1. 植物多糖的最佳提取方法是什么
植物活性多糖的提取方法有多种,在水提醇沉的基础上,常采用酶解、微波、超声波,膜处理和CO<2>超临界萃取等方法进行辅助提取或精制.最常用的还是水提醇沉法.
举例: 蒽酮比色法,具体步骤
一、仪器、试剂和材料
1.仪器:电子天平,超声波清洗器,电热恒温水浴锅,抽滤设备,分光光度计,容量瓶,刻度吸管等
2.试剂:
(1)葡萄糖标准液:l00 µg/mL
(2)浓硫酸
(3)蒽酮试剂:0.2 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中。当日配制使用。
3.材料:甜高粱,甘草
二.操作步骤
1.葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液:
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准液(mL)
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8
蒸馏水(mL)
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2
葡萄糖含量(µg)
0
10
20
30
40
60
80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴沸腾起计时,准确煮沸l0 min,取出,用冰浴冷却至室温,在620 nm波长下以第一管为空白,迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量(µg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取:将样品粉碎,105 ºC烘干至恒重,精确称取1~5 g,置于50mL三角瓶中,加沸水25mL,加盖,超声提取10 min,冷却后过滤(抽滤),残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤(抽滤),滤液收集在50mL容量瓶中,定容至刻度,得可溶性糖的提取液。
3.稀释:吸取提取液2mL,置于另一50mL容量瓶中,以蒸馏水定容,摇匀。
4.测定:吸取1 mL已稀释的提取液于试管中,加入4.0 mL蒽酮试剂,平行三份;空白管以等量蒸馏水替代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量(µg)。
三、结果处理:
C × V总 × D
样品含糖量(%)= ————————————— × 100%
W × V测 × 106
其中:C——在标准曲线上查出的糖含量(µg),
V总——提取液总体积(mL),
V测——测定时取用体积(mL),
D——稀释倍数,
W——样品重量(g),
106——样品重量单位由g换算成µg的倍数
2. 常用的提取方法有哪些
浸渍法:浸渍法是将原料用适当的溶剂在常温或温热条件下浸泡出有效成分的一种方法。具体做法是:
取适量粉碎后的原料,置于加盖容器中,加入适量的溶剂并密盖,间断式搅拌或震摇,浸渍至规定时间使有效成分浸出。取上清夜,过滤,压榨残渣,合并滤液和压榨液,
过滤浓缩至适宜浓度,
可进一步制备流浸膏,
浸膏,片剂,冲剂等。
按提取温度和浸渍的次数可分为冷浸溃法,热浸溃法,重浸溃法。
渗漉法:渗漉法是将原料粗粉湿润膨胀后装入渗波器内,顶部用纱布覆盖,压紧,浸提溶剂连续地从渗涟器的上部加入,
溶剂渗过原料层往下流动过程中将与有效成分浸出的一种办法。
不断加入新溶剂,
可以连续收集浸提液,
由于原料不断与新溶剂或含有低浓度提取物的溶剂接触,
始终保持一定的浓度差,
浸提效果要比浸溃法高,提取比较完全,但溶剂用量大。渗滚法可分为单渗漉法,重渗漉法,加压渗漉法,逆渗漉法。
煎煮法:煎煮法是指用水作溶剂,将被提物加热煮沸一定时间,以提取其所含成分的一种常用方法,
又称煮提法或煎浸法。
该法是将原料适当的切碎或粉碎成粗粉放入适当容器中,加水浸过原料面,充分浸泡后,加热煎煮2一3
次,每次l
h左右。直火加热,要不断搅拌以免焦糊。分离并收集各次煎出液,经离心分离或沉滤过后,浓缩至所需浓度。该法使用于有效成分能溶于水,
对湿,热均稳定且不易挥发的原料。
回流提取法:
回流提取法是用乙醇等易挥发的有机溶剂提取原料成分,将浸出液加热蒸馏,其中挥发性溶剂馏出后又被冷却,重复流回浸出容器中浸提原料,
这样周而复始,直至有效成分回流提取完全的方法。
回流法提取液在蒸发锅中受热时间较长,故不使用于受热易破坏的原料成分的浸出。
连续提取法:为了弥补回流提取法中需要溶剂量大,操作较繁的不足,可采用连续提取法。当提取的有效成分在所选溶剂中不宜溶解时,
若采用回流提取需提十几次,
既费时又过多耗费溶剂,在此情况下,可用连续回流提取法,用较少的溶剂一次提取便可提取完全。