结核科常用标本采集方法

Ⅰ 叙述结核杆菌的检验程序

结核杆菌与麻风杆菌是分枝杆菌属中的主要病原菌。
结核杆菌菌体细长略带弯曲，有分枝生长趋势。菌体含脂量高，与其抗酸特性、抵抗力特性、致病性与免疫性等都有密切关系。该菌营养要求高，生长缓慢，形成“菜花状”菌落。

一、结核杆菌检验程序
结核病人病灶中查到结核杆菌，是病原学诊断的重要依据，根据感染部位不同，可采集病人的痰、尿、粪便、脑脊液、胸腹水、胃液等，按以下程序进行检验。

二、结核杆菌培养特性
1. 液体培养基（苏通氏培养基、小川培养基、血清酸性培养基等）结核杆菌生长表现：标本材料经前处理（即酸碱处理，可液化标本，也可杀死杂菌，还可浓缩集菌）后接种液体培养基，35℃培养1-2周，由于表面生物，可在培养基表面表成污灰、干燥、有皱褶的菌膜。
2. 固体培养基（改良罗氏培养基、丙酮酸钠培养基等）结核杆菌生长表现：标本材料经前处理后，接种固体培养基，37℃培养2-4周，在培养基表面可形成乳白或米黄色、不透明、粗糙颗粒状或节状堆聚的菌落，呈现“菜花状”。
3. 结核杆菌快速培养检测方法：无菌手续将前处理后的材料涂片，置液体培养基中，35℃恒温箱CO2培养箱内培养，3-5日后，每隔日取出一玻片，染色镜检，可快速获得结果。

三、齐~尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法
【原理】
结核杆菌对苯胺染料不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，再经美兰复染，结核杆菌及其他分枝杆菌仍呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。
【材料】
1. 结核病人痰液：采取清晨第一口粘痰，或浓缩集落菌法处理过的痰标本。
2. 抗酸染色液
3. 载物玻片、玻片夹、酒精灯、腊笔等。
【方法】
1. 无菌手续采取痰液涂片，自然干燥，火焰固定。
2. 用腊笔将涂面局部隔开，滴加石炭酸复红染液，酒精灯上加热至出现蒸气。切勿沸腾，亦不可使染液干涸。如有干涸的趋势，应及时补加染液。持续染色5-8分钟，待冷后流水漂去多余的染液。
3. 用3%盐酸酒精清脱色，脱至涂面无色为止，约1-3分钟，自来水冲洗。
4. 滴加吕氏美兰染液复杂30秒~1分钟，水洗。自然干燥或吸干后油镜检查。
【结果】
1. 结核杆菌呈现细长，略有弯曲的红色菌体，有的可表现出分枝特征，有的菌体表现有多数浓染颗粒。结核杆菌大多分散排列，亦可以见到有纵行条索状排列。
2. 涂片染色能查到结核杆菌者，一般需要每毫升痰液内含菌量至少应有500个以上，甚至需达到5万以上。故材料多进行浓缩集菌处理，以提高检出阳性率，也造成在染色标本片观察中，不一定每个视野都能看到结核杆菌。
3. 结核杆菌易发生变异，在陈旧培养基或临床治疗后标本材料中，结核杆菌往往菌体断裂，或形成非抗酸性革兰氏阳性的短杆状、球状颗粒，亦称Much颗粒。
4. 标本已经高压灭菌处理，不影响染色结果，也保证操作者的安全。

四、荧光染色法
此系用金胺荧光素染扩酸性细菌的方法，简便易行，但不具特异性。金胺染色法有多种、现列于后表，可选择使用，应用荧光显微镜检查结果。

五、结核杆菌毒力试验——动物试验法

【材料】
1. 动物：体重200~250克豚鼠2只
2. 结核杆菌培养物或结核病人检验材料（痰、尿、粪、腹水等材料经浓缩集菌）
3. 注射器及消毒用材料等。
【方法】
1. 选取结核菌素试验为阴性的豚鼠两只。
2. 吸取结核杆菌悬液或病人检材，注入豚鼠腹股沟皮下0.1ml
3. 注射后每周定期检查一次，观察豚鼠腹股沟淋巴结是否肿大，局部变硬，化脓及体重减轻、体温升高等症状。
4. 给豚鼠作结核菌素试验，是否出现阳性结果。
5. 6周后，将豚鼠进行解剖，观察淋巴结是否肿大，有无干酪性病变，肝、脾、肺等是否肿大，表面有无灰白色结节病灶，取可疑病灶进行涂片染色镜检和分离培养。若为阳性结果，可报告“动物接种后××天查到有结核菌感染”。如无症状及病变者，可报告为阴性。

六、结核杆菌浓缩集菌法（以处理痰标本为例）
【材料】
结核病人24小时痰液，细口瓶，0.02%酚红液、汽油，NaOH，无菌生理盐水等。
【方法】
(一)漂浮法：
1. 取24小时痰液15毫升，装入细口瓶内，加入2倍量0.5%NaOH摇匀，高压灭菌或煮沸20—30分钟杀菌。
2. 待冷后加入汽油2毫升（二甲苯也可以），用力振荡20—30分钟，用生理盐水加至液面与瓶口齐，静置半小时。
3. 取瓶口表面油状物涂于载物玻片上，微微加热，干后再加，如此重复5—6次，至厚度适宜，烘干待冷，抗酸染色，油镜头检查。

(二)沉淀法：
1. 取痰液1份或2倍量4%NaOH，高压无菌或煮沸20—30分钟后，加入0.02%酚红指示剂0.1毫升，剧烈振荡混匀，亦可置37℃水浴消化30分钟。
2. 矫正PH为7.0，3000转/分离心30分钟，弃去上清液。
3. 取沉淀物涂片染色镜检。若进行分离培养和动物接种，可免去高压灭菌或煮沸的程序。

附录：抗酸染液的配制
1. 石炭酸复红液：称取碱性复红4克，溶于95%酒精100毫升中成饱和液。再取饱和液10毫升与5%石炭酸溶液90毫升混匀即成。
2. 3%盐酸酒精：取浓盐酸3毫升，95%酒 97毫升混合。
3. 吕弗勒氏碱性美兰液：称取美兰2克，溶于95%酒精100毫升中，配成饱和液，取饱和液30毫升，再加入蒸馏水100毫升及10%氢氧化钾水溶液0.1毫升即成。

Ⅱ 如何采集痰标本其注意事项是什么

痰是病理产物，主要是肺、支气管和气管内的炎性分泌物。咳嗽的病人采集痰标本，主要目的是为了检查，进行病原菌的鉴定，并有助于诊断和治疗。
采集痰标本的方法是：①
一般检查或培养标本采集法。具体做法是：留集清晨第一口痰，留痰前，嘱病人先用贝朵尔氏液漱漱口，再以清水漱口，清除口腔内杂菌。然后，深吸气用力咳嗽，咳出气道深部痰液。将痰收集到无菌培养皿或小瓶内送检，如检查癌细胞，应立即送检。②24小时痰标本采集法，为浓缩找结核菌或寄生虫卵，备清洁带盖的留痰容器，贴以标签，注明姓名、留痰日期、起止时间，嘱病人将24小时的痰，全部吐入容器内，并勿将漱口水、唾液、呕吐物、鼻咽分泌物等混入痰内，以免影响检验结果。以上两种痰标本采集法，适用于年长儿或成年人，小儿咳嗽往往不会吐痰，而将痰液咽下，如需要做痰液的检查，可抽取胃液来进行检查，具体做法可参考肺结核篇章中在胃液中寻找结核菌一文。
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Ⅲ 微生物检验标本的正确采集及注意事项

微生物检验标本的正确采集及注意事项

正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。下面是我为大家带来的微生物检验标本的正确采集及注意事项的知识，欢迎阅读。

一、 血液标本的采集

1、 采集方法

（1）75%酒精清洁局部皮肤。

（2）待皮肤干后，再用2%—2。5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。

（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5—10ml，婴幼儿1—5ml。

（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。

2、注意事项

（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38。5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。

（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。

（3）培养基与血液之比以10：1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质;有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20：1或大于这个比例。

（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。

（5）每例至少采血两次，间隔0。5—1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。

（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3—4次）和增加采血量（可增加10ml）。

（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。

（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。

二、骨髓的采集

1、采集方法

在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。

2、注意事项

（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的.诊断较血培养优越。

（2）用于怀疑细菌性骨髓炎病人。

三、静脉导管标本的采集

1、采集方法

（1）常规导管部位皮肤消毒。

（2）无菌方法从病人体内拔出静脉导管，剪下导管尖端5cm，放入无菌瓶中。

（3）立即（15min内）送检，避免标本干燥。

2、注意事项

（1）剪下的导管立即接种血平皿，可提高阳性率。

（2）肉汤反复冲洗导管腔内，冲洗液做定量培养。

（3）有人将剪下的导管置肉汤增菌液或培养瓶中，此法不能区分导管感染菌与少量定植菌。

（4）卫生部在《医学感染诊断标准》（试行）（2001年1月3日施行）中规定：导管管尖培养其接种方法应取导管尖端5cm，在血平板表面往返滚动一次。细菌≥15cfu/平板，即为阳性。

四、呼吸道

1、痰标本

（1）采集方法

①清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深部的脓痰，置于清洁干燥容器中送检。

②痰量极少者可用45℃ 3%—10%的氯化钠溶液约25ml雾化。对于咯痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。

③咳嗽无力或昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸引痰液送检。

④气管切开者可以深入透气孔中取痰。

⑤可用支气管镜直接在病灶部位采集高浓度的病原菌。

⑥用无菌导管经鼻腔插入气管镜内，缓慢注入无菌蒸馏水5ml，取出导管。留取患者在3h内咳出的痰液，放入无菌容器中送检。

⑦胃内采痰法。无自觉症状的结核病人。有时可把痰误咽入胃内，因而可采用胃内溶物做结核菌培养，其阳性结果比咯痰高10%左右，该方法于晨起空腹时，把灭菌的胃管，从鼻腔送入胃内，用20ml注射器抽取胃液。

（2）注意事项

①痰标本的采集以晨痰为准，此时患者痰量较多且含菌量也多。

②标本采集后立即送检，若不能及时送检者，可暂存2—8℃冰箱。若晚1—2h接种，会失去苛氧菌，并使得革兰阴性菌过分生长。

③可接受的标本：痰;支气管灌洗液，支气管刷，支气管活检;肺吸出物和肺活检。不能接受的标本：唾液;24h留的痰（结核杆菌培养除外）;拭子。

④ 痰标本的质量评价：（用显微镜筛选）在低倍镜下，检查鳞状上皮细胞，至少10个视野，集中在有白细胞处，合格标本为白细胞与鳞状上皮细胞比例大于2：1。

2、鼻拭子

（1）用湿的拭子（生理盐水）;

（2）需插两个鼻孔;

（3）深入3。3cm左右，转动4—5次;

（4）以上用于诊断金黄色葡萄球菌暴发时的鼻带菌者。

3、咽拭子、口腔拭子

（1）采集方法（到细菌室取专用拭子）

①患者清水漱口后，由检查者将其舌外拉，用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复擦拭数次;

②化脓性扁桃体炎、口腔念珠菌病时，直接用棉拭子在病灶部位擦拭;

③插入运送培养基中立即送检，防止干燥。

（2）注意事项

①棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液;

②采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶局部。

五、胃肠道

1、粪便

（1）采集方法

选取脓血、黏液粪便2—3g，液体粪便取絮状物1—2ml。盛于灭菌瓶中或蜡纸盒中及时送检。

（2）注意事项

①标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳性检出率;

②切忌粪尿混合;

③若要分离阿米巴，标本要立即送检并注意保温;

④运送培养基可提高阳性率;

⑤分离难辨梭菌时需选不成形或水样便;

⑥霍乱弧菌、大肠杆菌Ο157感染的腹泻便则为水样便或血性便;

⑦标本在病理早期或治疗前采集;

⑧一般认为用抗菌药三天后，标本培养病原菌阴性。

2、肛拭子

在无法获得粪便的情况下，可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛拭子插入肛门4—5cm（幼儿2—3cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。

六、泌尿道

根据卫生部《医学感染诊断标准》（试行）通知，泌尿系统临床诊断为：患者出现尿频、尿急、尿痛等尿路刺激症状，或有下腹触痛、肾区叩痛、伴或不伴发热，并具有下列情况之一：

（1）尿检白细胞男性≥5个/高倍视野，女性≥10个/高倍视野，插导尿管患者应结合尿培养;

（2）临床已诊断为泌尿道感染，或抗菌治疗有效而认定的泌尿道感染。

1、中段尿

（1）采集方法

①女性 采样前用肥皂水或0。1%的高锰酸钾溶液冲洗外阴，用手指阴x分开排尿，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10ml于灭菌容器内。

②男性 用肥皂水清洗尿道口，或0。1%的碘伏溶液消毒尿道口，灭菌纱布擦干，上翻包皮，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10ml于灭菌容器内。

（2）注意事项

①导尿虽然可以减少污染，但是多次重复导尿可以造成逆行性感染，因此近年来大多采用中段尿。

②女性病人最好采取膀胱截石位由护士采取标本，减少污染。

③采集标本以晨起第一次尿液为佳。

④采集标本后，若不能在1h内送检，暂放4℃冰箱，但不能超过8h。若尿液标本在室温下放置超过2h，即使接种培养结果细菌数≥104 cfu/ml获103cfu/ml，也不能作为诊断依据，应重新留取标本送检。

⑤疑为尿道炎时可将最初3—4ml尿液收集在灭菌容器内。该尿中即使有少数细菌，如反复检查为同一细菌，也应考虑为病原菌。

⑥儿童在多数情况下，仅冲洗外阴是不够的，故采集标本较为困难。如果尿内细菌明显增多，可以高度怀疑为尿路感染，无菌则可否定。

⑦若细菌培养结果为两种或两种以上细菌，需考虑污染可能，建议重新留取标本送检。

⑧尿液中不得加入防腐剂，消毒剂否则影响阳性检出率。

2、膀胱穿刺采集法

避免污染是很困难的，培养结果与病情不符时，或尿厌氧菌培养，或婴幼儿中段尿采集困难时，可以用耻骨上穿刺膀胱内采尿。

3、留置导尿者采集法

拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液10ml送检。不可从集尿袋下端留取标本。

七、脑脊液

1、采集方法

由临床医师以无菌方法收集脑脊液3—5ml（细菌1ml，真菌2ml抗酸杆菌2ml，病毒1ml）盛于无菌试管或小瓶中立即送检。

2、注意事项

（1）采集标本后立即送检，因脑膜炎奈瑟菌离体后迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌也易死亡;

（2）疑为上述细菌感染时，应注意保温，不可置冰箱或低温保存。

八、胆汁

1、十二指肠引流法

在无菌操作下，将十二指肠导管吞咽至十二指肠乳头部（距齿65—70cm）时，收集A液（来自总胆管，为橙黄或金黄色），随之注入25%硫酸镁溶液40ml，经1—2min后再采取B液（来自胆囊，为棕黄绿色），随后收取C液（来自肝胆管，为柠檬色），一般认为B液做细菌培养意义较大。

2、胆囊穿刺法

胆囊造影术时，可同时采取胆汁。

3手术采取法

由总胆管、胆囊直接穿刺采取胆汁。

以上采集之标本应立即送检，否则置于4℃冰箱内，采集时需小心，避免被唾液、十二指肠液细菌污染。

九、穿刺液标本

穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液。

1、采集方法

由临床医师行穿刺术抽取。胸腹水可收集5—10ml，心包液、关节液收集2—5ml，置于无菌含抗凝剂的试管或小瓶中，充分混匀后，立即送检。抗凝剂10%EDTA二钠盐，标本与抗凝剂之比10：1。

2、注意事项

⑴标本采集应在患者用药之前或停止用药1—2天后进行;

⑵不能立即送检可置4℃冰箱保存;

⑶疑为淋病性关节炎患者的关节液，采集后立即送检，或床旁培养为佳;

⑷不能用棉拭子浸蘸标本送检。

十、脓汁及病灶分泌物

1、伤口

⑴表面伤口拭子采集方法及注意事项

① 仅限于皮肤与皮下组织，包括手术切口、褥疮溃疡、新生儿脐炎、婴儿脓疮病。

②用无菌生理盐水或75%的酒精擦去病灶表面渗液;

③用无菌棉拭子抹去及较深部的脓汁分泌物或组织送检;

④采集褥疮溃疡标本时应采集褥疮边缘的脓性分泌物，拭子放在运送培养基中立即送检，不要采集创口表面的渗液。

⑵伤口、脓肿、窦道、坏疽组织采集方法及注意事项

①闭锁性脓肿用碘酒和酒精消毒皮肤后，用灭菌注射器穿刺抽取全部脓液送检，疑为厌氧菌感染时，排去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检;

②伤口处若有脓及渗出物要用无菌棉签深入各种窦道中擦拭，用小刀刮取，穿刺抽吸或手术切除获得深处伤口标本;

③当创伤出血时，敷有药物在2h以内及烧伤在12h内均不应采集标本，此时获得阳性结果机会甚少。

④采集标本注意观察脓汁及分泌物性状、色泽、气味等。可为培养鉴定提供依据。

⑶烧伤创面

①烧伤创面需要脓性分泌物，焦痂迅速分离变棕黑、黑或紫罗兰色，烧伤边缘水肿。患者发烧>38℃或低体温<36℃，合并低血压。

②用无菌生理盐水冲洗伤口创面。

③由于创面部位不同，细菌种类也不尽相同，要用灭菌棉拭子采集多个部位的炎症区送检。

④采集痂下变黑或变性的不健康区边缘或引流液等做定量培养及组织活检。

2、厌氧伤口拭子

⑴厌氧专用棉棒或玻璃棒触及深部脓汁;

⑵可用注射器抽吸，排去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检;

⑶立即送检，送检过程中必须保持在无氧条件;

⑷不宜做厌氧菌培养的有痰、喉拭子、鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠、阴道和宫颈拭子以及回肠、结肠造瘘术的流出物，胃、小肠及大肠内容物等。

3、尿道口分泌物拭子

⑴男性用无菌纱布擦拭和清洗尿道口，然后采取从尿道口溢出的脓性分泌物;

⑵采集前列腺液时，先将尿道、膀胱冲洗，然后从肛门用手指按摩前列腺，促使前列腺液溢出;

⑶女性病人先用灭菌纱布或棉拭子仔细擦拭或清洗尿道口，然后从阴道内诊压迫尿道，使分泌物溢出;

⑷取子宫颈分泌物，先用内窥镜扩张阴道，然后从宫颈口用灭菌棉拭子采取分泌物，尽量避免被阴道宫颈附近正常菌群的污染。

4、蜂窝织炎

⑴用无菌生理盐水或酒精消毒皮肤;

⑵用细针在炎症最显着处穿刺吸引;

⑶抽少量灭菌生理盐水在针管内;

⑷注入无菌试管内送检。

5、组织标本

⑴活体组织采取的微量标本，可直接接种在培养基内;

⑵表浅组织可直接用棉拭子擦拭、小刀刮去;

⑶较大组织块的表面可采用烧灼或浸入沸水中5—10s，然后用灭菌剪刀切开，取其中的脓汁;

⑷深部组织标本可经皮肤穿刺或手术切取送检;

⑸组织标本不可用福尔马x固定;

⑹有时也可将沾有脓汁的最内层敷料放入无菌平皿内送检。

十一、眼标本采集

⑴一般细菌，以无菌棉拭子采集眼分泌物，尤其脓性分泌物;

⑵沙眼衣原体，首先擦去眼结膜上面的分泌物，然后用无菌小刀刮取穹窿部及眼结膜上皮细胞，用链霉素处理后备用;

⑶对于刚治疗或药物冲洗过的患者最好12—24h后采集标本;

⑷对于泪囊炎患者可稍加挤压后以无菌棉拭子采集标本。

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Ⅳ 肺结核的诊断方法有哪些

1．病史和症状体征

（1）症状体征情况：肺结核患者的症状一般没有特异性，但明确症状的发展过程对结核病诊断有重要参考意义。体征对肺结核的诊断意义有限。

（2）诊断治疗过程：确定患者是新发现还是已发现病例。不少肺结核患者首次就诊多在综合医院，且接受治疗，应记录首次诊断情况特别是痰排菌情况、用药品种、用药量和时间、坚持规律用药情况等，这对将来确定治疗方案有重要价值。如果是复发患者，治疗史对判断耐药情况有参考意义。

（3）肺结核接触史：主要是家庭内部接触史，对邻居、同事、宿舍等有无肺结核患者也应了解。记录接触患者的病情、排菌情况、治疗方案和用药规律情况、接触时间、接触密切程度等。

2．影像学诊断

胸部X 线检查是诊断肺结核的重要方法，可以发现早期轻微的结核病变，确定病变范围、部位、形态、密度、与周围组织的关系、病变阴影的伴随影像；判断病变性质、有无活动性、有无空洞、空洞大小和洞壁特点等。肺结核病影像特点是病变多发生在上叶的尖后段和下叶的背段，密度不均匀、边缘较清楚和变化较慢，易形成空洞和播散病灶。诊断最常用的摄影方法是正、侧位胸片，常能将心影、肺门、血管、纵隔等遮掩的病变以及中叶和舌叶的病变显示清晰。

CT 能提供横断面的图像，减少重叠影像，易发现隐蔽的病变而减少微小病变的漏诊；比普通胸片更早期显示微小的粟粒结节；能清晰显示各型肺结核病变特点和性质，与支气管关系，有无空洞，以及进展恶化和吸收好转的变化；能准确显示纵隔淋巴结有无肿大。

常用于对肺结核的诊断以及与其他胸部疾病的鉴别诊断，也可用于引导穿刺、引流和介入性治疗等。

3．痰结核分枝杆菌检查

确诊肺结核病的主要方法，也是制订化疗方案和考核治疗效果的主要依据。每一个有肺结核可疑症状或肺部有异常阴影的患者都必须查痰。

（1）痰标本的收集：肺结核患者的排菌具有间断性和不均匀性的特点，传染性患者查一次痰也许查不出，所以要多次查痰。菌阳患者1 个痰标本涂片检查约80% 阳性，2 个痰标本涂片检查约90%阳性，3 个痰标本涂片检查约95% 阳性。通常初诊患者要送三份痰标本，包括清晨痰、夜间痰和即时痰，如无夜间痰，宜在留清晨痰后2 ～ 3 小时再留一份痰标本。复诊患者每次送两份痰标本。无痰患者可采用痰诱导技术获取痰标本。

（2）痰涂片检查：简单、快速、易行和可靠的方法，但欠敏感。

每毫升痰中至少含5000 ～ 10000 个细菌时可呈阳性结果。常采用的是齐－尼氏染色法。痰涂片检查阳性只能说明痰中含有抗酸杆菌，不能区分是结核分枝杆菌还是非结核性分枝杆菌，由于非结核性分枝杆菌少，故痰中检出抗酸杆菌有极重要的意义。

（3）培养法：结核分枝杆菌培养为痰结核分枝杆菌检查提供准确可靠的结果，常作为结核病诊断的金标准。同时也为药物敏感性测定和菌种鉴定提供菌株。结核分枝杆菌培养费时较长，一般为2 ～ 6周，阳性结果随时报告，培养至8 周仍未生长者报告阴性。常用的培养方法为改良罗氏法和小川法。近期采用测定细菌代谢产物的BACTEC TB460 或BACTEC MGIT 960 法，约2 周左右可获得结果。

（4）药物敏感性测定：主要为临床耐药病例的诊断、制定合理的化疗方案以及流行病学监测提供依据。

（5）其他检测技术：如聚合酶链式反应（PCR）、核酸探针检测特异性DNA 片段、色谱技术检测结核硬脂酸和分枝菌酸等菌体特异成分以及采用免疫学方法检测特异性抗原和抗体等，使结核病快速诊断取得一些进展，但这些方法仍在研究阶段，尚需改进和完善。

4．纤维支气管镜检查

纤维支气管镜检查常应用于支气管结核和淋巴结支气管炎的诊断，支气管结核表现为黏膜充血、溃疡、糜烂、组织增生、形成瘢痕和支气管狭窄，可以在病灶部位钳取活体组织进行病理学检查、结核分枝杆菌培养。对于肺内结核病灶，可以采集分泌物或冲洗液标本做病原体检查，也可以经支气管肺活检获取标本检查。

5．结核菌素试验

广泛应用于检出结核分枝杆菌的感染，而非检出结核病。结核菌素试验对儿童、少年和青年的结核病诊断有参考意义。由于许多国家和地区广泛推行卡介苗接种，结核菌素试验阳性不能区分是结核分枝杆菌的自然感染还是卡介苗接种的免疫反应。因此，在卡介苗普遍接种的地区，结核菌素试验对检出结核分枝杆菌感染受到很大限制。目前世界卫生组织和国际防痨和肺病联合会推荐使用的结核菌素为纯蛋白衍化物（purified protein derivative，PPD）PPDRT23，以便于国际结核感染率的比较。

结核菌素试验选择左侧前臂曲侧中上部l/3 处，0.lml（5IU）皮内注射，试验后48 ～ 72 小时观察和记录结果，手指轻摸硬结边缘，测量硬结的横径和纵径，得出平均直径=（横径＋纵径）/2，而不是测量红晕直径，硬结为特异性变态反应，而红晕为非特异性反应。

硬结直径≤ 4mm 为阴性，5 ～ 9mm 为弱阳性，10 ～ 19mm 为阳性，≥ 20 或虽＜ 20mm 但局部出现水泡和淋巴管炎为强阳性反应。结核菌素试验反应愈强，对结核病的诊断，特别是对婴幼儿的结核病诊断愈重要。凡是阴性反应结果的儿童，一般来说，表明没有受过结核分枝杆菌的感染，可以排除结核病。但在某些情况下，也不能完全排除结核病，因为结核菌素试验可受许多因素影响，结核分枝杆菌感染后需4 ～ 8 周才建立充分变态反应，在此之前，结核菌素试验可呈阴性；营养不良、HIV 感染、麻疹、水痘、癌症、严重的细菌感染包括重症结核病如粟粒性结核病和结核性脑膜炎等，结核菌素试验结果则多为阴性和弱阳性。

Ⅳ 尿液标本的采集和处理方法及流程

尿液标本的采集和处理方法及流程

尿液的细菌培养，真菌培养、结核菌培养、真菌涂片、结核菌涂片。下面是我为大家带来的尿液标本的采集和处理方法及流程，欢迎阅读。

一、检查项目

尿液的细菌培养，真菌培养、结核菌培养、真菌涂片、结核菌涂片。

二、标本采集

【标本采集前的注意事项】

应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。

【标本送检指征】

1.有典型的尿路感染症状;

2.肉眼脓尿或血尿;

3.尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性;

4.不明原因的发热，无其他局部症状;

5.留置导尿管的病人出现发热;

6.膀胱排空功能受损;

7.泌尿系统疾病手术前。

【标本采集容器】

无菌试管或无菌尿液标本留取容器。

【标本的采集方法】

1.清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，女性应用手分开大阴唇，男性应翻上包皮，仔细清洗，再用清水冲洗尿道口周围，开始排尿，将前段尿排去，插入性接取中段尿约10ml于无菌容器中，立即送检，于一小时内接种。该方法简单、易行，是最常用的`尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。

2.耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦，病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。

3.直接导尿：按常规方法对会阴部进行清洗消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液。可减少尿液标本的污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道的细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。

4.小儿收集包：对于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复查。

5.留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒剂，不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者，应在更换新尿管时留取尿标本。

【标本采集注意事项】

一般于晨起第一次尿液送检。应选在抗菌药物应用之前。

标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。

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Ⅵ 如何正确留取痰培养标本

可以用无吸水性的商品化专用塑料盒或内层涂蜡纸盒，室温下2小时，冷藏2~4小时之内就要把痰液送到检验室。

采集痰液标本，看似比较容易，但是要取得真正合格的痰液标本并不是一蹴而就，真正的痰液是指气管、支气管的分泌物或肺泡内的渗出物，而不是口腔内的唾液或者是鼻咽部的分泌物等等。

一般采用自然咳痰法，病人早晨起床之后先漱口，用力从呼吸道深部咳出一到两口痰，用干净的容器立即送检。用于特殊检验的痰液标本采集方法：细胞学检查，取上午九到十点新鲜痰液。查找结核分枝杆菌，留取24小时的痰。

(6)结核科常用标本采集方法扩展阅读：

痰培养标本介绍如下：

取痰比较困难的，用特殊的方法取痰，或在鼻咽部直接刮取标本。痰液检查主要是用于呼吸道炎症和感染，还有肿瘤的诊断。痰脱落细胞学检查是诊断肺癌最简单、易行的方法，尤其是不能耐受纤维支气管镜检查和不能行手术治疗的患者。

对疾病的诊断和指导用药具有重要意义。痰标本质量直接影响结果的准确性，阳性检出率受肿瘤分期、分型、送检次数、留痰质量和制片质量等多种因素影响。

Ⅶ 目前实验室对于结核病的实验方法有哪些

1. 结核菌素试验 目前全球均推行纯蛋白衍生物(PPD)，广泛应用于流行病学调查，辅助诊断和鉴别诊断，监测卡介苗接种质量和发现患者和选择预防性治疗对象。采用皮内法，72h检查反应，测量局部硬结反应的横径和竖径，按测得的实际大小记录，并注明水泡、丘疹等反应。结核菌素试验阴性(<5mm)表示未受结核菌感染外，还应该注意影响因素，除病变反应前期，技术因素外，年老体衰、营养不良、病毒性疾病、晚期肿瘤、艾滋病、免疫抑制剂等均能影响结核菌素的反应，使其呈阴性。
2. 涂片镜检法 是发现传染源，确诊结核病、确定化疗方案和考核治疗效果的最重要依据，诊断前应3次痰标本涂片查抗酸杆菌。尽量取支气管深部的痰，量不少于3ml。缺点是敏感性较低，如每ml含的菌量少于104则难以获得阳性，而且不能区分死菌、活菌，也不能区分非结核抗酸杆菌。
3. 细菌培养法 可克服涂片镜检法的缺点，但常规培养方法需2-8周才有结果。快速法可缩短报告时间，但条件要求较高。
4. 其他 血常规通常无改变，严重病例可继发贫血，白细胞总数减少，活动、进展肺结核的部分病人血沉增快，但无特异性诊断意义，血清抗结核抗体检测对诊断仅有参考价值。

Ⅷ 结核分枝杆菌提取过程操作步骤

标本标本的选择根据感染部位。可取痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水。其他肺外感染可取血或相应部位分泌液或组织细胞。
直接涂片镜检标本直接涂片或集菌后涂片，用抗酸染色。若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。抗酸染色一般用ziehl-neelsen法。为加强染色，可用ik(intensified kinyoun)法染色。将石炭酸复红染色过夜，用0.5% 盐酸乙醇脱色30s，则包括大多结核分枝杆菌l型也可着色。为提高镜检敏感性，也可用金胺染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈显金黄色荧光。
浓缩集菌先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% naoh（痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌l型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。
分离培养将经中和集菌材料接种于固体培养基，器皿口加橡皮塞于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的落菌。液体培养可将集菌材料滴加于含血清的培养液，则可于1～2周在管底见有颗粒生长。取沉淀物作涂片，能快速获得结果，并可进一步作生化、药敏等测定和区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。国内学者已证明结核分枝杆菌l型可存在于血细胞内或粘附于细胞表面。这种患者往往血沉加快，用低渗盐水溶血后立即接种高渗结核分枝杆菌l型培养基能提高培养阳性率。
动物试验将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下，3～4周后若局部淋巴结肿大，结核菌素试验阳转，即可进行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变，并作形态、培养等检查。若6～8周仍不见发病，也应进行解剖检查。
快速诊断一般涂片检查菌数需5x103～4/ml,培养需1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（pcr）扩增技术应用于结核分枝杆菌dna鉴定，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性，且1?2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌l型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出dna，以致造成pcr假阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后，则可出现阳性。目前有条件的单位使用bactec法，以含14c棕榈酸作碳源底物的7h12培养基，测量在细菌代谢过程中所产生的14c量推算出标本中是否有抗酸杆菌，5～7d就可出报告。

Ⅸ 肺结核患者为什么要作痰液检查、如何正确留取痰标本

(一)为什么要作痰液检查？当你怀疑有肺结核就诊时，首先要进行胸部透视，医生若发现你的肺内有异常阴影，就会给你作痰液检查。查痰，就是用显微镜查找结核杆菌，痰内一旦发现结核菌，肺结核的诊断便可确定，查痰是诊断肺结核，发现传染源最准确的方法。另外，病人在治疗过程中医生也会要求你定期查痰，用以考核和评价治疗效果。痰菌阳性病人疗程结束后，连续三次查痰阴性为肺结核治愈。 查痰如此重要，因此病人还应掌握正确的留痰方法，否则将会直接影响痰检结果。正确的留痰方法是，在留痰之前先用清水漱口数次，以清除口腔内的食物残渣及部分杂菌。留取的痰应是用力咳嗽后自气管内咳出的痰，然后盛于痰盒内送检。不要将唾液或鼻涕吐入痰盒，以免影响查痰结果。 初次就诊需查痰者，医生要求送三个痰标本：即时痰：就诊当时咳出的痰；夜间痰：前一天晚间咳出的痰；清晨痰：起床后深咳吐出的痰，其中以清晨第一次咳出的痰效果最好。

Ⅹ 结核菌涂片检查用什么做标本

这需要根据临床的实际需要进行标本采集。
例如，最常见的肺结核，那么可能采集的标本就是痰液，或者支气管刷检物等；如果怀疑肠结核那么可能用的是粪便；关节结核可能采集的是关节液；结核菌入侵中枢神经则可以采集脑脊液，等等。