌 12 小时培养物。
3• 10×100 试管,试管架,无菌平皿,打孔器,微量加样器。
4• 分光光度计,水浴箱,温箱等。
【方法】
1. 菌液配制:将 PBS 加入枯草芽胞杆菌斜面,置室温 5-10 分钟后制成菌悬液;在波长 640nm 处,测定菌悬液的浓度,并将菌液浓度调至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶标准液配制:称取溶菌酶标准品,用 PBS 配成 1000 m g/ml ,置冰箱冻存,临用时再稀释成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液标本:待检测者用清水漱口后,将唾液收集于消毒平皿内待用。
4. 加热融化 3% 琼脂,冷至 60 -70℃ ,与预热好的枯草芽胞杆菌菌悬液等体积混合,到平板。用打孔器在平板上打孔,孔间距约 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 个。
5. 各孔内依次加溶菌酶标准品和唾液样品,每孔 20 m l 。
6. 置于 24 -26 ℃ 12-18 小时后测量溶菌环直径。
【结果判断】
记录溶菌环的直径( mm )于下表,绘制标准曲线,并从标准曲线上查出所测样品的溶菌酶含量。