细菌标本片常用制片方法

Ⅰ 光学显微镜如何制片 观察细菌

观察细菌用涂片，即将细菌培养液均匀涂布在载玻片上制成玻片标本。 涂完片后染色，加盖玻片固定。

Ⅱ 简述制备细菌玻片标本的方法

细菌标本片的制备，实际上真没这必要，我一般碘酒，或者溴酚蓝滴上一染，盖上玻片就看了。
1.抹片
（1）固体培养物：取洁净的玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌后，取1-2环无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，从固体培养基上挑取菌落或菌苔少许，与水混匀，作成直径1cm的涂面。接种环用后需要灭菌。
（2）液体培养物：可直接用灭菌接种环钩取细菌培养液1-2环，在玻片上作直径1cm涂面。
（3）液体病料（血液，渗出液，腹水）：取一张边缘整齐的载玻片，用一端蘸取血液等液体材料少许，在另一张洁净的玻片上，一45°角均匀推成一薄层的涂面。
（4）组织病料：以无菌剪刀、镊子剪去被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做3-5个压印或涂抹成适当大小的一薄层。
无论何种方法，切忌涂抹太厚，否则不利于染色和观察
2.干燥
涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂片涂面向上，置于火焰高处微加热干燥。
3.固定
（1）火焰固定。是常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（4-6次），以手背触及玻片微烫手为宜。
（2）化学固定。有的血片，组织触片用姬姆萨染色时，要用甲醇固定3-5min
二、常用的细菌染色法
1.美蓝染色法：在经火焰固定的涂片上，滴加适量美兰染色液覆盖涂面，染色2-3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干镜检，结果，菌体呈蓝色
2.革兰氏染色法。
（1）在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，染1-3min，水洗
（2）加革兰氏碘液媒染，作用1-2min，水洗
（3）加95%酒精脱色约30s至1min，水洗
（4）加稀释石碳酸复红或沙黄水溶液复染30s左右，水洗，吸干后镜检
3.瑞氏染色法
细菌抹片自然干燥后，滴加瑞士染色液于涂片上以固定标本，1-3min后，再滴加与染色液等量的磷酸盐缓冲液或中性蒸馏水与玻片上，轻轻摇晃使染色液混合均匀，5min左右水洗，干后镜检，菌体呈蓝色，组织细胞的胞浆呈红色，细胞核呈蓝色
4.姬姆萨染色法。血片或组织触片自然干燥后，用甲醇固定3-5min，干燥后在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的缸里，染色30min，或者染色数小时或24h，取出水洗，吸干或烘干，镜检。细菌呈蓝青色，组织细胞浆呈红色，细胞核呈蓝色

Ⅲ 怎样制作细菌标本（放在显微镜下观察的那种）

先挑取一环(接种环)生理盐水于玻片上. 挑一点菌落(量要少,"."那么大就够) 在玻片上生理盐水附近磨菌落,菌落磨到玻片上,生理盐水拉进来与菌落混合涂匀.如果直接放到生理盐水里,很可能菌落整块从环上脱落就不容易涂开

Ⅳ 微生物细菌制片时，除了热固定法，细菌的固定方法还有那些

固定有物理方法和化学方法两种。用干燥、高热和低温骤冷等方法进行固定称为物理方法固定，如血液涂片就是干燥固定；细菌涂片可以用加热法固定；冰冻切片是利用低温骤冷。化学方法固定就是用化学试剂配制成固定液使之固定。

Ⅳ 观察细菌采取的制片方法是涂片还是水浸片法

在菌体形态观察中，需要进行制片后才能在显微镜下观察，观察细菌时采取的制片方法是涂片法，观察放线菌时采取的制片方法是压片法，观察真菌采取的制片方法是水浸片。

Ⅵ 物体的微细结构必须制成什么才能在显微镜下观察清楚

物体的细菌结构必须制成玻片标本在显微镜下才能观察清楚。

显微玻片标本简称玻片标本(preparation)原意是指经过一定处理的生物的整体或局部的标本。但现在则指为显微镜观察所制作的生物和矿物标本。制作生物材料的显微玻片标本有涂抹法（涂片法）、挤压法（压片法）和切片法。

(6)细菌标本片常用制片方法扩展阅读

细菌的制片方法：在镜检前必须将被检物制成玻片标本，才能观察，用于标本的玻片应非常干净。

根据被检物所要检查的项目和供检材料的不同，其制片方法有以下三种：

①普通法（压片法）：用普通法制作活细菌标本，不但便于观察细菌的运动，而且还能观察细菌的形状、大小和芽孢。其方法是：在干净的载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环挑取一环供检材料放入水中并混匀，若供检材料为液体而不太浓时，则不必加水。

然后加放盖玻片，在盖片时，应先把盖片的一端放在载玻片上，再慢慢向下压盖，勿使水从该玻片边缘溢出。同时避免发生气泡，然后用干净的玻璃棒等使盖片紧贴在载玻片上。

为了便于观察，可用美蓝或复红等染色液代替谁使用，将细菌染成蓝色或红色，然后把盖玻片盖上，在进行镜检，这样看的较为清晰。

②悬滴法：悬滴法用于观察生活状态的细菌，如细菌的运动、繁殖方式、孢子萌发等。其方法是：取一滴蒸馏水或培养液于干净的盖玻片中央，再取一环培养好的菌体，接种于盖玻片的液滴中。

然后将盖玻片翻转过来，盖于凹玻片的凹窝中，使菌液正好倒垂在载玻片的凹窝中央，不要使水滴碰到凹窝的壁和底。

为防止干燥，在盖玻片边沿上涂上凡士林，使菌液紧紧处在密闭的小室中，即可镜检。因为没有染色的活细菌是透明的，不易看到，必须降低聚光器或缩小光圈，以减少照明强度，认真观察，才能得到良好效果。

若观察其繁殖或孢子萌发时，需将带有悬滴的玻片放在底部铺有湿纸或湿棉的培养皿中，以便保湿，盖好皿盖进行定温培养，而后镜检。

③涂片法：涂片法适用于细菌结构的观察，其方法是：首先在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，用灭菌的接种环取少许菌体，放在载玻片上，与水混合涂成直径约为1cm的均匀薄片，即成涂片。用这种涂片法制的标本在显微镜下一般不直接看，经染色后才能看得清晰。

Ⅶ 叙述细菌,放线菌,酵母菌,霉菌的光学显微镜制片方法

一、细菌制片及简单染色：
1、涂片
取洁净的载玻片1张，将其在火焰上微微加热，除去上面的油脂，冷却，在中央部位滴加一滴无菌水，用接种环在火焰旁从培养基上挑取少量菌体与水混合。用接种环将菌体涂成直径约1cm的均匀薄层。注意，取菌量不宜过大，一面造成军体重叠。
2、干燥
放在桌面上，待其自然干燥。
3、固定
将已干燥的涂片标本向上，在火焰上通过3-4次固定。其目的是杀死细菌；使菌体蛋白质凝固，菌体牢固粘附于载玻片上，染色时不被染液或水冲掉；增加菌体对染料的结合力，使图片易着色。
4、染色
在涂片上滴加染料1-2滴，使其布满涂菌部分，染色1分钟。
5、冲洗
斜置玻片，倾去染液。用水轻轻冲去染液，至流水变清。注意水流不能直接冲洗涂菌处，以免将涂菌冲洗掉。
6、吸干
用吸水纸轻轻吸去玻片上的水分，干燥后镜检。

二、酵母菌制片及简单染色。
水—碘液浸片法。将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍后，滴加一滴于载破片中央，无菌操
作取少许菌体置于染色中混匀，盖上破片后镜剑。

三、放线菌制片方法（插片法）
1、在马铃薯浸汁琼脂培养基平板上，划线接入少量放线菌的孢子，在接种线旁倾斜地插入无菌盖玻片，于28-30℃培养。
2、培养3～4天后，菌丝沿着盖玻片向上生长，待菌丝长好后，取出盖玻片放在干净的载玻片上，置于显微镜下观察。

四、霉菌制片法
水浸制片法：
1、在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水。
2、用解剖针从生长有霉菌的斜面挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。（也可省略酒精和水浸润，洗涤）
3、注意取菌时，毛霉和根霉用解剖针挑取少量菌丝即可，青霉和黑曲霉和培养基结合紧密，不易挑取，可连培养基一起挑取，再在染液中分离菌丝。青霉和曲霉的培养时间不宜过长，一般为2-2.5天，以免菌丝与培养基不好剥离。
4、盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）。（黑曲霉不易观察到足细胞）
5、镜检：先用低倍镜，必要时转换高倍镜镜检并记录观察结果。

Ⅷ 制作细菌标本片是由哪几个步骤

制作微生物玻片标本通常采用涂片法，微生物包括细菌和真菌（或包括病毒），细菌个体小，通常用涂片法制作玻片标本。涂片法是装片法制作玻片标本的一种方法。制作方法是，细菌可以用细菌液直接涂布在载玻片上，盖上盖片直接观察或干燥后染色观察，染色观察通常需要洗去染色液后观察。制作真菌标本可以采用涂片法、撕片法、贴片法和切片法，单细胞或孢子或菌丝采用涂片法，大型真菌有较大的组织块，可以采用撕片法（如撕取一部分蘑菇丝）、贴片法（将蘑菇的菌褶贴到载片上）和切片法（切片的方式观察蘑菇的结构）。
制作植物玻片标本方法很多，根据材料不同和观察目的不同采用不同方法。涂片法（观察果实营养组织，如西瓜瓤）、撕片法（观察洋葱表皮、观察导管）、切片法（观察组织、器官结构）、磨片法（坚硬的果核磨成薄片观察）。
切片法分为徒手切片、冰冻切片和石蜡切片等方法。

Ⅸ 细菌涂片怎么制作

实验准备材料：酒精灯、接种环、染液、载玻片、菌种、生理盐水等

步骤：

1.取一块干净无菌的载玻片，在载玻片中央滴一滴生理盐水。

(9)细菌标本片常用制片方法扩展阅读：

实验注意事项：

1.接种环必须要圆滑平整，使用前后必须在酒精灯上烧灼灭菌。

2.注意做好实验过程记录，实验名称及日期。

3.涂片不要太厚，要均匀。

4.涂片固定时一定要把握时间和温度，避免温度过高引起菌体破坏。