冻存细胞的最佳方法

Ⅰ 怎样用液氮罐直接冻存细胞

天驰液氮罐 工作人员建议，细胞株的冻存方法可按以下步骤操作：
（1）取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。
（2）在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。

Ⅱ 细胞冻存液怎么配

10%-15%（常见为10%）的DMSO或甘油，含10%-20%血清的冻存培养液。

一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞。

有人亲测10%血清冻存细胞，结果证明是可以的，但高血清比例的冻存液更有助于提高细胞活力，此外娇贵的细胞可以适当提高冻存液中血清的比例以保证获得更高的存活率及活力。

(2)冻存细胞的最佳方法扩展阅读

细胞冻存和复苏的原则：

慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。

常用的冻存保护剂为二甲基亚砜（DMSO）和甘油，冻存细胞时加入保护剂，一方面可以提高细胞膜对水的通透性，另一方面使冰点降低，延缓冻结过程。

缓慢冻存细胞的过程中，加入保护剂可以使细胞内水分渗出到细胞外，一定程度上减少胞内冰晶的产生，而在快速复苏细胞的过程中，能使胞外冰晶迅速融化，防止水分渗入胞内再次形成冰晶而损伤细胞。

Ⅲ 动物细胞培养中细胞如何冻存

细胞冻存的原则是：冻存缓慢降温，复苏快速升温。不同的动物细胞稍微有点不同，下面是一般的方法：
（一）细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、；
3. 离心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/
min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
（二） 细胞复苏
1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；
3. 离心， 1000rpm，5min；
4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；
5. 次日更换一次培养液，继续培养。

Ⅳ 低温保存细胞的方法,原理与应用

低温保存细胞的原理,冷冻保护剂可以均匀充分地和细胞相接触,保护效果好.对组织而言,保护剂只能作用于其表面,对深层细胞无法起到保护作用.为了提高组织的存活率,应同时控制降温的速率.控制降温速率的慢速降温可以使细胞外溶液中的水结冰,导致细胞外溶液浓度升高,胞内水向膜外渗出,在达到一定温度时,将组织置于滦低温冰箱或液氮中冻存,可以减轻细胞内结晶对细胞的损伤,保持细胞的活性.
慢速冷却低温保存法是目前较为常用的保存方法,其工作程序为：失将细胞放在含有抗冻剂的溶液中进行预处理,接着用程序降温仪将细胞连同溶液以较慢的速度降温.首先是细胞外溶液中的水分结冰使溶液的浓度升高,细胞内的水分透过细胞膜向外渗出,细胞体积收缩,细胞内液的浓度与渗透压增加,冰点下降；随着温度的下降,上述过程继续进行,到一定的温度时迅速降低到一80℃(下冰温度)或一196℃(液氮温度)结冰,并在此温度下长期保存.在零下某一温度结冰时,先是凝结成小冰晶,细小的冰晶对细胞损害较少,但小冰晶表面势能大,往往互相结合成大冰晶.该现象易发生在一30℃一一40℃.大冰晶破坏细胞结构,使细胞坏死.即使小冰晶在冷冻过程中未完全角成大冰晶,在复温过程中也会结成大冰晶,同样导致细胞死亡.不同的细胞要求不同的降温速率,速率过快则在细胞内形成冰晶,在复温过程中细胞内冰晶会产生再结晶,而使细胞损伤.若降温速率过慢,会导致细胞收缩剧烈,并且细胞较长时间处于高渗溶液中也同样会造成细胞的损伤.降温的过程是传热与渗透两个因素相互作用的过程,所谓的最佳降温速率是指这两个因素的最好配合.
应用于低温保存皮肤、气管、血管等生物材料,在临床实践中的应用效果也比较理想.

Ⅳ 我的细胞培养不用血清，冻存要怎么样

细胞培养不用血清，冻存可以用无血清冻存液
配方为细胞条件无血清培养基与含10%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1比1混匀

冻存过程：
消化贴壁细胞或收集悬浮细胞，将细胞悬液收集至离心管并1000rpm离心10分钟，弃上清液
用一定量冻存液将细胞重悬，计数并调整细胞密度至100个每毫升左右
将细胞悬液分装至2ml冻存管中，每管1ml并将冻存管口封，贴上标签做好记录
降温： 4度1小时，负20度1小时，负80度18小时或隔夜，液氮

Ⅵ 干细胞冻存实验中，冻存前多久需要给细胞换上新鲜的培养基

在冻存前一天最好换一次培养液。
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%．15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

Ⅶ 冻存细胞处于什么时期

这要看你冻存的时候是在什么期保种的
一般都选在细胞对数生长期保种（考虑细胞的生长周期，一般提前一天换新鲜的培养基,第二天冻存保种），所以一般大多数细胞的保种属于生长最旺盛的阶段。
有些实验室也没有讲究对数生长期，直接在细胞密度差不多的时候就保种。

Ⅷ 细胞冻存可以一直放在-80℃吗

会有些影响,在活率方面.70%的细胞应该没问题.
1）传统方法: 冻存管置于4℃ 40min--->-20℃ 30min--->-80℃ 16～18h
(或隔夜)--->液氮中长期储存.
注意：-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些.
（2）程序降温：利用已设定程序的程序降温仪以-1～-3℃/min的速度由室温降至（-80℃以下）-120℃,再放在液氮中长期储存.

Ⅸ 细胞冻存液中一般加哪几种有机溶剂，加多少冻存细胞一般是迅速还是

一般加DMSO，采用慢冻速溶的方法能较好的保证细胞存活。

Ⅹ 存储细胞样本用什么液氮罐比较好

你好，好高兴回答你的问题。一般来讲，1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用完全培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；
再总结一句，一般细胞在-80℃存放半年左右，在液氮里可以放置更长时间细胞可以放在冻存管里，吊在液氮罐里，如果存放的数量多，可以选择使用液氮罐提篮（大口径液氮罐另配）。天驰液氮罐 工作人员建议，细胞株的冻存方法可按以下步骤操作：
（1）取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。
（2）在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。
班德液氮罐介绍：液氮罐储存样品使用注意事项有以下几点：
1. 本液氮罐采用冻存盒储存样品。
2.桶壁为高强度铝合金制作，但要防止猛烈碰撞。
3. 后部上方有一黑色塑料盖，内为罐体真空夹层密封口，请勿挤压。
4. 测量液氮液面请用随机配备的测量尺。
5. 液氮罐上配有报警器，请定期检查电池是否有电，电池为常用九伏电池。如更换电池请注意勿扯拉探头连线，以防止线头扯断造成报警失灵。
6. 建议定期用测量尺检查液氮面,以防止报警器失灵造成样品损坏。
7. 建议每次取样品和加液氮应作详细记录以防止漏加(液氮罐为满罐状态，液氮挥发量最小)
你好，好高兴回答你的问题。一般来讲，1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用完全培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；
再总结一句，一般细胞在-80℃存放半年左右，在液氮里可以放置更长时间细胞可以放在冻存管里，吊在液氮罐里，如果存放的数量多，可以选择使用液氮罐提篮（大口径液氮罐另配）。天驰液氮罐 工作人员建议，细胞株的冻存方法可按以下步骤操作：
（1）取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。
（2）在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。