血液细胞常用染色方法

‘壹’ 瑞氏染色的步骤是什么

操作步骤：

1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；

2. 再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）

3.水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。

注意事项：

1. 染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定；通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟；气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。

2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。

3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。

4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。

5.染料放置时间越长，染色效果越好。

6. 本试剂应由专业人员使用。

拓展资料

Wrfeht和Giemsa都于1902年报告了各自的新的血液学染色剂，其主要特点是在制备多色性亚甲蓝（主要指天青B）方面做了改进，使血细胞和疟原虫着色较好，操作简便。

上述染色法均是含伊红和亚甲基蓝衍生物的复合染料。在临床检验工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物和排泄物涂片中各种细胞的染色，有利于在显微镜下观察细胞形态及对细胞进行分类检查。

【染色原理】

瑞氏染色分两相进行，第一相是酸性染料伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质（chro－matin）、特异中性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合。第二相是天青B和伊红在适宜条件下形成紫色的天青B一伊红复合物（azure B－eosin complex），这种复合物是形成Romanowsky－Giemsa效应的基础。

Romanowsky－Giemsa效应包括：①白细胞核染色质染成紫色，疟原虫的染色质染成红色；②中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区染成紫色；③产生本效应必须有两种染料参与，一种是天青B，另一种是伊红。

Wittekind（1985）指出，天青B与DNA分子中的磷酸基结合，而伊红既与DNA分子中的阳离子部位结合，又与天青B结合，与天青B的结合力来源于电子供一受体的电子转移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）与伊红分子中的叛基（－COOH）间形成氢键。因此，天青B是噻嗪类染料中能与伊红形成复合物的最佳选择，因为拥有四个甲基侧链的亚甲蓝不能以氢键与伊红结合。

甲醇除作为染料的溶剂，能将瑞氏染料解离成带正电荷的天青B和带负电荷伊红外，因其具有脱水力，还可将细胞固定为一定形态，并使蛋白沉淀为颗粒状、网状结构，增加细胞与染料的接触表面，增强染色效果。

细胞中的各种有机物质（特别是蛋白质）、染料等对环境的州值非常敏感。如环境偏酸，氢离子增多，降低对碱性染料的亲和力；增强伊红着色，出现异常红染；相反，则可出现异常蓝染。最佳环境应维持在PH值6 4～6、8.因此，必须使用缓冲溶液。

网络_瑞氏染色

瑞氏染色原理及方法_医学教育网

‘贰’ 瑞氏染色步骤

操作步骤：
1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；
2.
再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）
3.水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。
注意事项：
1.
染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定；通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟；气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。
2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。
3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。
4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。
5.染料放置时间越长，染色效果越好。
6.
本试剂应由专业人员使用。
拓展资料
Wrfeht和Giemsa都于1902年报告了各自的新的血液学染色剂，其主要特点是在制备多色性亚甲蓝（主要指天青B）方面做了改进，使血细胞和疟原虫着色较好，操作简便。
上述染色法均是含伊红和亚甲基蓝衍生物的复合染料。在临床检验工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物和排泄物涂片中各种细胞的染色，有利于在显微镜下观察细胞形态及对细胞进行分类检查。
【染色原理】
瑞氏染色分两相进行，第一相是酸性染料伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质（chro－matin）、特异中性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合。第二相是天青B和伊红在适宜条件下形成紫色的天青B一伊红复合物（azure
B－eosin
complex），这种复合物是形成Romanowsky－Giemsa效应的基础。
Romanowsky－Giemsa效应包括：①白细胞核染色质染成紫色，疟原虫的染色质染成红色；②中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区染成紫色；③产生本效应必须有两种染料参与，一种是天青B，另一种是伊红。
Wittekind（1985）指出，天青B与DNA分子中的磷酸基结合，而伊红既与DNA分子中的阳离子部位结合，又与天青B结合，与天青B的结合力来源于电子供一受体的电子转移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）与伊红分子中的叛基（－COOH）间形成氢键。因此，天青B是噻嗪类染料中能与伊红形成复合物的最佳选择，因为拥有四个甲基侧链的亚甲蓝不能以氢键与伊红结合。
甲醇除作为染料的溶剂，能将瑞氏染料解离成带正电荷的天青B和带负电荷伊红外，因其具有脱水力，还可将细胞固定为一定形态，并使蛋白沉淀为颗粒状、网状结构，增加细胞与染料的接触表面，增强染色效果。
细胞中的各种有机物质（特别是蛋白质）、染料等对环境的州值非常敏感。如环境偏酸，氢离子增多，降低对碱性染料的亲和力；增强伊红着色，出现异常红染；相反，则可出现异常蓝染。最佳环境应维持在PH值6
4～6、8.因此，必须使用缓冲溶液。
参考资料：
搜狗网络_瑞氏染色
瑞氏染色原理及方法_医学教育网

‘叁’ 细胞膜 染色 该用什么染料有什么方法

对细胞膜染色需要的染料如下：
DiO(细胞膜绿色荧光探针)，呈现绿色荧光。
荧光素双醋酸酯（FDA），绿色荧光。
细胞染色方法：
PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色

是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。

annexin-v染色

细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸
(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

JC-1染色

JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性
(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。
JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。

钙黄绿素-AM(Calcein-AM):

Calcein -AM本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein -AM能脱去AM基，产生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）。因此Calcein -AM仅对活细胞染色

细胞活力鉴定——台盼蓝染色法

原理：
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。
用品：
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。 2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
步骤：
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml） 2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。 3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞
台盼蓝染色原理
通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。
试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理，试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的原因。死细胞的细胞膜无屏障作用，台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢。若染色时间过长，台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。

‘肆’ 常用的细胞染色方法有哪些

常用的细胞染色方法有：

1、简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色；

2、革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程；

3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成；

4、吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；

5、细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。

染色是生物显微玻片标本制作中最重要的环节之一。先把破坏细胞膜的选择透过性，再使用染色剂，将生物组织浸入染色剂内，使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色，产生不同的折射率，以便观察。

另外，银染法也较常用。当组织块浸入硝酸银溶液中时，有的组织结构能直接把硝酸银还原，使银粒附于其上，呈棕黑色或棕黄色。有些结构本身对硝酸银无直接还原能力，若加入还原剂，可使硝酸银还原沉淀显色。

(4)血液细胞常用染色方法扩展阅读：

染色细胞固定有物理法与化学法，物理法为干燥和火焰固定，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。

1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。

2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。

3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。

4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。

5、金属沉着法：其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。

‘伍’ 血细胞染色常用的瑞氏染色法的原理主要讲一下瑞氏染液。

瑞氏染色法：用瑞氏染色液对细菌进行染色以便进行显微镜检查的染色法

原理
甲醇具强大脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构表面积，提高细胞对染料吸收作用
同时吸附染色液中的水，使染色液升温，加速反应

‘陆’ 血细胞不同染色方法的优缺点

红细胞，也叫红血球，无核，由造血干细胞 生成，用于输送氧气
白细胞，也叫白血球，与淋巴等其他结构构 成免疫系统，可以吞噬对机体有害的细胞或 细菌病毒等
血小板，用于凝血，缺少血小板的先天病有 血友病等
血细胞很多分类您问哪一种？

‘柒’ 全国临床检验操作规程推荐的血细胞染色法是什么

《全国临床检验操作规程》推荐的血细胞染色法
瑞-吉复合染色

‘捌’ 血细胞染色方法是怎么建立的

19世纪德国的化学工业、染料工业、制药工业的发展十分迅速。1856年，英国化学家W.H.帕金首先发明了染料的人工合成方法。不久，德国化学家A.W.霍夫曼相继合成了染料碱性品红和苯胺蓝。人们在应用染料过程中发现，其不仅可以染色布料、毛皮，而且还可以染色布料、毛皮，而且还可以使动物组织着色。更有趣的是，有些染料能使某些特定的细胞而不是所有的细胞着色，还有一些染料能使一种细胞的某一部分而不是整个细胞着色。于是，染料成了科学家观察有机体结构的一种非常有用的工具。起初，能应用于有机体染色的染料为数不多，19世纪末，随着德国染料工业的迅速发展，生产出了各种染料，极大地拓展了科学家观察研究的范围。医学家开始用特殊染料使有机体的组织和细胞染色，在显微镜下进行观察研究。

德国医学家艾利希正是在这种背景下发明血细胞染色方法的。艾利希的叔父魏格特是德国着名的病理学家和组织学家，也是细菌和组织染色方法的创立者。他发明的许多人体组织和细胞的染色方法，有些一直尚用至今。艾利希在魏格特的影响下，自幼爱好动物学和化学。在大学学习阶段，他就对化学染料与有机体组织细胞染色的关系产生了极大的兴趣，并开拓研究某些化学物质对动物组织的作用。他不仅对机体的化学过程充满兴趣，而且也十分关注机体中更小的成分——细胞的构造和成分。当时还很少有医生将化学与医学结合起来研究的，值得庆幸的是，斯特拉斯堡大学教授、艾利希的老师沃尔德耶尔恰好持有这种观点。沃尔德耶尔赞同艾利希的研究计划，并鼓励这个青年人在科学研究上走自己的路。在斯特拉斯堡大学学习期间，艾利希就发表了莱于化学物质在体内的分布及其与药物作用关系的论文。

虽然艾利希对用化学方法研究生命现象充满兴趣，但他对当时大学里死板的教学方法十分厌恶，所以艾利希经常逃课，尤其是化学课。结果是艾利希不能通过课程考试，不得不留级一年。然而，他并不懊恼，而是继续将时间都倾注在捣弄各种染料上。由于专心研究，不修边幅，以致于染料弄得到处都是。数年后，一位教授指着艾利希曾使用过的工作台说：“艾利希工作的痕迹实际上是不可摧毁的。”德国着名科学家罗伯特·科赫也时常提及一个有关艾利希的小故事：他去布雷斯劳大学鉴定白喉杆菌时，被邀请参观实验室。实验室的负责人指着艾利希的办公桌告诉他：这是艾利希的工作台。艾利希是一个非常出色的染料师，但考试却经常不极格。

当时，德国学生为了获得学位，经常在几所大学学习。艾利希曾在布雷斯劳大学、斯特拉斯堡大学、布赖斯高地大学、弗莱堡大学和莱比锡大学等多所学校学习过。在布雷斯劳大学时，他对实验室的工作十分感兴趣，他发明的染色技术揭示了许多细胞的基本构造。刚发现炭疽杆菌的科赫在布雷斯劳大学访问时曾与艾利希探讨了染色问题，从此，艾利希和科赫结下了深厚的友谊。

艾利希不仅热衷于实验观察，而且善于独立思考。在大学学习期间，一次在观察铅中毒死者的组织变化时，他发现凡是生前诊断为严重铅中毒病人的身体组织，在作尸体病理检查时，把组织浸入含铅溶液中，这些组织的细胞也最容易吸收和积蓄铅。艾利希敏锐地意识到人体的不同组织和器官对特定的化学物质可能存在着不同的“亲和力”。于是，他开始用各种染料对人体组织标本进行染色，以确定能使特定组织和细胞染色的染料及其之间的相互关系。

1878年，艾利希在莱比锡大学毕业并获医学博士学位。他的博士论文是关于染料应用于显微镜观察的理论和实践问题，主要内容是关于如何应用各种苯胺染料进行动物组织染色的理论和技术。这一问题包含了艾利希关于染料和染色方法的许多设想：实际上已经奠定了他今后为医学做出巨大贡献的思想基础。1891年，艾利希在一本关于有机体组织对染料的不同反应的着作中，介绍了血细胞的染色方法。1898年，他与同事又合作出版了一本论贫血的着作，总结了正常和病理情况下对血液的观察，内容包括血液观察的方法学、正常和病理情况下的红细胞、各种白细胞、淋巴细胞以及白血病的细胞特点等。

在研究过程中，艾利希发现染料分为酸性、碱性和中性三类，不同的染料对于白细胞内的颗粒染色结果不同，由此他第寻次提出了白细胞的分类方法。艾利希因为这些着名的观察和方法学的建立，被誉为现代血液学的奠基人。

‘玖’ 细胞染色最常见的方法是什么

细胞染色常用方法主要包括以下几个即：1.简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;2.革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程;3.瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;4.吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;6.细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。

‘拾’ 求各种生物学染色法

（1）巴氏染色法：本法染色特点是细胞具有多色性颜色，色彩鲜艳多彩。涂片染色的透明性好，胞质颗粒分明，胞核结构清晰，如鳞状上皮过度角化细胞胞质呈橘黄色；角化细胞显粉红色；而角化前细胞显浅绿色或浅蓝色，适用于上皮细胞染色或观察阴道涂片中激素水平对上皮细胞的影响。此方法的缺点是染色程序比较复杂。
（2）苏木精—伊红（hemotoxylin eosin,HE）染色法：该方法染色透明度好，核与胞质对比鲜明。染色步骤简便，效果稳定。适用于痰液涂片，觖质核呈紫蓝色，胞质淡玫瑰红色，红细胞呈淡朱红色。
（3）瑞特—吉姆萨染色法（wrightgiemsaatain）；本方法多用于血液，骨髓细胞学检查。胞质内颗粒与核安危质结构显示较清晰。操作简便。