电镜的使用方法

A. 透射电子显微镜的操作步骤

开循环水。由于新电镜循环水不关，这步可省。但要注意水温是否正常。打开电源开关。IN/OUT。从来都是开着的，这步也可省。打开荧屏电源；检查荧屏第一页：确认①电压是否在120KV。②确认样品位置“specimen position”为原点：<x，y，z>=0，0，0，如果不是原点，使用观察窗左侧“SPEC CONTROLLER”控制面板上的N键复原（注意在没有插入样品杆时，严禁使用“N”键！，所以每次推出样品杆之前应该复位）；③α-selector为2用键盘键入P3，使荧屏显示第三页，检查P1－至P5的电流值，正常情况下：p1:25,p2:25,p3:29,p4,28,p5,100，观察阀V1，V2和V4,V5B,V8,V13,V17和V 21共8个阀处于打开状态。察看右下方的真空面板，确定真空进入10-5Pa量程，理想的状态的是指针居中，在灌入液氮的情况下应该更低；如没达到这个范围，请联系值班老师；灯丝处于关闭状态（filament的开关ON没亮）检查聚光镜光栏是否全打开，物镜光栏是否全打开，如不是请打开全部光栏。检查右侧面板，观察电镜是否处于MAG1（此灯亮）打开左侧门，将“lens”开关打到ON的位置（请一定要非常小心，确认是lens开关，不要开错开关。即开灯丝，将开关稍向外拉再抬上即开。）。再次观察荧屏，电压是否在120KV，如果不是，严禁进行下面操作。将面板左侧开关HT按下，升高压，注意观察左侧面板上显示的Beam Current值，一般120KV时，电流值应该在60－62，如果偏离很多，请联系值班老师；（按下HT。确定BEAM CURRENT稳定，只需看一下表中数值是否稳定即可。电流是电压的一半加一或一半加二。）等Beam Current值稳定在60－62至少5分钟时间，用键盘开始升压程序。如果电压值不能稳定，请联系值班老师；用键盘键入P1，使银屏显示第一页，然后键入RUN，银屏将问“start HT”，键入120，然后按“enter”，银屏会显示“End HT”，键入160，按“enter”键，银屏会显示“？？？”，键入10，电镜随之会自动开始升压，此时按下右侧HT wobbler。等这第一步升压完成后，再按HT wobbler停止webbler工作，注意观察左侧Beam Current值是否稳定在80－82，如不稳定等10－20分钟。如稳定，重复刚才的操作，只不过将start HT改为160，end HT改为180，等升压到180KV时，此时Beam Current应在92附近。如稳定，继续升压，将start HT改为180，end HT改为200，升压结束时，Beam Current应该在102。（该步骤为升高压。120—200Kv，用左边的钮设定。在屏幕上加电压，打开键盘输入run回车；出现HT start，输120回车； 出现HT stop，输160回车。如此三次加高压到200kv。Total time，输10min；HT step，输10。）再次观察银屏第三页，检察V1－V3是否已经正常打开，P1－P5值是否在正常范围；右下的SIP显示的真空是否在10-5级，一切正常，按下左侧面板filament的ON键，打开灯丝，等灯丝电流稳定（约2－4分钟），最后的灯丝电流应该在105左右。观察是否有正常光斑。

B. 透射电镜和扫描电镜的特点及应用（越全越好）

1、透射电子显微镜电子束的波长要比可见光和紫外光短得多，并且电子束的波长与发射电子束的电压平方根成反比，也就是说电压越高波长越短。

透射电子显微镜在材料科学、生物学上应用较多。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，样品的密度、厚度等都会影响到最后的成像质量，必须制备更薄的超薄切片，通常为50～100nm。所以用透射电子显微镜观察时的样品需要处理得很薄。

常用的方法有：超薄切片法、冷冻超薄切片法、冷冻蚀刻法、冷冻断裂法等。对于液体样品，通常是挂预处理过的铜网上进行观察。

2、扫描电镜的特点：有较高的放大倍数，2-20万倍之间连续可调；有很大的景深，视野大，成像富有立体感，可直接观察各种试样凹凸不平表面的细微结构；试样制备简单。

生物：种子、花粉、细菌；

医学：血球、病毒；

动物：大肠、绒毛、细胞、纤维；

材料：陶瓷、高分子、粉末、金属、金属夹杂物、环氧树脂；

化学、物理、地质、冶金、矿物、污泥（杆菌）、机械、电机及导电性样品，如半导体(IC、线宽量测、断面、结构观察）电子材料等。

(2)电镜的使用方法扩展阅读

透射电镜的总体工作原理是：由电子枪发射出来的电子束，在真空通道中沿着镜体光轴穿越聚光镜，通过聚光镜将之会聚成一束尖细、明亮而又均匀的光斑，照射在样品室内的样品上；透过样品后的电子束携带有样品内部的结构信息，样品内致密处透过的电子量少，稀疏处透过的电子量多；

经过物镜的会聚调焦和初级放大后，电子束进入下级的中间透镜和第1、第2投影镜进行综合放大成像，最终被放大了的电子影像投射在观察室内的荧光屏板上；荧光屏将电子影像转化为可见光影像以供使用者观察。

扫描电子显微镜的制造依据是电子与物质的相互作用。扫描电镜从原理上讲就是利用聚焦得非常细的高能电子束在试样上扫描，激发出各种物理信息。通过对这些信息的接收、放大和显示成像，获得测试试样表面形貌的观察。

C. 怎么使用电子显微镜

分扫描电镜和透射电镜
都要经过专门培训的专业人员才可以使用
一般学校科研机构都有专门人员负责管理和使用
一般人要使用不能直接操作，只能把待观察样品做好送去让专业人员操作
电子显微镜不是普通光学显微镜，不是照着说明书做就可以的了
需要很多的经验才能用得好

D. 电镜的使用

分扫描电镜和透射电镜
都要经过专门培训的专业人员才可以使用
一般学校科研机构都有专门人员负责管理和使用
一般人要使用不能直接操作，只能把待观察样品做好送去让专业人员操作
电子显微镜不是普通光学显微镜，不是照着说明书做就可以的了
需要很多的经验才能用得好

E. 免疫电镜技术的常用方法有哪些

在电镜下直接观察抗原和抗体的结合反应，称为免疫吸附电镜或免疫电镜技术。它具有准确、快速、灵敏度高和操作简便等优点，在抗血清效价很低时仍有较明显的反应。免疫电镜技术有下列常用的方法。

1 诱捕法

（1）包被抗血清 铜网膜面覆于抗血清液滴上（抗血清的稀释度应先试验确定），5～10min，反应时加盖，以防抗血清滴蒸干。

（2）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（3）包被检测样品 铜网膜覆于病组织浸出液滴中10min，吸干。

（4）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（5）负染 用2%醋酸双氧铀负染数秒，吸干。

（6）电镜观察 凡抗原和抗体有反应，则在铜网膜上能捕获到较多的粒体。可以提高病毒检测效率10～100倍。本法适宜各种形状的病毒粒体。

2 修饰法

（1）包被抗血清 铜网膜面覆于抗血清液滴上（抗血清的稀释度应先试验确定），5～10min，反应时加盖，以防抗血清滴蒸干。

（2）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（3）包被检测样品 铜网膜覆于病组织浸出液滴中10min，吸干。

（4）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（5）铜网膜再置抗血清中[比（1）所用抗血清浓度约高50～100倍]10min。

（6）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（7）负染 用2%醋酸双氧铀负染数秒，吸干。

（8）电镜观察 凡抗原和抗血清呈阳性反应的，病毒粒体比一般浸渍法多，病毒粒体表面布满抗体分子，使粒体体积变大，适用于观察除球状以外的病毒。

3 A-蛋白的修饰法

本法适宜于抗血清效价较低，用一般修饰法又难以判断结果的。由于抗体上又结合A-蛋白，使粒体外的“外套”加厚，便于判断。比诱捕法提高检测效率1～2倍。步骤如下：

（1）包被抗血清 铜网膜面覆于抗血清液滴上（抗血清的稀释度应先试验确定），5～10min，反应时加盖，以防抗血清滴蒸干。

（2）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（3）包被检测样品 铜网膜覆于病组织浸出液滴中10min，吸干。

（4）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（5）蘸取20%A-蛋白液，吸干。

（6）洗涤 用10～30滴蒸馏水滴冲洗铜网膜，滤纸吸干。

（7）负染 用2%醋酸双氧铀负染数秒，吸干。

（8）电镜观察。

F. 电子显微镜成像原理

一、透射电子显微镜的成像原理可分为三种情况：

1、吸收像：当电子射到质量、密度大的样品时，主要的成相作用是散射作用。样品上质量厚度大的地方对电子的散射角大，通过的电子较少，像的亮度较暗。早期的透射电子显微镜都是基于这种原理。

2、衍射像：电子束被样品衍射后，样品不同位置的衍射波振幅分布对应于样品中晶体各部分不同的衍射能力，当出现晶体缺陷时，缺陷部分的衍射能力与完整区域不同，从而使衍射波的振幅分布不均匀，反映出晶体缺陷的分布。

3、相位像：当样品薄至100Å以下时，电子可以穿过样品，波的振幅变化可以忽略，成像来自于相位的变化。

二、扫描电子显微镜成像原理

扫描电子显微镜通过用聚焦电子束扫描样品的表面来产生样品表面的图像。

电子与样品中的原子相互作用，产生包含关于样品的表面测绘学形貌和组成的信息的各种信号。电子束通常以光栅扫描图案扫描，并且光束的位置与检测到的信号组合以产生图像。

扫描电子显微镜可以实现分辨率优于1纳米。样品可以在高真空，低真空，湿条件（用环境扫描电子显微镜）以及宽范围的低温或高温下观察到。

最常见的扫描电子显微镜模式是检测由电子束激发的原子发射的二次电子。可以检测的二次电子的数量，取决于样品测绘学形貌，以及取决于其他因素。

通过扫描样品并使用特殊检测器收集被发射的二次电子，创建了显示表面的形貌的图像。它还可能产生样品表面的高分辨率图像，且图像呈三维，鉴定样品的表面结构。

(6)电镜的使用方法扩展阅读：

在使用透视电子显微镜观察生物样品前样品必须被预先处理。随不同研究要求的需要科学家使用不同的处理方法。

1、固定：为了尽量保存样本的原样使用戊二醛来硬化样本和使用锇酸来染色脂肪。

2、冷固定：将样本放在液态的乙烷中速冻，这样水不会结晶，而形成非晶体的冰。这样保存的样品损坏比较小，但图像的对比度非常低。

3、脱干：使用乙醇和丙酮来取代水。

4、垫入：样本被垫入后可以分割。

5、分割：将样本使用金刚石刃切成薄片。

6、染色：重的原子如铅或铀比轻的原子散射电子的能力高，因此可被用来提高对比度。

G. 电子显微镜的工作原理和使用方法

电子显微镜是以电子束为照明光源的显微镜。由于电子束在外部磁场或电场的作用下可以发生弯曲，形成类似于可见光通过玻璃时的折射现象，所以我们就可以利用这一物理效应制造出电子束的“透镜”，从而开发出电子显微镜。而作为透射电子显微镜(tem)其特点在于我们是利用透过样品的电子束来成像，这一点有别于扫描电子显微镜(scanning electron microscope，sem)。