细胞计数器使用方法

A. 如何对活细胞进行计数

去哪里找最出色的生命科学学术交流论坛？>>> 用台盼蓝拒染法计数活细胞: 1. 彻底混合细胞悬液，取100礚样本至一支试管中. 2. 台盼蓝染色有两种方法。一是首先用细胞培养液稀释细胞样本，然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）。或者直接用台盼蓝溶液稀释样本。 例如：1/40稀释样本 加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释)，混合，然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。 3. 涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。 4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。 5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室。 6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。 7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室。不要过满或不足。 8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞。分别死细胞和活细胞。死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏，细胞吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。 9. 活细胞计数按以下方法计算： 每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL 10.活细胞百分比计算方法如下：

B. 血球计数板的使用方法

使用方法如下：

1.视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。

2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5．计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的。

菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。

6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。

7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

(2)细胞计数器使用方法扩展阅读:

计数公式

红细胞数(RBCs)/L=N/5×25×10×106×200

N为：五个中方格的RBC总数

N/5为：5个中方格（粉红色区域）的平均RBC数量（然后推及至中央大方格中每一个中方格RBC的数量）

N/5×25为：中央大方格RBC总数（即：0.1mm3（ul）的RBC总数）

N/5×25×10为：1mm3（ul）RBC总数

N/5×25×10×106为：1L的RBC总数

200为：血液的稀释倍数

公式简化后：红细胞数/L=N×5×107×稀释倍数

公式前面部分都是换算成每微升血多少该计数细胞；最后都是由微升换算到升，乘以10的6次方

(1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数

(2)以同样方法,分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度.

(3)如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数.若更换物镜,目镜的放大倍数时,必须再进行校正标定.

参考资料:血球计数板-网络

C. 细胞计数仪如何操作

瑞沃德细胞计数仪，只需要将10μL细胞样品加入一次性计数板，插入计数仪后仪器会自动对焦，直接点击计数即出结果。

D. 细胞计数器使用前清洗要注意些什么

细胞分类计数器是一种常用的细胞计数工具，医学上常用来计数红细胞、白细胞等。适用于高校、研究所，医用中心，临床输科、医院、制品生产单位，医学实验室等领域。
细胞分类计数器使用注意事项：
1、 该机为交直流两用供电方式，将外接稳压器输出插头插到计数器后插孔，电池供电断开，有外接稳压器供电；拔掉外接稳压器输出插头，则有电池供电。外接稳压器器输出插头请勿经常随意拔出，以免接触不良，常期不用电池供电，请将电池取出。
2、 禁止挤压、扭曲、碰撞和私自拆卸，如出现故障，请致电本公司，属使用不当而非产品质量问题造成器件损坏，维修时酌情收费。
3、使用时，应将仪器水平放置，远离强电磁场的干扰，电源电压应在规定的范围内。
4、按键时，手指要按在按键的中部，用力要适当，过重容易损坏按键。
5、仪器不使用时，应该拔下电源插头，用东西遮盖防尘并保持干燥。

E. 血细胞计数器做什么用的

是血细胞计数板吗？一般可以用来计算单位体积内细菌的数量或血细胞的数量。可以说一般细胞都能计数。

F. 细胞计数器和菌落计数器的区别是一种产品吗

传统的菌落计数器使用时，是将计数笔连接到主机上，打开电源开关，

将培养皿放在白光板上，打开白光灯，用计数笔触动计数，LED显示屏显示所计数量；计数完成可用计数笔在稿纸上暂记总数，重新开关电源，LED显示屏自动归零，二次计数与稿纸上一次总数比较，数量相同可得较准确的结果。同时，按照细菌计数检验规程规定，一只培养皿中细菌生长数超过300个时，应将检验样品稀释重作，以保证计数的准确性，所以，一般的菌落计数器仪器显示计为三位数。

多功能血细胞计数器是由数字处理芯片、集成电路，以及显示屏、按键组成，与各种显微镜配合使用，由

微电脑进行自动分类计数的数字化专用产品，能对骨多功能血细胞计数器髓细胞、外周血细胞、小巨核细胞进行全面的分类计数并自动计算出各项指标，能对细胞化学染色后的积分进行计算，并兼有常用的四则运算。

G. 菌落总数培养皿怎么数,片上面又有好多小点要数吗

固体培养基表面及内部的可见菌落（包括小点）均要计数，计数时可用笔在培养皿背面划线，分若干块计数
细菌菌落总数（CFU）的测定
一）平板菌落数的选择
1、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的3个平板（或2个）的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即为1ml水样中的细菌总数。
2、计数时应选择菌落数在30~300/皿之间的稀释倍数进行计数，若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半时，而另—半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。
(二)
稀释度的选择
l、首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。
2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小的菌落数。
3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
4、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6、菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示，在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水样的稀释倍数。

H. 活细胞的显微计数方法及步骤

将细胞样品与台盼蓝染料混合。活细胞排斥染料，而死细胞被染成深蓝色。将细胞铺在血球计数器的玻板上，显微镜下进行人工计数。

一、材料

血（球）计数计（改进的Neubauer 型），每次用后洗净并晾干。（也可以用其他计数器，只是格子不同。）

血（球）计数计的盖玻片（可重复使用），每次用后洗净并晾干。

含0.4% (W/V) 台盼蓝的PBS 。

计数器

悬浮好的细胞（既可以是悬浮生长的细胞，也可以是胰蛋白酶处理的贴壁生长的细胞），确认贴壁生长的细胞已经充分游离成单细胞（见图1) ，涡旋培养瓶后取代表性样本。

图1 a 单层细胞呈扁平状，对比度较低。

b 当细胞刚刚从基底上剥落时它们仍旧结合在一起。

c 很快当所有的细胞都剥落下来后，大多数细胞都呈单个游离

图2 使用血球计数计（改进型）进行细胞计数，细胞计数计中央网格的两侧格室都要铺满细胞

a 用10 X 的物镜观察（总放大倍数为100), 1 mm2 的格子可以完全出现在视野内。每个1 mm2 的格子被分成了25 个小格子。

b. 25 个小格子的每个又被分成了20 个更小的方格，以计数小的或稀少的细胞数。

c. 用1 mm2的小格子的细胞数计算到每毫升细胞数。

移液器、移液头。

微型离心管。

直立或倒罚的相差显微镜，10倍物镜。

待稀释无菌培养基。

二、步骤

将盖玻片平稳地盖在血球计数计的中间。

取500 μI 细胞培养液到微型离心管中，如果样品过少就只取100 μI

取50 μI 细胞和50 μI 台盼蓝混匀。

用移液管取50 μI 混合液，轻轻地在盖玻片的两边滴上20 μI, 让液体通过毛细管现象吸到载玻片上面（如果有两个样品，可以放置两个盖玻片，并小心地分别滴到盖玻片下，即使只有一个样品也要把计数器的两个计数室都填满） 。

立刻把计数计放到显微镜的工作台上，在低倍镜下固定一个格子计数，只需计数任何一个1 mm2 格子内的细胞数量， 就可以换到高倍镜下确保视野中有一个完整的方格。低倍镜下也可以计数，但不容易区分活的和死的细胞。如果使用的是倒置显微镜，要降低物镜以得到足够的光线。

大致确定格子中的细胞（数2 5 个小格即可），以决定细胞是要稀释还是浓缩。理想的细胞数量是30~300 个／ mm, 如果过多，就以1:5 或1: 10 稀释，（例如10 倍稀释，将步骤2 中50 μI 细胞悬液与450 μI培养基或缓冲液混合，按步骤3 取50 μI 细胞液与50 μI 台盼蓝混合） 。

计算1 mm2 格子内的活细胞数量，死细胞会全部被染成蓝色，而活细胞不被染色（可能会有蓝边） 。最好是把两者都数出来，可以计算出活细胞的比例。

计数3 个不同的1 mm2 的格子，得到平均值。

计算出1 ml 中的细胞数目。

平均值X 10 000 X 稀释倍数＝ 原始样品中1 ml 的细胞数。

例如

三个格子的细胞数分别为113 、99 和118, 平均为11 0 。

110 X 10 000 = 1.1 X 106

由于细胞和台盼蓝是等体积混合，稀释倍数为2,

2 X 1. 1 X 106 = 2. 2 X 106

所以原液中细胞数目为2.2 X 106 个／ ml 。

计算出原细胞悬液中活细胞的比例

计算方法为： （活细胞总数／细胞总数） X100

三、温馨提示

1.没有将悬浮很好的或混合很好的细胞加到计数室内是血球计数氐不能正确计数的主要原因。

2. 如果细胞数小于30, 可以把取出的细胞离心并用小的体积重新悬浮，但是通常不用这样做。数三个格子求平均值即可。

3. 为了避免同一个细胞数两次，只计数每个小格子上部和左边的细胞而不计数右边和下边的细胞。每次计数的时候都要遵循同一规则，这样才能保证每次计数的都一样。

4.如果每次数的细胞数量差别在20% 以上，说明细胞没有完全分散，或有成团的现象。

I. 如何对活细胞进行计数

用台盼蓝拒染法计数活细胞:
1. 彻底混合细胞悬液,取100礚样本至一支试管中.
2. 台盼蓝染色有两种方法.一是首先用细胞培养液稀释细胞样本,然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）.或者直接用台盼蓝溶液稀释样本.
例如：1/40稀释样本
加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释),混合,然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).
3. 涡悬振荡,混合稀释的细胞样本.
4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片,然后用脱脂绵擦干.
5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室.
6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本.
7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室.不要过满或不足.
8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞.分别死细胞和活细胞.死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏,细胞吸收台盼蓝),活细胞透明有折光（未染色）.
9. 活细胞计数按以下方法计算：
每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL