荧光显微镜使用方法

㈠ 荧光显微镜的使用注意事项

操作要注意汞灯不要频繁开关，打开之后半小时之内不要关闭，关闭后半小时不要打开。开机时注意把光强调到最小，这样可以延长灯泡寿命。荧光观察完毕后注意把荧光转换到空挡。

㈡ 倒置荧光显微镜的操作方法和注意事项

荧光显微镜一般都是用到汞灯，在使用时，两次开启光源间隔要在20分钟以上，要不然会缩短汞灯的使用寿命。进口的汞灯价格比较贵。至于用到哪个波段的光，要看你的样品需求了。
CFM-550 系列荧光显微镜是由倒置显微镜和落射荧光装置组成。配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜、双目观察。倒置荧光显微镜还配有特长工作距离聚光镜、同时配有相衬装置及长工作距离平场相衬物镜，具有在培养瓶或培养皿内进行显微观察的特点。倒置荧光显微镜可以观察不经染色的透明活体；落射荧光装置适用于荧光显微术。倒置荧光显微镜特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究，是生物学、细胞学、肿瘤学、遗传学、免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研、高校、医疗、防疫质检和农牧等部门使用。

㈢ 荧光显微镜怎么看绿色荧光

绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白，当受到紫外或蓝光激发时，发射绿色荧光。

其特点在于：它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋白质一级序列固有的来源于水母的氨基酸残基组成。水母的绿色荧光蛋白很稳定，无种属限制，已在多种动植物细胞中表达成功并产生荧光。GFP 的荧光受外界的影响较小，另外GFP 的检测十分方便，而对细胞的伤害小。

细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

目前在常用的方法就是采用荧光显微镜观察，荧光显微镜在实验室普及，但不足的是必须采集叶片或动物切片进行观察，对培养的标本进行破坏，无法进行活体观察。

绿色荧光蛋白GFP的发光特性：

GFP吸收的光谱峰值为395nm（紫外），并有一个峰值为470nm的副吸收峰（蓝光）；发射光谱峰值为509nm（绿光），并带有峰值为540nm的侧峰（Shouder）。虽然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于该激发光对细胞的伤害小，因此通常多使用该波段光源（多为488nm）。

此外，GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐（FITC）很相似，两者通常共有一套滤光片。GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比荧光素强，特别是在450～490nm蓝光波长下稳定。

类似的，GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高，抗光漂白能力强，因此适用于定量测定与分析。

由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物，因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白，其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。但因为GFP不是酶，荧光信号没有酶学放大效果，因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白，比如萤火虫荧光素酶等。

㈣ 谁能提供荧光显微镜操作规程

荧光显微镜操作规程（以OLYMPUS为例）
OLYMPUS日光型胶片照相步骤
■ 设备标注及基本状态
⒈色温测定光路转换拉杆①，插入；
⒉照相光路转换拉杆②，插入；
⒊照明光源电压调节钮③，中间位；
⒋灯光型胶片色温平衡（LBD）滤光器④，使用日光型胶片时推向后面，请勿扳动；
⒌单色反差滤光片插槽⑤，使用彩色胶片时不用滤色片；
⒍视场光阑和孔径光阑，调到约3/4打开位置，请勿转动。

■ 安装与准备
⒈ 安装：装上照相机（圆点对合，顺时针旋转至入位），装上胶卷；相机短输出线连接到自动曝光本体，长输出线连接到数据输入控制仪；
⒉ 通电：接通自动曝光控制仪及显微镜电源，初始化1～2分钟后胶片自动卷片至第1张，并自动显示胶片感光度（ISO），抽除载物台下面的遮光板。

■ 明亮视野彩色负片自动曝光
⒈ 粗准焦：拉出①②拉杆，调节取景器的屈光度调节环至双十线清晰可辨；全部插入②拉杆，调节准焦旋钮，找到切片平面；
⒉ 色温调节：将切片空白处移至视野中央，拉出②拉杆，色温调节盘转至D，调节③钮至色温平衡显示在黄色三角（此时③钮显示大致在相机标志，色温约为5000～6000）。调定色温后一直到摄影终止，不要对上述步骤进行调整，光亮的调节只能用ND滤光器进行！
⒊ 准焦：插入②拉杆，按常规用双筒目镜对要拍摄的部位进行准焦；
⒋ 拍照：插入①拉杆（或部分插入），拉出②拉杆，自动曝光控制仪显示屏左下角显示曝光时间，一般以0.01～0.50秒之间为好（超过0.50秒需增加倒易律失效补偿）。按下曝光按钮（EXPOSE），自动曝光和卷片；
⒌ 结束：拍照结束后自动倒片，插入①②拉杆，切断电源，按安装相机相反步骤把相机取下，另行保管。

■ 荧光暗视野彩色负片自动曝光
⒈ 接通荧光电源开关（绿色按钮）。关闭荧光电源后必须等候半小时以上才能再开机，以免烧坏荧光电源！
⒉ 接通可见光电源，准焦；
⒊ 插入载物台下遮光板，选用合适的激发波长（WU、WIB或WIG），观察荧光显色；
⒋ 连续按动自动曝光控制仪上的自动曝光选择按钮（MODE/AUTO）直至出现“FL-AUTO”；
⒌ 其余照相步骤同上。如细胞没有布满视野，可选用定点测光（拉出自动曝光本体上的准焦范围选择拉杆，参照使用说明书p.5和p.21）。

■ 注意事项和提示
⒈ 常用的胶卷多为日光型。
⒉ 使用日光型胶片时把灯光型胶片色温平衡（LBD）滤光器④推向后面，请勿扳动。
⒊ 使用彩色胶片时单色反差滤光片插槽⑤里不必放置滤色片。
⒋ 视场光阑和孔径光阑，调到约3/4打开位置，请勿转动。
⒌ 调定色温后一直到摄影终止，不要对各项参数进行调整，光亮的调节只能用ND滤光器（在LBD调节钮后面）进行。
⒍ 关闭荧光电源后必须等候半小时以上才能再开机，以免烧坏荧光电源。
⒎ 在切断电源情况下安装或取下相机。胶卷未照完时取下，相机会自动关闭遮光板，保证胶卷不会感光。取下的相机应放在干燥器内保存。
⒏ 荧光暗视野照相最好选用感光度高的胶卷如ISO=400。
⒐ 本室照相系统配备的照相镜头为PE3.3×，如物镜为10×，则放大倍数为33×。
⒑ 使用完毕请在登记簿作记录。
敬请注意:使用完毕请在登记簿作记录,否则将追究责任。

㈤ 显微镜的使用

1．右手握住镜臂，左手托住镜座。
2．把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右
处）。安装好目镜和物镜。

二、对光
3．转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘
米的距离)。

4．把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开，便于以后
同时画图)。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以

看到白亮的视野。

三、观察
5．把所要观察的玻片标本（也可以用印有“6”字的薄纸片制成）放在
载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。

6．转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼
睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。

7．左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直
到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

㈥ 请问怎么使用这种荧光显微镜照相啊，哦，应该是怎么使用这种落射荧光显微镜看荧光薄片啊

要先知道你要是用激发光的波长，把样品放到合适的激发光下看就可以了，建议你在拍照片时用冷CCD，这样拍出的照片效果会好一些！

㈦ 荧光显微镜的用途

以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。
细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；
2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；
3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。

㈧ 尼康荧光显微镜怎么操作

尼康荧光显微镜的操作手册，你可以去官网下载。
尼康北京办事处应该在长安街东，SK大厦。