㈠ 艾滋病检测有哪些
目前检测HIV的方法有100多种,可以分为抗体检测和病毒检测两大类。
病毒检测:包括细胞培养(病毒分离)、p24抗原检测和病毒核酸检测。早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体,间接地诊断HIV感染。随着生物科技的发展,近年来分子生物学方法不断被应用到HIV的检测中,尤其核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向,它可直接检查HIV RNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染,而且比P24抗原检测方法更灵敏。
抗体检测:HIV抗体一般在人感染后几周逐渐出现,可延续至终生,血清学试验分为初筛和确认试验。最常用的初筛试验和确认试验分别是酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验(WB)。常规实验方法:酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验(WestBlot)、间接免疫荧光法(IFA)。快速检测方法:明胶颗粒凝集试验、斑点免疫结合试验、P24抗原的检测、分子生物学方法、RT?PCR检测法、荧光实时PCR检测技术、支链DNA(bDNA)、连接酶酶促链式反应(LCR)、核酸序列依赖性扩增(NASBA)、转录介导的扩增(TMA) 。
【病毒感染机制】
HIV病毒侵入人体后,其表面糖蛋白gp120与细胞表面受体蛋白CD4以高亲和力结合,吸附到宿主细胞上;gp120再与宿主细胞表面辅助受体相互作用,使病毒与宿主细胞膜更接近;gp41产生一系列构象变化,其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜,导致病毒包膜与细胞膜的最终融合,病毒RNA进入细胞。在HIV感染后,最先能够监测到病毒RNA、然后是p24抗原,最后是抗体。常见的检测如下:
1.血液检查:
A) 血常规:常有红细胞,血红蛋白降低,呈轻度正色素、正细胞性贫血。白细胞常降至4.0×109/L以下。分类中性粒细胞增加,有核左移现象。少数表现为粒细胞减少。淋巴细胞明显减少,多<1.0×109/L 。有浆细胞样淋巴细胞和含空泡的单核细胞出现。血小板一般无变化,一旦有变化,血小板可明显减少。
B) β2 -微球蛋白和新蝶呤(neopterin) 用放射免疫法(RIA)测定血清β2微球蛋白和新蝶呤。它们是被激活的巨噬细胞的产物,其血清水平的升高意味着免疫激活,具有与CD4 T细胞绝对计数、淋巴细胞百分率、CD4/CD8细胞比例下降同样的临床意义,即预示病情进展至获得性免疫缺陷综合征。
2.免疫系统检测:
(1)淋巴细胞亚群检查:CD4 T细胞减少,CD4/CD8比例下降,正常人CD4/CD8之比为1.75~2.1,而获得性免疫缺陷综合征患者常<1.0。
(2)T细胞功能下降:迟发型变态反应性皮试阴性。体外非特异性有丝分裂原刺激时,淋巴细胞转化降低。T细胞的细胞毒作用降低。T细胞产生白细胞介素-2和干扰素γ减少。
(3)B细胞功能失调:有不同程度的免疫球蛋白及免疫复合物升高。出现自身抗体,如产生RF、抗核抗体和抗淋巴细胞抗体等。
(4)自然杀伤细胞活性下降。
(5)淋巴结活检:在获得性免疫缺陷综合征的高发地区及高危人群中,对腹股沟以外部位的淋巴结肿大,特别是持续性颈部淋巴结肿大的人普遍进行淋巴结活检是重要的措施,可见到淋巴结的反应性病变和肿瘤性病变等非特异的、但具有一定诊断价值的病理表现。有的获得性免疫缺陷综合征患者,表浅淋巴结消失,不易做活检。
3.其他 小便检查常有蛋白尿。血中肌酸酐和尿素氮可升高。
4.病原学检查
(1)HIV-1的病原学检查:
A) HIV-1血清抗体的检测:包括抗-gp120及抗-P24,大多数HIV-1感染者在3个月内血清抗体阳转。因而,测定血清抗体是目前确定有无HIV感染的最简便、快速而有效的方法。常用方法有酶联免疫吸附试验(ELISA),间接免疫荧光测定(IFA),放射免疫试验(RIA)等。一般多用ELISA法作初查,其灵敏性为99.5%。但由于它是用HIV-1作为抗原进行检测,与淋巴细胞抗原有交叉抗体,可有假阳性出现。故对初查阳性者,再用硝酸纤维膜免疫印迹试验(Westen blot,WB)确认。
硝酸纤维膜杂交试验特异性强,假阳性率极低。其诊断标准是:如ELISA连续两次阳性,且WB检测出现p24,gp41,gp120或gp160条带中任何两条条带阳性者,则可确认为HIV感染。如没有两条条带阳性者,则只能诊为“未定型”(indeterminate pattern)。这时可用聚合酶链反应(PCR)检测其特异的病毒核酸,或继续密切观察,反复作上述检测,以明确诊断。
B) 检测病毒抗原:由于抗体出现晚于抗原,因而不能早期诊断。如果在抗HIV-1阳转之前的窗口期筛选献血员,就会出现假阴性,后果是非常严重的。因此,筛选献血员最好加测病毒抗原。通常检测P24,其灵敏性及特异性均较高。既有助于早期诊断,也可用于献血员筛选、药物疗效考核等。
C) 检测病毒核酸:在抗HIV-1阳转之前的窗口期,还可用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HIV RNA。此法灵敏度更高,检测周期短,也有助于早期发现、献血员筛选、药物疗效考核等。但操作必须十分小心,防止污染,以避免假阳性。
D) 病毒分离和培养:从患者的淋巴细胞、血液、精液及其他体液中均可分离出病毒,阳性率较高,反复多次分离阳性率可达100%。分离的病毒可用CD4 T细胞培养。但方法复杂,成本较高,一般只用于实验室研究。分离或培养到HIV均为确诊的依据。
(2)HIV-2的病原学检查:血清学检查发现约80%的HIV- 1和HIV-2感染之间存在交叉反应。故用于检测HIV-1感染的ELISA和RIBA法难以确定HIV-2感染。特别是发生了HIV-l和HIV-2双重感染时,使诊断更为困难。不过,HIV-2特异的ELISA及WB法药盒现已有商品出售。在HIV-2流行区,可在检测HIV-1的基础上,先用HIV-2特异的ELISA药盒区别HIV-1和HIV-2感染,再用HIV-2特异的WB法作确认试验。在非流行区,当HIV-1试验阳性或弱阳性,而WB法不明确或阴性,或临床怀疑获得性免疫缺陷综合征,而HIV-1试验弱阳性、WB法阴性时,也要用HIV-2特异的ELISA药盒检测,以明确诊断。
近来为了节省时间和经费,大部分试剂盒厂家和血库采用HIV-1和HIV-2抗体联合测定。联合测定的ELISA模式与HIV-1抗体测定相同,不同的是在包被固相载体时用HIV-1和HIV-2二种抗原的混合物替代单一的HIV-1抗原。
【并发症相关检测】
本病极易并发机会性感染和恶性肿瘤,并常死于这些并发症。因此,对本病患者进行胸部及胃肠道X线检查,及早作出机会性感染和恶性肿瘤的诊断,对及时治疗和延长患者的生命是十分重要的。
1.消化道X线检查 胃肠道机会性感染主要的病原体是巨细胞病毒,恶性肿瘤仍以卡波齐肉瘤为常见。
(1)巨细胞病毒感染:巨细胞病毒可侵犯胃肠道的任何部位,但以结肠最为常见,个别病例可累及整个胃肠道。巨细胞病毒性食管炎或胃炎在X线片上表现为黏膜皱襞肿胀,小的充盈缺损及浅表溃疡或糜烂等。巨细胞病毒性结肠炎病变有散在性及局灶性两种。散在性者病变侵犯整个胃肠道,但程度不一。钡灌肠示结肠袋形消失,肠腔轻度狭窄,肠黏膜可有肉芽肿、糜烂及浅表溃疡等。节段性者以侵犯盲肠及末端回肠为主。X线造影显示盲肠痉挛,黏膜皱襞不规则增厚及表浅的鹅口疮样溃疡,但应与溃疡性结肠炎和克罗恩病的X线表现相鉴别。上述X线表现均为非特异性的,应结合临床资料进行分析。必要时应配合内镜加活检以确诊。
(2)卡波齐肉瘤:卡波齐肉瘤可发生在胃肠道的任何部位。食管卡波齐肉瘤在X线片上显示食管中段呈多发性腔内息肉样病变。胃卡波齐肉瘤表现为胃远端散在性、多发性无蒂的黏膜下缺损,轮廓光滑,直径几毫米至几厘米。少数病变中央有钡剂积聚,显示“牛眼征”,在充气扩张的胃内还可见不规则增厚的黏膜皱襞。十二指肠卡波齐肉瘤为球部内黏膜下结节或轻度斑片状隆起。小肠卡波齐肉瘤为多发性结节伴中央溃疡。结肠卡波齐肉瘤以直肠最明显,表现为整个结肠黏膜下散在的结节状充盈缺损,直径几毫米至几厘米不等。较晚期患者结节融合和环形浸润肠壁,使直肠狭窄和僵直。
2.胸部X线检查 常见的机会性感染有卡氏肺孢菌肺炎,恶性肿瘤有卡波齐(Kaposi)肉瘤。
(1)卡氏肺孢菌肺炎:典型X线表现是:初起时两肺先出现混合性肺泡及间质炎性改变,以肺门周围散在性网状结节样间质浸润为主,从肺门向外扩展。随后在数日内病变进入肺泡,发展成肺泡性实变,在肺野内形成均匀斑片状实变影,其间夹杂有广泛性或局灶性肺气肿或小段肺不张,以肺外围最明显。呈粗糙的或细颗粒状的“毛玻璃样”表现,病变可仅限于一个肺叶,也可弥漫分布。有时片状阴影可融合成大片状均匀致密的浸润影,呈向心性分布,与肺水肿的X线特征很相似。也可在“毛玻璃样”背景上出现结节状病灶。在肺周围还可有条状阴影,有些则仅表现为粗结节阴影。但这些X线表现没有特异性,确诊需要反复经纤维支气管镜检找到病原。不典型X线表现有:肺大叶性实变,可一叶也可多叶实变;肺空腔形成或胸腔积液;肺泡内渗出物亦可钙化等。应注意与肺结核或肺部真菌感染相鉴别。胸内淋巴结增大,主要是位于纵隔、右气管旁及两侧肺门的淋巴结增大。有的病例甚至无呼吸系统症状出现,而仅于X线片上显示胸内淋巴结增大,以后才被证实为获得性免疫缺陷综合征。此种X线表现强烈提示肺内有严重感染或肿瘤存在,需作纤维支气管镜或淋巴结活检。
(2)卡波齐肉瘤:最常见的X线异常是肺间质浸润,约占肺卡波齐肉瘤患者的80%。此外,可见肺野内直径<1cm的、境界不清楚的多发性小结节影及明显的条状阴影。常伴有纵隔及肺门淋巴结增大,也可有胸腔积液。当X线表现不明显时,CT检查有助诊断。
艾滋病病应该如何鉴别?
艾滋病病毒抗体阳性,又具有下述任何一项者,可为实验确诊艾滋病病人。
(1)近期内(3-6个月)体重减轻10%以上,且持续发热达38℃一个月以上;
(2)近期内(3-6个月)体重减轻10%以上,且持续腹泻(每日达3-5次)一个月以上。
(3)卡氏肺囊虫肺炎(PCR)
(4)卡波济肉瘤KS。
(5)明显的霉菌或其他条件致病感染。
2.若抗体阳性者体重减轻、发热、腹泻症状接近上述第1项时,可为实验确诊艾滋病病人。
(1)CD4/CD8(辅助/抑制)淋巴细胞计数比值<1,CD4细胞计数下降;
(2)全身淋巴结肿大;
(3)长期腹泻引起水电解质紊乱,神经系统的损伤引起智力下降、反应迟钝、抑郁、忧虑、类妄想狂精神病或痴呆。明显的中枢神经系统占位性病变的症状和体征,出现痴呆,辩别能力丧失,或运动神经功能障碍。
需与下列疾病进行鉴别:
一、原发性免疫缺陷病。
二、 继发性免疫缺陷病,皮质激素,化疗,放疗后引起或恶性肿瘤等继发免疫疾病。
三、特发性CD4+T淋巴细胞减少症,酷似AIDS,但无HIV感染。
四、自身免疫性疾病:结缔组织病,血液病等,AIDS有发热、消瘦则需与上述疾病鉴别。
五、淋巴结肿大疾病:如KS,何杰金病,淋巴瘤,血液病。
六、假性艾滋病综合征:AIDS恐怖症,英国同性恋中见到一些与艾滋病早期症状类似的神经症状群。
七、中枢神经系统疾病:脑损害可以是艾滋病或其他原因引起的,需予鉴别。
㈡ 常用的艾滋病检测方法有哪些
常用的艾滋病检测有:
抗体检测:HIV-1/HIV-2抗体检测是HIV 检测的金标准。经筛查试验(初筛和复检)确证试验两步。初筛实验室主要是采用酶联免疫试验、化学发光法或免疫荧光法试验。确认实验室进行复检主要是检测血清gp24及gp120抗体,灵敏度达99%,抗体初筛检测结果还要用免疫蛋白印迹法检测确认即确认试验。
抗原检测:抗HIVp24抗原单克隆抗体制备试剂,用酶联免疫法测血清HIVp24抗原。有助于抗体产生窗口期和新生儿早期感染的诊断。
病毒载量测定:病毒载量的测定可了解疾病进展,提供病毒治疗依据、评估治疗效果、指导治疗方案调整以及为早期诊断提供参考。可用荧光定量PCR扩增技术。
㈢ 如何检测艾滋病 艾滋病自我检测方法介绍
1、艾滋病实验室检测:
AIDS的实验室检测主要包括HIV抗体、HIV核酸、CD4+T淋巴细胞、HIV基因型耐药检测等。HIV1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准;HIV核酸定量(病毒载量)检测和CD4+T淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV基因型耐药检测可为高效抗反转录病毒治疗(HAART)方案的选择和更换提供科学指导。
2、艾滋病自我检测:
(1)首先要看自己是否有如下高危行为:性生活比较复杂、男同性恋者、吸毒或是与他人混用注射器、曾被感染有艾滋病毒的针头或是血制品感染史、母亲为艾滋病患者等。
(2)如有高危行为者,若是出现以下两种或两种以上情况,要引起高度警觉:近期体重骤降10%以上、慢性腹泻或咳嗽长达一个月以上、持续或间歇发热达一个月以上、全身可触及有淋巴结肿大、反复出现带状疱疹或是慢性播散性单纯疱疹感染、口咽部有念珠菌感染。
(3)抽血进行常规检查,有不同程度的贫血,同时白细胞计数减少提示有病毒感染。尿常规可见尿蛋白。
(4)去医院进行HIV-1抗体的检测,ELISA测定法结果连续两次为阳性者,再行WB法进行确诊。
(5)从血液、单个核细胞及脑脊液中如果能够分离出人免疫缺陷病毒者,可以作为判定感染艾滋病。
㈣ 艾滋病多久才能查出来
目前爱滋病检测的常用方法有3种,一,PA法,这种方法相对用的比较少,准确度很高,费用也比较贵,一般在省市级的CDC才会使用.
二,酶联法,使用最多,准确度和PA法基本相当,普及率最高.
三,金标法,使用也很多,准确度略低于以上两种,优点是出结果的速度快,一般15~30分钟就可以拿到结果.
如果怀疑感染了爱滋病,以目前的医学条件,起码要在3~4周后做第一次检测才有意义.
以为一,二种检测方法为标准,感染后可以检测出的时间和检出概率如下:
1周检查出抗体的概率:22.6%
2周检查出抗体的概率:53.775%
3周检查出抗体的概率:84.1%
4周检查出抗体的概率:98.4%
5周检查出抗体的概率:99.45%
6周检查出抗体的概率:99.994%
7周检查出抗体的概率:99.99986%
8周检查出抗体的概率:99.999999979%
第三种方法在以上时间内的检出概率,也略低于前两种.
但是实际上,采用前2种方法检测的普通人群中,经4周检测为没有感染,后期又转阳的人,全国记录在案的只有数人.
6周检测为阴,后又转阳的人,全国只出现过一两例,全世界也寥寥无几.
8周检测为阴,后又转阳的,从未出现过.
注:以上概率和案例,只对普通人群适用,吸毒人群,近期内曾经接受过大量输血者,近期接受过内脏移植等大型内脏手术者,长期服用抗病毒转录药物者(包括治疗肝炎等病毒疾病的药物,比如拉夫米定等,不包括普通感冒药,普通抗生素,期间服用过阿莫西林等抗生素消炎药物不会影响检测结果.)
目前国家公布的爱滋病检测窗口期为3个月,但是实际上,此标准是1992年公布的,已经18年未改变,但是18年内,爱滋病检测试剂已经获得了很大的提高,以酶联检测试剂为例,1992年使用的是第2代酶联检测试剂,平均窗口期为45天,但是2003年后,全国范围内已经全部至少采用第3代试剂,部分机构甚至已经使用第4代试剂,但是实际上,第3,4代试剂在使用上无明显时间差异,4周内的检测,4代试剂检出率高于3代,4周后3代和4代基本持平,可是真正的检测,只有4周后才会真正有意义.
如果你怀疑你感染了爱滋病病毒,那么你可以在至少3~4周后去当地三甲医院或者疾病控制中心做第一次检测,第一次检测可以排除大部分可能,也可以大大缓解心理压力,3~4周前检测基本无意义.
但是真正想让自己放心,仍需要在6~8周再去做第2次检测,如果第2次检测结果仍然为阴,那么恭喜你,你没有被感染上病毒.
另外,90%以上的爱滋病病毒感染者,感染初期是没有明显症状的,根据相关专家的结论,唯一可参考的爱滋病初期症状是长时间的持续发烧,至少在37.5度以上,这个37.5度以上的意思就是……实际上大部分感染者持续发烧时候的体温,是在38度以上的,而且会持续数天到一周以上,此外的任何症状,并没有意义。
有症状的,不代表就感染了病毒,没有症状更不代表没感染,所以最好的确定方法只有一个,就是去做血液检测。
㈤ 艾滋的症状还有检测方法
从感染艾滋病病毒到发病有一个完整的自然过程,临床上将这个过程分为四期:
急性感染期、潜伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期。
不是每个感染者都会完整的出现四期表现,但每个疾病阶段的患者在临床上都可以见到。四个时期不同的临床表现是一个渐进的和连贯的病程发展过程。
1、急性感染期 窗口期也在这个时间。HIV侵袭人体后对机体的刺激所引起的反应。病人发热、皮疹、淋巴结肿大、还会发生乏力、出汗、恶心、呕吐、腹泻、咽炎等。有的还出现急性无菌性脑膜炎,表现为头痛、神经性症状和脑膜刺激症。末梢血检查,白细胞总数正常,或淋巴细胞减少,单核细胞增加。急性感染期时,症状常较轻微,容易被忽略。在被感染2—6周后,血清HIV抗体可呈现阳性反应。此后,临床上出现一个长短不等的、相对健康的、无症状的潜伏期。
2、潜伏期 感染者可以没有任何临床症状,但潜伏期不是静止期,更不是安全期,病毒在持续繁殖,具有强烈的破坏作用。潜伏期指的是从感染HIV开始,到出现艾滋病临床症状和体征的时间。艾滋病的平均潜伏期,现在认为是2-10年。这对早期发现病人及预防都造成很大困难。
3、艾滋病前期 潜伏期后开始出现与艾滋病有关的症状和体征,直至发展成典型的艾滋病的一段时间。这个时期,有很多命名,包括“艾滋病相关综合症”、“淋巴结病相关综合症”、“持续性泛发性淋巴结病”、“艾滋病前综合症”等。这时,病人已具备了艾滋病的最基本特点,即细胞免疫缺陷,只是症状较轻而已。主要的临床表现有: A.淋巴结肿大 此期最主要的临床表现之一。主要是浅表淋巴结肿大。发生的部位多见于头颈部、腋窝、腹股沟、颈后、耳前、耳后、股淋巴结、颌下淋巴结等。一般至少有两处以上的部位,有的多达十几处。肿大的淋巴结对一般治疗无反应,常持续肿大超过半年以上。约30%的病人临床上只有浅表淋巴结肿大,而无其他全身症状。 B.全身症状 病人常有病毒性疾病的全身不适,肌肉疼痛等症状。约50%的病人有疲倦无力及周期性低热,常持续数月。夜间盗汗,1月内多于5次。约1/3的病人体重减轻10%以上,这种体重减轻不能单纯用发热解释,补充足够的热量也不能控制这种体重减轻。有的病人头痛、抑郁或焦虑,有的出现感觉神经末梢病变,可能与病毒侵犯神经系统有关,有的可出现反应性精神紊乱。3/4的病人可出现脾肿大。 C、各种感染 此期除了上述的浅表淋巴结肿大和全身症状外,患者经常出现各种特殊性或复发性的非致命性感染。反复感染会加速病情的发展,使疾病进入典型的艾滋病期。约有半数病人有比较严重的脚癣,通常是单侧的,对局部治疗缺乏有效的反应,病人的腋窝和腹股沟部位常发生葡萄球菌感染大疱性脓庖疮,病人的肛周、生殖器、负重部位和口腔黏膜常发生尖锐湿疣和寻常疣病毒感染。口唇单纯疱疹和胸部带状疱疹的发生率也较正常人群明显增加。口腔白色念珠菌也相当常见,主要表现为口腔黏膜糜烂、充血、有奶酪状覆盖物。 其他常见的感染有非链球菌性咽炎,急性和慢性鼻窦炎和肠道寄生虫感染。许多病人排便次数增多,变稀、带有黏液。可能与直肠炎及多种病原微生物对肠道的侵袭有关。此外,口腔可出现毛状白斑,毛状白斑的存在是早期诊断艾滋病的重要线索。
4、典型的艾滋病期 有的学者称其为致死性艾滋病,是艾滋病病毒感染的最终阶段。此期具有三个基本特点: 严重的细胞免疫缺陷 发生各种致命性机会性感染。 发生各种恶性肿瘤。 艾滋病的终期,免疫功能全面崩溃,病人出现各种严重的综合病症,直至死亡。
确诊艾滋病不能光靠临床表现,最重要的根据是检查者的血液检测是否为阳性结果,所以怀疑自身感染HIV后应当及时到当地的卫生检疫部门做检查,千万不要自己乱下诊断。
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㈥ aids检测技术有哪些并简述其临床意义
摘要 第一、应用艾滋病第三代试剂检测,也是目前最常用的检测方法,是艾滋病特异性抗体检测,最快可以在感染后三周检测出来,绝大部分人在感染后3-12周可以检测出抗体,所以抗体检测的排除时间是高危后12周,约三个月左右;
㈦ 艾滋病哪些方法能查出
我是这方面的专业人员,按照《全国艾滋病检测技术规范》(2004)
5.1.2 筛查方法
5.1.2.1 常用的筛查方法是酶联免疫试验(ELISA)
目前国内外主要使用第三代(双抗原夹心法)试剂,少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主,国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定(第四代ELISA试剂)用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂,可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比,检出时间提前了4~9.1d。其优点在于能同时检测抗原抗体,降低血源筛查的残余危险度。
5.1.2.2 快速检测(RT)及其它检测
随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展,及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测(VCT)的迫切需求,简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种:
(1)明胶颗粒凝集试验(PA):PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法,是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体,与待检样品作用,混匀后保温(一般为室温)。当待检样品含有HIV抗体时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA试剂有两种,HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂(AFD HIV-1/2 PA),已经我国食品药品监督管理局(SFDA)注册批准;HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂(SERODIA-HIV-1/2)可初步区分HIV-1型和HIV-2型,目前我国尚未引进。
(2)斑点EIA或称斑点ELISA(dot-EIA):以硝酸纤维膜为载体,将HIV抗原滴在膜上成点状,即为固相抗原。加血清样品作用,以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内,使用抗原量少。
(3)斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验:与斑点EIA相似,也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体,而代之以红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白,用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定,可室温长期保存。试验时不需任何设备,迅速、简便、特异性较好,敏感性约相当于中度敏感的ELISA,适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在1030min内判读结果。
(4)艾滋病唾液检测卡:在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原,可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体,原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的HIV IgA与IgG抗体,敏感性特异性与ELISA相近,可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法(WB)试剂已经美国FDA批准。
(5)其它快速筛查试验方法:家庭HIV检测(Home Access System)等。
5.1.2.3 尿液HIV抗体检测
1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂,我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。主要适用于静脉注射毒品(IDUs)人群和其它高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。
5.1.3 筛查试验
根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测(复检)。
5.1.3.1 初筛试验:以第三代ELISA(双抗原夹心法)为例。
(1)实验准备:试验开始前将试剂和样品放置在室温(1823℃), 按实验室SOP做好试剂准备。
磷酸盐缓冲液:若液体内有结晶,应放置在37℃直至溶解,用蒸馏水1:25稀释浓缩液,4℃保存2周。
TMB底物液:使用前配制,TMB液和过氧化脲液等量混匀。
1M硫酸终止液:85 ml蒸馏水中加入5 ml浓硫酸。
备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后,按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。
(2)实验操作
①装好所需使用数目的孔条,每孔均加入100μl样品稀释液。设3个阴性对照孔,1个HIV-1阳性对照孔,若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。
②每孔加入50μl待检样品及对照(对照要后加),未用孔用样品稀释液加满以溶解结合物球,以免堵塞洗板机孔。可震摇15S,37±2℃孵育60±5min。
③置洗板机上洗涤6遍(用洗液将反应孔完全加满,静置3060S,共洗涤6遍,洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干)。
④每孔加入100μl底物液,勿搅动,室温避光孵育30±2min。
⑤每孔加入100μl 1M硫酸终止反应,充分混匀。
⑥在2h内置于酶标仪读数,单波长450nm,或双波长450/630nm测OD值。
(3)实验结果
①阴性对照(NC),HIV-1阳性对照(PC1),HIV-2阳性对照(PC2)
NC 必须<0.25方可用,排除NC≥0.25的值,计算NC平均值。
NC界限范围:0.6倍NC均值<NC<1.4倍NC均值。
②符合以下条件的实验成立:
两个以上的NC可用。
PC1-NC均值 ≥ 0.4,PC2-NC均值 ≥ 0.4
③Cut off值 = 阴性对照均值 + 0.100
小于Cut off为阴性,大于或等于Cut off为阳性
(4)报告:对呈阴性反应的样品,可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告;对呈阳性反应的样品,须进行复检,不能出阳性报告。
5.1.3.2 复检试验:对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病确认实验室进行确认
5.1.4 初筛试验结果的报告
对HIV抗体筛查试验,呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告(可用附表1);对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告,可出具“HIV抗体待复查”报告(附表1)。
5.1.5 初筛试验呈阳性反应样品的转送
如需送上级实验室进行复测或确认,需要填写“HIV抗体复测送检单”(附表2),经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室,再转送艾滋病确认实验室,或在本实验室复检后直接送确认实验室。
5.1.6 对筛查阴性和阳性者,均需做好检测后咨询。
5.2 HIV抗体确认试验
5.2.1 确认试验的试剂
必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。
5.2.2 确认试验方法
包括免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。国内常用的确认试验方法是WB。
5.2.3 确认检测流程
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测,如果呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如果呈阳性反应,则报告HIV-1抗体阳性;如果不满足阳性标准,则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带,需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验,呈阴性反应,报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析
5.2.5 确认试验结果的判定
下面是我国使用WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定,遇疑难情况应报上级实验室解决。
5.2.5.1 HIV-1抗体阳性(+)
至少有2条env带(gp41和gp160/gp120)出现,或至少1条env带和p24带同时出现。
5.2.5.2 HIV-2抗体血清学阳性(+)
同时符合以下2条标准可判为HIV-2抗体血清学阳性:
(1)符合WHO阳性判定标准,即出现至少2条env带(gp36和gp140/ gp105)。
(2)符合试剂盒提供的阳性判定标准。
5.2.5.3 HIV抗体阴性(-)
无HIV抗体特异带出现。
5.2.5.4 HIV抗体不确定(±)
出现HIV抗体特异带,但不足以判定阳性。
注:①HIV-1抗体特异带包括:env带:gp160/gp120、gp41;gag带:p55、p24、p17(或p18);pol带:p66(或p65)、p51、p31。②HIV-2抗体特异条带包括:env带:gp140/gp105、gp36;gag带:p56、p26、p16;pol带:p68、p53、p34。(由于使用的毒株不同,HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36)。
5.2.5 HIV抗体确认试验结果报告
确认试验由确认实验室根据检测结果出具“HIV抗体确认检测报告单”(附表3),报告HIV抗体阳性(+)、HIV抗体阴性(-)及HIV抗体不确定(±)。
5.2.5.1 符合HIV-1抗体阳性判断标准,报告“HIV-1抗体阳性(+)”,并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
5.2.5.2 符合HIV抗体阴性判断标准,报告“HIV抗体阴性(-)”。如果近期有高危行为,如性乱、注射毒品等,或有急性流感样症状等情况,为排除因“窗口期”而出现的假阴性结果,建议高危行为后3个月时再做抗体检测。也可进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测,作为辅助诊断。
5.2.5.3 符合HIV抗体不确定判断标准,报告“HIV抗体不确定(±)”,在备注中应注明“3个月后复检”,同时进行以下处理:
(1) 随访复检:每3个月随访复检1次,连续2次,共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月,则在3个月后随访1次即可。将前后2份样品同时检测,仍呈不确定或阴性则报告HIV抗体阴性,如果在随访期间发生带型进展,符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性。
(2) 必要时可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸测定,但检测结果只能作为辅助诊断依据,确认报告要依据血清学随访结果。
5.2.6 发出确认报告的同时要做好检测后咨询。
5.2.7 HIV抗体确认报告由1名具有高级卫生技术职称的人员复核签字,按原送检程序反馈。如确认对象户口不属于本辖区,确认报告应同时抄送HIV感染者户口所在地的省艾滋病确认中心实验室。其它系统确认的地方人员(包括本地和外地),也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。
5.2.8 省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品,送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确认结果时,由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指导专家组予以仲裁。
㈧ 通过哪六点,能够判断自己是不是得了艾滋病
现在的社会正在不断的进步和发展,随着科技的发展从前许多不能被看好的病已经被医生们成功的攻克了,但是现在依然还是有着我们无能为力的病症存在,就像是很多人都知道的癌症,和艾滋病。
艾滋病的起源艾滋病毒检测是判断你是否感染的最权威的方法。一般来说,要做两次。有些人第一次查艾滋就觉得天塌下来了,这是不正确的。有时候医学数据会蒙蔽我们的眼睛,等第二次检查的时候发现自己没有被感染,这样的人不在少数。检查一定要保持冷静,直到最后不要放弃希望。
㈨ 艾滋病检测项目包括哪些
艾滋病检测项目包括哪些
AIDS的实验室检测主要包括HIV抗体、HIV核酸、CD4+T淋巴细胞、HIV基因型耐药检测等。HIV1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准;HIV核酸定量(病毒载量)检测和CD4+T淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV基因型耐药检测可为高效抗反转录病毒治疗(HAART)方案的选择和更换提供科学指导。下面是我为大家带来的关于艾滋病检测项目的`知识,欢迎阅读。
01抗体检测
主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。ELISA用去污剂裂解HⅣ或感染细胞液提取物作抗原,IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测,如果发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性,可做Westernblot(WB,蛋白印迹法)进一步确证。
WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HⅣ蛋白进行分离,再经传移电泳将不同蛋白条带转移于硝酸纤维膜上,加入病人血清孵育后,用抗人球蛋白酶标抗体染色,就能测出针对不同结构蛋白抗体,如抗gp120、gp41、P24抗体,特异性较高。
快速检测法,也称为金标法,也是抗体检测的一种方法,根据免疫层析法的原理,用于HⅣ抗体检测的定性检测。
02抗原检测
用ELISA检测P24抗原,在HⅣ感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原,来提高敏感性。
03核酸检测
用PCR法(聚合酶链式反应法)检测HⅣ基因,具有快速、高效、敏感和特异等优点,目前该法已被应用于HⅣ感染早期诊断及艾滋病的研究中。
04病毒分离
常用方法为共培养法,即用正常人外周血液分离单个核细胞,加PHA(聚羟基脂肪酸脂)刺激并培养后,加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中。
05检测试纸检测
艾滋病检测试纸条是使用胶体金免疫层析科技研发的新一代检测试剂。它可检测血清或血浆标本中的HⅣ-1/2特有性抗体。所有操作时间约是15分钟,操作简便、迅速、准确、自带质控对照。适合各大医院,疾控中心筛查。
其中第五种方法还适合个人检测
艾滋病检测试纸
1、适用者:临床检验、无偿献血现场筛查等。
2、目的:快速方便准确的确诊是否感染HIV。
3、操作时间:约15分钟。
4、优点:简便、迅速、准确、自带质控对照。
试纸分类
常见有两种,一种是血检试纸,一种是唾液试纸。
血检试纸一般有雅培、艾康、金豪万泰等,其中雅培是较好的艾滋病试纸。唾液检测试纸有一种美国艾威尔的的唾液检测试纸。
正规艾滋病检测试纸生产批号均可以国家食品药物监督管理局查询。
作用效果
因为高危人群艾滋病检测注重隐私保护,所以艾滋病检测试纸自测成了高危人群比较接受的检测方式。而值得提醒的是,虽然网购试纸可以完全匿名购买,保护自己的隐私,但没有医护人员的专业操作和对个人情况的分析和疾病宣导,就算自检结果出来后,自己还是会对试纸的准确性产生怀疑。那倒不如到疾控中心检测,除了提供免费检测服务外,还提供专业咨询服务。
目前艾滋病检测试纸也是一种先进的艾滋病抗体检测技术,准确情况下,5~15分钟即可出现检测结果,单次艾滋病检测结果的准确率高达95%以上。
;㈩ 怀疑自己得了艾滋病怎么确诊
首先可以先做常规检查,艾滋病患者往往贫血,白细胞数目减少,尿液检查有尿蛋白。但不能因为这三项都有就确诊艾滋病,应该做更一步的检查。
如果有问题再做HIV检测是判断自己是否染病的最权威方法。一般来说要做两次,有人第一次检查出来是HIV就觉得天都塌下来了,这是不正确的。有时候医学数据会蒙蔽我们的双眼,等到第二次检查就发现原来自己未曾感染,这样的人不在少数。检查一定要保持淡定,不到最后不放弃希望。