菌落计数器使用方法

① 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键为什么

1、无菌操作。

2、稀释良好，不会太浓或太稀。

3、菌落生长时间控制好，不会长的太大不便区分，也不至于太小影响计数。

首先将待测样品作一系列稀释，稀释度的选择很重要，以三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。

再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。

(1)菌落计数器使用方法扩展阅读

检测食品中微生物数量，一般采用标准平板菌落计数法（SPC）对食品中的活的微生物进行菌落形成单位（CFU）数量的检测。

即将部分样品取出混合均匀，用适当的稀释液进行梯度稀释，取一定量的稀释液涂布或倾注琼脂平板，在合适的温度下培养一定的时间，然后通过肉眼观察或电子计数器对所有可见菌落进行计数。

虽然日常检测大多采用倾注平板的方法，但是涂布法在检测热敏性菌体方面更有优势，能取得更好的计数结果，而且更适合于严格好氧菌。涂布法的缺点是涂布时琼脂表面不干燥和培养后菌落蔓延导致无法计数。

使用注意事项

仪器要放在平整牢固的试验台上，点数时，探笔不要过于倾斜，轻点至有弹跳感，数字即可显示。仪器应防尘，放大镜表面的灰尘，要用纯化水清洗后，再用镜头纸擦拭干净即可，另外还应防潮、防剧烈震动、防日光曝晒、防酸碱等，使用完后加防护罩。仪器及探笔非专业人员不能拆卸，有故障，请专业技术人员检修。

② 菌落计数有哪些的方法

测定微生物细胞数目方法有多介绍几种

1.血细胞计数法

稀释菌液样品滴血细胞计数板上显微镜下计算4~5格细菌数并求出每小格所含细菌平均数再此依据估算总菌数

①此法缺点能区分死菌和活菌

②对压小方格界线上细菌应当取平均值计数

③此法用于测定培养液酵母菌种群数量变化

2.稀释涂布平板法

原理：每活细菌适宜培养基和良好生长条件下通过生长形成菌落培养基表面生长菌落来源于样品稀释液活菌

①方法常用来统计样品活菌数目

②统计菌落数往往比活菌实际数目低原因当两活多细胞连起时平板上观察只菌落因此统计结般用菌落数而用活菌数来表示

③土壤、水、牛奶、食品和其材料所含细菌、酵母、芽孢与孢子等数量均用此法测定适于测定样品丝状体微生物例放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等营养体等

④此法若培养成菌落通过定量菌液均匀地涂布玻片上定面积上经固定染色显微镜下计数样又称涂片计数法染色用台盼蓝台盼蓝能使死细胞染成蓝色分别计数死细胞和活细胞

3.滤膜法

滤膜法当样品菌数低时定体积湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器滤膜干燥、染色并经处理使膜透明再显微镜下计算膜上（或定面积上）细菌数

此法也通过培养观察形成菌落数来推算样品菌数例测定饮用水大肠杆菌数目：已知体积水过滤滤膜放伊红美蓝培养基上培养该培养基上大肠杆菌菌落呈现黑色根据培养基上黑色菌落数目计算出水样大肠杆菌数目

此法也统计样品活菌数目

4.比浊法

原理定范围内菌悬液细胞浓度与混浊度成正比即与光密度成正比菌越多光密度越大因此借助与分光光度计定波长下测定菌悬液光密度光密度表示菌量实验测量时定要控制菌浓度与光密度成正比线性范围内否则准确

5.显微镜直接计数法

课本生物选修1生物技术实践P22除了上述活菌计数法外显微镜直接计数也测定微生物数量常用方法里说显微镜直接计数我认应该稀释涂布基础上培养成菌落而通过染色方法显微镜下直接计数再滤膜法也样有两种情况

另外微生物计数法发展迅速多种多样快速、简易、自动化仪器和装置等方法用来统计微生物数目。

来源：http://..com/link?url=ZF7Dq5chhYTeO1xK

③ 总菌计数 怎么区分杂质还是菌落

传统的菌落计数器使用时，是将计数笔连接到主机上，打开电源开关，
将培养皿放在白光板上，打开白光灯，用计数笔触动计数，LED显示屏显示所计数量；
计数完成可用计数笔在稿纸上暂记总数，重新开关电源，LED显示屏自动归零，二次计数与稿纸上一次总数比较，数量相同可得较准确的结果。
同时，按照细菌计数检验规程规定，一只培养皿中细菌生长数超过300个时，应将检验样品稀释重作，以保证计数的准确性，所以，一般的菌落计数器仪器显示计为三位数。
多功能血细胞计数器是由数字处理芯片、集成电路，以及显示屏、按键组成，与各种显微镜配合使用，由
微电脑进行自动分类计数的数字化专用产品，能对骨多功能血细胞计数器髓细胞、外周血细胞、小巨核细胞进行全面的分类计数并自动计算出各项指标，能对细胞化学染色后的积分进行计算，并兼有常用的四则运算。

④ 测大肠杆菌要用菌落计数器吗

GB 4789—2012食品微生物学检验 大肠菌群计数 第二法 大肠菌群平板计数法，6.2.2.2将10 mL～15 mL 冷至45? ℃±0.5? ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每个平皿中。小心 旋转平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mL? VRBA-MUG覆盖平板表层。 凝固后翻转平板，36? ℃±1? ℃培养18 h～24 h。
6.3平板菌落数的选择
选择菌落数在10 CFU～100 CFU之间的平板，暗室中360 nm～366 nm? 波长紫外灯照射下，计数平板 上发浅蓝色荧光的菌落。 BD- C1型大肠埃希氏菌计数器是北京启航博达科技有限公司生产的一种数字显示式自动细菌检验仪器。检测菌落的同时可以进行计数，上面：6W紫外灯通过窄带滤光片（面积：200X50MM）滤去可见光发出在30cm距离内产生360 nm～366 nm 波长紫外光，强度约为1200 μW/cm2，观察各种有荧光出现的检测结果，下面：由计数器、探笔、计数池，等部分组成，计数器采用CMOS集成电路和高保真语音芯片精心设计，计数时同步语音报读，LED数码管显示，字高13mm，清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确。记数池内有荧光灯照明，菌落对比清楚，便于观察。适用于食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数(GB 4789—2012)大肠埃希氏菌平板计数法，使用方便、安全、可靠。 可应用于医疗卫生、食品安全监督、各级疾病控制中心、各级工商、检验检疫、自来水厂、矿泉水厂、饮料厂、海洋监测、质量监督、环境保护等部门

⑤ protocol3菌落计数器注意事项

1、将电源插头插入220V电源插座内。将探笔插入仪器上的探笔插孔内。2、将电源开关拨向“开”，计数池内灯亮。同时显示窗内显示明亮的“0000”，表示允许进行计数，如第二次开有数字，证明上次计数未清零。3、将待检的培养皿皿底朝上放入计数池内。用探笔在培养皿底面对所有的菌落逐个点数。此时，菌落处被标上颜色，显示窗内数字自动累加。4、用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏，计数即已完毕。5、显示窗内的数字即为该培养皿内的菌落数。6、记录数字后取出培养皿。按“清零”按钮，显示恢复“0000”，为另一培养皿的计数做好准备。

⑥ 菌落总数的计算

菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。

在进行菌落计数时，有一些样品的残渣会在视觉上与菌落混淆，因此，在进行计数时应该仔细分辨。菌落的形状相对规则，比较有光泽度，更饱满，而样品的残渣比较不规则，没有菌落的饱满度和光泽度。

另外，还可向培养基中添加一定浓度的TTC，可以使菌落成红色，便于观测和计数，但TTC的浓度不宜过高，否则会抑制菌落的生长。

从温箱内取出平皿进行菌落计数时，应先分别观察同一稀释度的两个平皿和不同稀释度的几个平皿内平板上菌落生长情况。平行试验的2个平板与菌落数应该接近，不同稀释度的几个平板上菌落数则应与检样稀释倍数成反比，即检样稀释倍数越大，菌落数越低，稀释倍数越小，菌落数越高。

菌落计数所得结果，可分别按以下几种不同情况作报告。 若1个稀释度的平均菌落数在30—300之间，则将该菌落数乘其稀释倍数报告之。 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30—300之间，则视二者之比如何来决定。若其比值小于2，应报告其平均数。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

(6)菌落计数器使用方法扩展阅读：

计数和报告

1．操作方法：培养到时间后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算处原始样品中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。

2．到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。

3．计数时应选取菌落数在30~300之间的平板（SN标准要求为25~250个菌落），若有二个稀释度均在30~300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。

4．若所有稀释度均不在计数区间。如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。

如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。

5．不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。

如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。

6．当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算。

不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。

7．当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。

8．菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。

固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm）报告。

⑦ 检测食品化验菌落总数的实验步骤更原理

其实菌落总数和大肠菌的测定方法、步骤都差不多，只是一个是用培养皿一个是用试管

⑧ 菌落总数培养皿怎么数,片上面又有好多小点要数吗

固体培养基表面及内部的可见菌落（包括小点）均要计数，计数时可用笔在培养皿背面划线，分若干块计数
细菌菌落总数（CFU）的测定
一）平板菌落数的选择
1、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的3个平板（或2个）的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即为1ml水样中的细菌总数。
2、计数时应选择菌落数在30~300/皿之间的稀释倍数进行计数，若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半时，而另—半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。
(二)
稀释度的选择
l、首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。
2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小的菌落数。
3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
4、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6、菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示，在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水样的稀释倍数。

⑨ 有菌落计数器吗，可以自动计算细菌数目的

菌落计数器是一种数字显示式自动细菌检验仪器。由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计，LED数码管显示，字高13mm，清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确。黑色背景式记数池内，荧光灯照明，菌落对比清楚，便于观察。本仪器可减轻实验人员的劳动强度，提高工效，提高工作质量，广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。是各级隆重防疫站、环境监测站、食品卫生监督检验所、医院、生物制品所、药检所、商检局、食品厂、饮料厂、化妆品厂、日化厂及大专院校、科研单位实验室的必备仪器。

⑩ 微生物计数方法有哪些我想知道详细的操作步骤

微生物的显微直接计数法

一、实验目的
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理
测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106 。
因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d）
三、实验器材
1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。
2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。
四、实验方法
1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度。
2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2—3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。
7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
五、实验作业：
将实验结果填入下表中：
计数次数 每个大方格菌数 稀 释
倍 数 试管斜面中的总菌数 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次